• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    夏枯草中多糖的提取與含量的測定

    2013-09-05 14:22:00張霞聶少平李景恩李卷梅林慧霞李昌謝明勇
    食品研究與開發(fā) 2013年1期
    關(guān)鍵詞:夏枯草精制蒸餾水

    張霞,聶少平,李景恩,李卷梅,林慧霞,李昌,謝明勇

    (南昌大學(xué)食品科學(xué)與技術(shù)國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,江西南昌 330047)

    夏枯草(Prunella vugarisL.)為唇形科(Labiatae)夏枯草屬(prunella)植物,多年生草本,全球約15種,廣泛分布于歐亞溫帶地區(qū)及熱帶山區(qū),非洲北部及北美洲也有分布,我國產(chǎn)4種3變種,其中1種為引種栽培,主要產(chǎn)于湖南、安徽、浙江、江蘇等地[1-2]。它具有幾千年的藥用歷史,其果穗和全草均可入藥,《神農(nóng)本草經(jīng)》記載其“主寒熱、瘰疬、鼠瘺、頭瘡,破癥,散癭結(jié)氣,腳腫濕痹”,具有清火、明目、清肝、散結(jié)及消腫之功效。

    近年來國內(nèi)外學(xué)者對(duì)夏枯草進(jìn)行了廣泛的研究,尤其在其化學(xué)成分和藥理研究方面作了較深入的探討[3-7],研究表明,夏枯草含有多種活性化學(xué)成分,具有抗菌、降壓、抗炎、抗腫瘤、降血糖等作用[8-12],其中多糖作為夏枯草的重要活性成分也受到廣泛關(guān)注,為了進(jìn)一步研究夏枯草多糖的理化性質(zhì)及活性,為其后續(xù)研究提供實(shí)驗(yàn)理論依據(jù),本實(shí)驗(yàn)對(duì)經(jīng)過前處理去雜質(zhì)后的夏枯草樣品進(jìn)行熱水浸提,得樣品溶液,采用苯酚-硫酸比色法[13-15]測定其多糖含量,實(shí)驗(yàn)中為減少誤差采用精制夏枯草多糖測得夏枯草多糖對(duì)葡萄糖的換算因子。

    1 材料與方法

    1.1 材料與試劑

    夏枯草,粉碎,貯于干燥器中備用。無水乙醇、丙酮、乙醚、氯仿、正丁醇、濃硫酸、苯酚、葡萄糖等試劑除注明外均為分析純。

    1.2 儀器與設(shè)備

    FA1104電子天平:上海精天電子儀器廠;HH-4數(shù)顯恒溫水浴鍋:國華電器有限公司;SHZ-IIIB循環(huán)水真空泵:上海亞榮生化有限公司;TGL-5-A離心沉淀機(jī):上海安亭分析儀器有限責(zé)任公司;EYELAN-1001旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀:廈門精藝興業(yè)科技有限公司;DZG-6050型真空干燥箱:上海森信實(shí)驗(yàn)儀器有限公司;DGG-9140A型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱:上海森信實(shí)驗(yàn)儀器有限公司;CQ超聲微清洗器:上海超聲波儀器廠;透析袋(規(guī)格為 8 000~10 000 Da):Sigma公司;TU-1900雙光束紫可見分光光度計(jì):北京普析通用儀器有限責(zé)任公司。

    1.3 方法

    1.3.1 夏枯草多糖的提取與精制

    稱取經(jīng)干燥粉碎后過20目篩的夏枯草粉末200g,用1 600 mL 80%乙醇浸泡24 h。用雙層濾布過濾,濾渣陰干后,按料水比1∶20 g/mL在90℃熱水中浸提2 h,間歇攪拌,雙層濾布過濾,濾渣重復(fù)提取兩次,合并三次濾液,在4 800 r/min條件下離心分離10 min,在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上進(jìn)行真空濃縮(55℃、50 r/min、真空度0.095 MPa),使?jié)饪s液約為原體積的1/5,然后向濃縮液中加入無水乙醇使乙醇濃度達(dá)70%,于4℃冰箱中醇沉 24 h,再離心分離(4 800 r/min,10 min),棄去上清液,將所得沉淀依次用無水乙醇、丙酮、無水乙醚各洗滌兩次,在55℃條件下真空干燥,得夏枯草粗多糖。將干燥的粗多糖用蒸餾水溶解,采用Sevag法脫蛋白,加入約為樣液體積1/3量的氯仿、正丁醇混合液(氯仿∶正丁醇為4∶1)劇烈振搖10 min,離心分離(4 800 r/min,10 min),分去水層和有機(jī)溶液層交界處的變性蛋白質(zhì)。對(duì)得到的上清液反復(fù)脫蛋白至幾乎無蛋白層,然后將所得溶液先用自來水透析48 h,再用蒸餾水透析24 h,透析完成后,將透析液進(jìn)行真空濃縮(55℃,50 r/min,真空度0.095 MPa),向濃縮液中加入無水乙醇使乙醇濃度達(dá)70%,于4℃冰箱中過夜醇沉,再離心分離(4 800 r/min,10 min),所得沉淀依次用無水乙醇、丙酮、無水乙醚各洗滌兩次,得精制夏枯草多糖,在55℃下真空干燥,所得樣品置干燥器中備用。

    1.3.2 測定波長的確定

    配制一定濃度的精制夏枯草多糖溶液和葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液,精密量取2 mL于具塞試管中,按照1.3.3中所述方法顯色,以等量的蒸餾水作空白,在TU-1900雙光束紫外可見分光光度計(jì)上從400 nm~700 nm進(jìn)行掃描,確定精制夏枯草多糖和葡萄糖的最大吸收波長。

    1.3.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

    標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制:精密稱取105℃干燥至恒重的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品0.250 2 g,置于250 mL容量瓶中,加蒸餾水溶解并稀釋至刻度,然后再取出10mL置于100mL容量瓶中,加蒸餾水至刻度、搖勻,配成100 μg/mL的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液,備用。

    5%苯酚溶液的配制:稱取苯酚100 g,加鋁片0.1 g和碳酸氫鈉0.05 g,常壓蒸餾、收集(180±2)℃餾分。精密稱取該餾分約5 g置于100 mL容量瓶中,加水溶解至刻度,搖勻后轉(zhuǎn)置于棕色試劑瓶中,即得5%苯酚溶液,置于冰箱中備用(現(xiàn)用現(xiàn)配)。

    分別移取 0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2 mL 100 μg/mL的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液于具塞試管中,加蒸餾水補(bǔ)至2 mL,配置成系列梯度的葡萄糖溶液,以2 mL蒸餾水作空白,每管加入5%苯酚溶液1 mL,搖勻,沿管壁緩慢加入濃硫酸各5 mL,迅速搖勻,在室溫下顯色35 min后,于490 nm波長處測定吸光度,以吸光度對(duì)葡萄糖濃度作回歸方程。

    1.3.4 換算因子的測定[16]

    精密稱取干燥至恒重的精制夏枯草多糖100.8 mg,置于100 mL容量瓶中,加蒸餾水溶解并稀釋至刻度,搖勻配成精制多糖貯備液;再吸取2 mL上述儲(chǔ)備液于100 mL容量瓶中,加蒸餾水溶解并稀釋至刻度,搖勻,制得精制夏枯草多糖供試液。采用苯酚-硫酸比色法測定其吸光度,由回歸方程求出此精制夏枯草多糖供試液中葡萄糖濃度,測得其葡萄糖含量,按(1)式計(jì)算換算因子。因夏枯草多糖干燥后溶解性較差,為減少測定誤差,故將按1.3.1中的方法制得多糖透析液真空濃縮后取等量20 mL濃縮液兩份,經(jīng)醇沉洗滌后,一份直接加蒸餾水溶解、定容、比色、測定多糖含量;另一份真空干燥至恒重,稱得精制夏枯草多糖的干重,由二者計(jì)算平均換算因子。

    式中:W為稱取多糖的重量,mg;C為精制夏枯草多糖貯備液中葡萄糖濃度,(mg/mL);D為多糖的稀釋因素,mL。

    1.3.5 樣品中夏枯草多糖含量測定

    稱取3份約5g干燥過的夏枯草粉末樣品,按1.3.1中多糖的提取方法反復(fù)提取,并分別將提取液加蒸餾水定容至100 mL容量瓶中,準(zhǔn)確吸取2 mL,按照1.3.3中的方法測定吸光度,吸光度連續(xù)三次變化不大時(shí),說明樣品中多糖不再溶出,停止提取。合并濾液,在4 800 r/min的條件下離心分離10 min,將上清液在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上進(jìn)行真空濃縮(55℃、50 r/min、真空度0.095 MPa),將濃縮液轉(zhuǎn)移至250 mL容量瓶中,以蒸餾水定容至刻度,搖勻備用;再準(zhǔn)確移取上述溶液5 mL置于100 mL容量瓶中,定容至刻度搖勻制成待測溶液備用。

    精密吸取上述待測液各2 mL于各具塞試管中,按照1.3.3中的方法測定吸光度,由回歸方程計(jì)算樣液中葡萄糖濃度,按(2)式計(jì)算樣品中夏枯草多糖含量。

    多糖含量/%=CDf/W×100 (2)

    式中:C為供試液中葡萄糖濃度,(mg/mL);D為多糖的稀釋因素,mL;f為換算因子;W為供試夏枯草樣品的重量,mg。

    1.3.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

    配置某一濃度的多糖溶液,確保其吸光度在葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性范圍內(nèi),精密吸取該多糖溶液2 mL于具塞試管中,按照1.3.3下的方法測定吸光度,每隔0.5小時(shí)測定1次,連續(xù)2 h考察其穩(wěn)定性。

    1.3.7 精密度試驗(yàn)

    在照1.3.3的方法測定樣品中多糖含量時(shí),將其中某一供試樣品溶液連續(xù)測定6次吸光度,考察試驗(yàn)的精密度。

    1.3.8 重現(xiàn)性試驗(yàn)

    精密稱取5份同一批夏枯草粉末各5 g,按照1.3.5中方法同時(shí)制取5份樣品溶液。精密移取此樣品溶液各2 mL,分別置于具塞試管中,按照1.3.3下的方法測定吸光度,由回歸方程計(jì)算樣液中葡萄糖濃度,按(1)式和(2)式計(jì)算夏枯草多糖含量,考察試驗(yàn)的重現(xiàn)性。

    1.3.9 加標(biāo)回收率測定

    精密稱取5份夏枯草粉末各1 g,按照1.3.5中方法反復(fù)提取濃縮得到浸提液,稱取5份精制夏枯草多糖各約50 mg,用蒸餾水溶解后分別加入前面所得的5份浸提液中,再以蒸餾水定容于250 mL容量瓶中,搖勻,備用。然后分別精密移取10 mL于100 mL容量瓶中,以蒸餾水定容至刻度,搖勻,備用。按照1.3.3的方法測定吸光度,以其平均值作為回收率的計(jì)算結(jié)果。

    2 結(jié)果與討論

    2.1 最大吸收波長

    TU-1900雙光束紫外可見分光光度計(jì)掃描結(jié)果顯示夏枯草樣品溶液在481 nm處有最大吸收,葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液在490 nm處有最大吸收。因?yàn)槭且云咸烟呛繛闃?biāo)準(zhǔn)測定夏枯草中的多糖含量,所以選擇490 nm作為測定波長,結(jié)果如圖2。

    2.2 換算因子

    將真空干燥的精制多糖溶解于水,測得換算因子f為2.122。利用等體積的多糖透析液,醇沉洗滌后,一份直接加蒸餾水溶解,轉(zhuǎn)移至250 mL容量瓶中,加蒸餾水定容,搖勻。再吸取10 mL用蒸餾水定容于100 mL容量瓶中,搖勻后取2 mL于具塞試管中,測其吸光度為0.153。另一份真空干燥至恒重,稱其重量為0.0652g。用這種方法測得換算因子f為2.010,取平均值f為2.066。

    2.3 方法學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果

    葡萄糖溶液標(biāo)準(zhǔn)曲線,見圖1。

    圖1 葡萄糖溶液標(biāo)準(zhǔn)曲線圖Fig.1 Standard curve of glucose solution

    回歸方程為y=0.084 8x,R2=0.999 7。由圖1可見,葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品在10 μg/mL~60 μg/mL范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系。

    夏枯草樣品和葡萄糖光譜掃描圖,見圖2。

    圖2 夏枯草樣品和葡萄糖光譜掃描圖Fig.2 UV spectra of sample and glucose

    為檢驗(yàn)測定方法的正確性、精確度和穩(wěn)定性,本試驗(yàn)進(jìn)行了穩(wěn)定性、精密度、重現(xiàn)性和加樣回收率實(shí)驗(yàn),其結(jié)果分別列于表1~表4。

    從表1~表4可以看出,供試液在2 h內(nèi)顯色穩(wěn)定,精密度(RSD=0.312%),測定結(jié)果重現(xiàn)性好(RSD=1.84%),回收率高(平均回收率為101.9%,RSD=2.01%)。

    表1 穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果Table 1 Results of stability experiments

    表2 精密度試驗(yàn)結(jié)果(n=6)Table 2 Results of precision experiments(n=6)

    表3 重現(xiàn)性試驗(yàn)結(jié)果(n=5)Table 3 Results of reproducibility experiments(n=5)

    表4 加標(biāo)回收率試驗(yàn)結(jié)果(n=5)Table 4 Results of recovery experiments(n=5)

    2.4 夏枯草中多糖含量的測定

    實(shí)際樣品含量測定結(jié)果見表5,夏枯草中多糖平均含量為9.3%。

    表5 夏枯草中多糖含量測定結(jié)果(n=3)Table 5 Determination results of polysaccharides in Prunella Vulgaris Linn(n=3)

    3 結(jié)論

    本實(shí)驗(yàn)采用苯酚-硫酸法測定夏枯草多糖中的糖含量,該方法的依據(jù)是多糖在濃硫酸作用下水解生成單糖,并迅速脫水生成糖醛衍生物,然后與苯酚濃縮合成橙黃色化合物,反應(yīng)過程中顏色穩(wěn)定,在波長490 nm處和一定濃度范圍內(nèi),其吸光度與樣品中多糖含量成正比,符合朗伯-比爾定律,從而可以采用分光光度計(jì)測定其吸光度,并利用標(biāo)準(zhǔn)曲線定量測定樣品中的多糖含量。并且本實(shí)驗(yàn)還通過精密度、穩(wěn)定性、重現(xiàn)性和加樣回收率等試驗(yàn)來驗(yàn)證了苯酚-硫酸比色法測定夏枯草中多糖糖含量的準(zhǔn)確可靠性及簡便快捷性,確定了一種簡便可行的測定夏枯草多糖含量的方法。

    實(shí)驗(yàn)過程中發(fā)現(xiàn)夏枯草多糖水提液應(yīng)盡可能當(dāng)天浸提當(dāng)天測定,因?yàn)樗嵋悍胖脮r(shí)間過長會(huì)被外界環(huán)境中微生物分解,從而含量降低,影響測定結(jié)果。此外因?yàn)橹参锒嗵堑膯翁墙M成比較復(fù)雜,不同單糖的標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率不同,所以用葡萄糖作標(biāo)準(zhǔn)曲線會(huì)引起系統(tǒng)誤差,故實(shí)驗(yàn)過程中采用精制夏枯草多糖計(jì)算換算因子,以避免這種系統(tǒng)誤差,所測結(jié)果明顯高于不使用校正因子所得的結(jié)果。

    夏枯草分布廣泛,資源豐富,化學(xué)成分復(fù)雜,藥理作用廣泛,有重要的臨床應(yīng)用價(jià)值和開發(fā)利用價(jià)值,是一種有潛力的藥物資源。夏枯草多糖具有良好的抗氧化性能,根據(jù)自由基理論,應(yīng)具有開發(fā)為功能性食品的潛在價(jià)值[17]。相信隨著研究的不斷深入,夏枯草將在藥理學(xué)、飲品及保健品行業(yè)發(fā)揮越來越重要的作用。

    [1]中科院中國植物志編委會(huì).中國植物志[M].第1版.北京:科學(xué)出版社,1977:386

    [2]國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典[M].2000年版.北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2000:232

    [3]徐仲仙,周菁齊,徐聲林,等.近年夏枯草化學(xué)成分和生物活性研究概況[J].中成藥,1996,18(11):42-42

    [4]譚慧子,聶少平.夏枯草研究概述[J].江西食品工業(yè),2008(2):38-41

    [5]WANG Zhuju,ZHAO Yuying,WANG Bin,et al.Depsides from Prunella vulgaris[J].Chinese chemical lettes,2000,11(11):997-1000

    [6]WANG Zhuju,ZHAO Yuying,WANG Bin,et al.A New Phenylpropanoid from Prunella vulgaris[J].Journal of Chinese pharmaceutical sciences,2000,9(3):128-130

    [7]HISASHI K,HIDEO T,SHIGEKI S,et al.Two novel hexacyclic triterpenoids from Prunella vulgaris[J].Phytochemistry,1988,27(9):2921-2925

    [8]張瑞.夏枯草多糖對(duì)H IV-1感染者PBMC細(xì)胞因子水平及細(xì)胞凋亡影響的實(shí)驗(yàn)研究[J].河南中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2005,20(1):9-10

    [9]陳鼎祺.夏枯草治療高血壓及防治動(dòng)粥樣硬化[J].中醫(yī)雜志,1999,40(8):453

    [10]Sun Hongxiang,Qin Feng,Pan Yuanjiang.In vitro and in vivo mmunosupp ressive activity of Spica Prunellae ethanol extract on the immune responses in mice[J].Journal of ethnopharmacology,2005,101(10):31-36

    [11]XU Hongxi,Lee S H,Lee S F,et a1.Isolation and characterization of an anti-HSV polysaccharide from Prunella vulgaris[J].Antiviral-Res,1999,44(1):43

    [12]RYU S Y,OAK M H,YOON S K,et al.Anti-allergic and anti-inflammatory triterpenes from the herb of Prunella vulgaris[J].Planta Med,2000,66(4):358-360

    [13]王華付.黃芪中黃芪多糖含量的測定 [J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2007,35(34):10948-11021

    [14]李佳鳳,易春艷,余愛農(nóng),等.南瓜水溶性多糖的含量測定[J].食品研究與開發(fā),2006,27(4):132-133

    [15]張彥民,李寶才,朱利平,等.多糖化學(xué)及其生物活性研究進(jìn)展[J].昆明理工大學(xué)學(xué)報(bào):理工版,2003,28(3):140-145

    [16]傅博強(qiáng),謝明勇,聶少平,等.茶葉中多糖含量的測定[J].食品科學(xué),2001,22(11):69-72

    [17]張德華.夏枯草多糖的分離純化與抗氧化活性研究[J].云南植物研究,2006,28(4):410-414

    猜你喜歡
    夏枯草精制蒸餾水
    逆轉(zhuǎn)脂肪肝,繞不開“精制碳水”之結(jié)
    肝博士(2024年1期)2024-03-12 08:39:04
    鄉(xiāng)間良藥——夏枯草
    保健與生活(2023年9期)2023-05-19 17:23:11
    Analysis of Wastewater Membrane Pollutants in Joint Station and Research on Biological Control Technology
    野馬追倍半萜內(nèi)酯精制工藝的優(yōu)化
    中成藥(2017年10期)2017-11-16 00:50:02
    清肝散結(jié)夏枯草
    貴州夏枯草的抗結(jié)核化學(xué)成分研究
    PTA裝置精制單元預(yù)熱系統(tǒng)改造
    用于蒸餾水機(jī)高溫測量的DPI系列智能測量儀表
    多效蒸餾水機(jī)冷凝水的熱能回收利用
    粗酚精制工藝的研究及應(yīng)用
    河南科技(2014年19期)2014-02-27 14:15:32
    观看美女的网站| 真实男女啪啪啪动态图| 十八禁国产超污无遮挡网站| 久久久精品大字幕| 日韩欧美国产在线观看| 日韩欧美精品免费久久| 大香蕉97超碰在线| 一本一本综合久久| 国产美女午夜福利| 日韩 亚洲 欧美在线| 男插女下体视频免费在线播放| 日韩av在线大香蕉| 插阴视频在线观看视频| 男插女下体视频免费在线播放| 中文乱码字字幕精品一区二区三区 | 性色avwww在线观看| 一本久久精品| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 免费av观看视频| 日韩欧美 国产精品| 免费播放大片免费观看视频在线观看 | 亚洲精品色激情综合| 国产精品久久久久久av不卡| 免费看日本二区| 欧美+日韩+精品| 国产亚洲5aaaaa淫片| 成人特级av手机在线观看| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 久久久国产成人精品二区| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看| 神马国产精品三级电影在线观看| 狂野欧美激情性xxxx在线观看| 久久久色成人| 免费一级毛片在线播放高清视频| 国内精品美女久久久久久| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片 精品乱码久久久久久99久播 | 亚洲精品aⅴ在线观看| 黑人高潮一二区| 国产精品久久久久久av不卡| 色尼玛亚洲综合影院| 国产精品一区二区在线观看99 | 亚洲精品乱久久久久久| 国产人妻一区二区三区在| 夜夜爽夜夜爽视频| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 九九热线精品视视频播放| 欧美xxxx性猛交bbbb| 国产伦精品一区二区三区四那| 寂寞人妻少妇视频99o| 亚洲精品色激情综合| 亚洲最大成人手机在线| 亚洲在线观看片| 成年女人看的毛片在线观看| 在线免费观看的www视频| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 亚洲经典国产精华液单| 国产成年人精品一区二区| 日本一二三区视频观看| 啦啦啦韩国在线观看视频| 中文天堂在线官网| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 韩国av在线不卡| 久久久欧美国产精品| 国产一级毛片七仙女欲春2| 国产高清视频在线观看网站| 能在线免费观看的黄片| 国产精品99久久久久久久久| 草草在线视频免费看| 毛片一级片免费看久久久久| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 高清午夜精品一区二区三区| 色哟哟·www| 亚洲成人久久爱视频| 午夜视频国产福利| 汤姆久久久久久久影院中文字幕 | 毛片一级片免费看久久久久| 精品久久久噜噜| 1000部很黄的大片| 激情 狠狠 欧美| 成年免费大片在线观看| 亚洲色图av天堂| 搡女人真爽免费视频火全软件| 男女视频在线观看网站免费| 一级爰片在线观看| 久久久久久九九精品二区国产| 有码 亚洲区| 成人性生交大片免费视频hd| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 国产精品久久久久久精品电影| 精品久久久久久久末码| 亚洲av成人精品一区久久| 麻豆久久精品国产亚洲av| 国产一区二区在线av高清观看| av女优亚洲男人天堂| 午夜视频国产福利| 最新中文字幕久久久久| 舔av片在线| 国产片特级美女逼逼视频| 色尼玛亚洲综合影院| 日韩av在线大香蕉| 久久精品久久久久久久性| 夜夜爽夜夜爽视频| 免费av不卡在线播放| 自拍偷自拍亚洲精品老妇| 久久精品影院6| 精品久久久久久久末码| 日本三级黄在线观看| 欧美日本视频| 欧美区成人在线视频| 国产淫语在线视频| 国内精品一区二区在线观看| 亚洲精品aⅴ在线观看| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 我要看日韩黄色一级片| 毛片一级片免费看久久久久| 亚洲一区高清亚洲精品| 国产色婷婷99| 九九在线视频观看精品| 少妇被粗大猛烈的视频| 男女国产视频网站| 亚洲国产色片| 老师上课跳d突然被开到最大视频| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 22中文网久久字幕| 爱豆传媒免费全集在线观看| 久久午夜福利片| 久久久国产成人精品二区| 少妇的逼水好多| 日本免费一区二区三区高清不卡| 国产私拍福利视频在线观看| 嫩草影院入口| 国产精品久久电影中文字幕| 亚洲色图av天堂| 婷婷六月久久综合丁香| 久久韩国三级中文字幕| 别揉我奶头 嗯啊视频| 久久久久免费精品人妻一区二区| 亚洲伊人久久精品综合 | 欧美一级a爱片免费观看看| 午夜福利在线在线| 最近手机中文字幕大全| 国产精品野战在线观看| 久久亚洲精品不卡| 亚洲av免费高清在线观看| 夜夜爽夜夜爽视频| 午夜福利网站1000一区二区三区| 日日撸夜夜添| 一级二级三级毛片免费看| av免费在线看不卡| 搡女人真爽免费视频火全软件| 一二三四中文在线观看免费高清| 免费看av在线观看网站| 亚洲在久久综合| 久久久午夜欧美精品| 99九九线精品视频在线观看视频| 青春草国产在线视频| av专区在线播放| 成年女人看的毛片在线观看| 久久久久久伊人网av| 一二三四中文在线观看免费高清| 欧美3d第一页| 国产欧美日韩精品一区二区| 日本-黄色视频高清免费观看| 91aial.com中文字幕在线观看| 久久人人爽人人爽人人片va| 亚洲高清免费不卡视频| 国产v大片淫在线免费观看| 日韩成人伦理影院| 日韩av不卡免费在线播放| 少妇的逼好多水| 国内精品宾馆在线| 亚洲图色成人| 国产黄片美女视频| 日韩中字成人| 在线观看美女被高潮喷水网站| 水蜜桃什么品种好| 成人欧美大片| 国产高潮美女av| 久久人人爽人人爽人人片va| 1024手机看黄色片| 成人美女网站在线观看视频| 久久精品91蜜桃| 亚州av有码| 日韩欧美精品免费久久| 久久人妻av系列| 男人舔奶头视频| 美女内射精品一级片tv| 国产精品不卡视频一区二区| 欧美精品国产亚洲| 欧美高清性xxxxhd video| 小说图片视频综合网站| 久久亚洲精品不卡| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 国产在线男女| 99久久中文字幕三级久久日本| 午夜激情福利司机影院| h日本视频在线播放| 国产一区二区在线av高清观看| 91精品国产九色| 亚洲欧美精品自产自拍| av卡一久久| 国产欧美日韩精品一区二区| 久久亚洲精品不卡| 久久久国产成人精品二区| 网址你懂的国产日韩在线| 有码 亚洲区| 成年av动漫网址| 男的添女的下面高潮视频| 一二三四中文在线观看免费高清| 国产亚洲精品av在线| 久久久久久伊人网av| 久久人人爽人人片av| 国产精品1区2区在线观看.| 欧美一区二区国产精品久久精品| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 久久久久久九九精品二区国产| 99国产精品一区二区蜜桃av| 99久久精品一区二区三区| 久久精品久久久久久噜噜老黄 | 亚洲成人av在线免费| 久久久久久国产a免费观看| 亚洲国产精品久久男人天堂| 国产一区二区三区av在线| 美女cb高潮喷水在线观看| 欧美+日韩+精品| 国产成人精品婷婷| 国产av一区在线观看免费| 自拍偷自拍亚洲精品老妇| 大香蕉97超碰在线| 在线观看66精品国产| 久久久久久国产a免费观看| 色尼玛亚洲综合影院| 国产三级在线视频| 国产麻豆成人av免费视频| .国产精品久久| 一级二级三级毛片免费看| 99热这里只有是精品50| 在线观看一区二区三区| 国产单亲对白刺激| 午夜激情欧美在线| av福利片在线观看| 欧美激情在线99| 欧美变态另类bdsm刘玥| 亚洲18禁久久av| 99热这里只有精品一区| 亚洲精品日韩av片在线观看| 久久99热6这里只有精品| 国产免费福利视频在线观看| 天天躁日日操中文字幕| 中文资源天堂在线| 色综合站精品国产| 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 看非洲黑人一级黄片| 亚洲欧美一区二区三区国产| 亚洲av日韩在线播放| 卡戴珊不雅视频在线播放| 国产在线男女| 国产成人福利小说| 成人综合一区亚洲| 最近最新中文字幕免费大全7| 免费看日本二区| 永久免费av网站大全| 69av精品久久久久久| 中文字幕久久专区| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看 | 久久久久九九精品影院| 国产精品国产高清国产av| 一级毛片电影观看 | 亚洲精品成人久久久久久| 51国产日韩欧美| 全区人妻精品视频| 毛片一级片免费看久久久久| www.av在线官网国产| 中文字幕熟女人妻在线| 欧美变态另类bdsm刘玥| 欧美精品国产亚洲| 天堂网av新在线| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆| 久久久久性生活片| 亚洲精品aⅴ在线观看| 亚洲国产最新在线播放| 国语自产精品视频在线第100页| 听说在线观看完整版免费高清| 欧美一级a爱片免费观看看| 草草在线视频免费看| 国产精品伦人一区二区| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 亚洲人与动物交配视频| 美女大奶头黄色视频| 一区二区三区乱码不卡18| 免费大片黄手机在线观看| 国产精品一区二区在线不卡| 少妇被粗大的猛进出69影院 | 免费看av在线观看网站| 国产黄频视频在线观看| 99热这里只有是精品在线观看| 大话2 男鬼变身卡| www日本在线高清视频| 国产精品一区二区在线观看99| 国产成人av激情在线播放| 少妇被粗大的猛进出69影院 | 韩国精品一区二区三区 | 午夜福利视频在线观看免费| 亚洲伊人久久精品综合| 亚洲国产精品国产精品| 精品久久蜜臀av无| 亚洲图色成人| 国产一区二区在线观看av| 婷婷成人精品国产| 欧美日韩视频精品一区| 免费黄色在线免费观看| 22中文网久久字幕| 最近2019中文字幕mv第一页| 1024视频免费在线观看| 99热6这里只有精品| 最近最新中文字幕大全免费视频 | 成人毛片a级毛片在线播放| 日韩欧美精品免费久久| 插逼视频在线观看| 夜夜骑夜夜射夜夜干| 久久国产精品大桥未久av| 日日爽夜夜爽网站| 看十八女毛片水多多多| 大片免费播放器 马上看| www.av在线官网国产| 日韩成人av中文字幕在线观看| 午夜免费男女啪啪视频观看| www.熟女人妻精品国产 | 久久99热这里只频精品6学生| 97超碰精品成人国产| 欧美国产精品一级二级三级| 午夜免费男女啪啪视频观看| 青春草亚洲视频在线观看| 少妇的逼水好多| 国产精品三级大全| 久久久精品免费免费高清| 国产国拍精品亚洲av在线观看| 亚洲图色成人| av片东京热男人的天堂| 精品亚洲成国产av| 中国三级夫妇交换| 国产xxxxx性猛交| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看| 久久精品国产亚洲av天美| 免费在线观看黄色视频的| 超碰97精品在线观看| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 免费黄色在线免费观看| 视频在线观看一区二区三区| 国产乱来视频区| 男女啪啪激烈高潮av片| 日韩一区二区三区影片| 国产精品偷伦视频观看了| 欧美成人午夜精品| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 最近的中文字幕免费完整| 22中文网久久字幕| 人妻系列 视频| 视频在线观看一区二区三区| 丰满饥渴人妻一区二区三| 在线观看免费日韩欧美大片| 黄网站色视频无遮挡免费观看| 亚洲精品自拍成人| 国产精品一二三区在线看| 婷婷色麻豆天堂久久| 久久精品夜色国产| 黄片无遮挡物在线观看| 美女视频免费永久观看网站| av福利片在线| 国产爽快片一区二区三区| 又大又黄又爽视频免费| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 亚洲av成人精品一二三区| 成年av动漫网址| 亚洲av成人精品一二三区| 久久久久久久国产电影| 亚洲综合色惰| 久久国产精品男人的天堂亚洲 | 久久久欧美国产精品| 狂野欧美激情性xxxx在线观看| 久久精品aⅴ一区二区三区四区 | 中文字幕最新亚洲高清| 97超碰精品成人国产| 久久午夜综合久久蜜桃| 欧美人与善性xxx| 久久综合国产亚洲精品| 免费在线观看完整版高清| 成人漫画全彩无遮挡| 亚洲成av片中文字幕在线观看 | 精品久久久精品久久久| 男女免费视频国产| 亚洲国产色片| 超色免费av| 亚洲成人一二三区av| 亚洲天堂av无毛| 超碰97精品在线观看| 日本午夜av视频| 男人舔女人的私密视频| 日本vs欧美在线观看视频| 国产乱人偷精品视频| av免费在线看不卡| 青春草视频在线免费观看| 国产激情久久老熟女| 精品人妻在线不人妻| 国产精品一区二区在线不卡| 久久久久国产网址| 国产精品久久久久久av不卡| 人体艺术视频欧美日本| 久久久久精品性色| 久久99精品国语久久久| 久久免费观看电影| 热re99久久精品国产66热6| 欧美人与性动交α欧美精品济南到 | 国精品久久久久久国模美| 女性生殖器流出的白浆| 一区二区三区乱码不卡18| 永久网站在线| 水蜜桃什么品种好| 制服诱惑二区| 伊人久久国产一区二区| 欧美bdsm另类| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 久久久久精品人妻al黑| 国产在线视频一区二区| 婷婷色综合大香蕉| 亚洲国产精品成人久久小说| 色网站视频免费| 久久国产亚洲av麻豆专区| 国产不卡av网站在线观看| 亚洲国产欧美在线一区| 高清毛片免费看| 99国产综合亚洲精品| 日本av手机在线免费观看| 日本91视频免费播放| av福利片在线| 激情视频va一区二区三区| 久久久久久久久久久久大奶| av电影中文网址| 精品酒店卫生间| 日本av手机在线免费观看| 国产精品人妻久久久久久| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看| 久久久精品区二区三区| 22中文网久久字幕| 我要看黄色一级片免费的| 国产男女超爽视频在线观看| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 中国美白少妇内射xxxbb| 欧美精品一区二区大全| 国产片特级美女逼逼视频| 亚洲av中文av极速乱| 丝袜在线中文字幕| 色吧在线观看| 国产精品国产av在线观看| 亚洲精品久久午夜乱码| 国产成人精品在线电影| 精品一区二区三区视频在线| av在线观看视频网站免费| 亚洲国产成人一精品久久久| 日韩三级伦理在线观看| 久久亚洲国产成人精品v| 日日爽夜夜爽网站| 亚洲欧美一区二区三区黑人 | 男人舔女人的私密视频| 欧美精品国产亚洲| 国产成人一区二区在线| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 午夜福利网站1000一区二区三区| 激情视频va一区二区三区| 精品国产一区二区久久| 成人综合一区亚洲| 视频中文字幕在线观看| 香蕉丝袜av| 97精品久久久久久久久久精品| 哪个播放器可以免费观看大片| 高清在线视频一区二区三区| 男女边吃奶边做爰视频| 国产在线免费精品| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 国产精品一区二区在线观看99| 午夜福利视频精品| 九草在线视频观看| 观看美女的网站| 亚洲,欧美,日韩| 久久热在线av| 高清视频免费观看一区二区| 人人澡人人妻人| 人妻一区二区av| 欧美性感艳星| 人妻系列 视频| 免费看不卡的av| 精品一区在线观看国产| 亚洲人成网站在线观看播放| 青春草亚洲视频在线观看| 久久久久久久久久成人| 成人漫画全彩无遮挡| 久久亚洲国产成人精品v| 中国国产av一级| 久热这里只有精品99| 国产精品免费大片| 国产xxxxx性猛交| 精品久久蜜臀av无| tube8黄色片| 爱豆传媒免费全集在线观看| 日本91视频免费播放| 亚洲国产av新网站| 国产在线一区二区三区精| 国产一区二区在线观看日韩| 丝袜在线中文字幕| 日韩不卡一区二区三区视频在线| 欧美日韩亚洲高清精品| 欧美日韩精品成人综合77777| 美女视频免费永久观看网站| 如日韩欧美国产精品一区二区三区| 婷婷成人精品国产| 中文字幕人妻熟女乱码| 五月天丁香电影| 国产免费一级a男人的天堂| 女性被躁到高潮视频| 日韩av不卡免费在线播放| 久久久久网色| 国产永久视频网站| 国产精品久久久久久精品电影小说| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 美国免费a级毛片| 国产福利在线免费观看视频| 下体分泌物呈黄色| 亚洲一区二区三区欧美精品| 国产日韩欧美视频二区| 如日韩欧美国产精品一区二区三区| 久热久热在线精品观看| 国产熟女午夜一区二区三区| 在线亚洲精品国产二区图片欧美| 日韩中字成人| 丝瓜视频免费看黄片| 亚洲av.av天堂| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 精品午夜福利在线看| 少妇被粗大的猛进出69影院 | 日韩av免费高清视频| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 欧美精品国产亚洲| 秋霞伦理黄片| 九色成人免费人妻av| 日韩电影二区| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 精品一品国产午夜福利视频| 夫妻午夜视频| 久久精品aⅴ一区二区三区四区 | 69精品国产乱码久久久| 国产爽快片一区二区三区| 色婷婷av一区二区三区视频| 日日啪夜夜爽| 在线观看三级黄色| 考比视频在线观看| 在线观看美女被高潮喷水网站| 亚洲欧美成人精品一区二区| 男女高潮啪啪啪动态图| 午夜福利,免费看| 亚洲精品av麻豆狂野| 老司机影院毛片| 欧美国产精品va在线观看不卡| 成人国语在线视频| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 国产视频首页在线观看| 熟女电影av网| 在线免费观看不下载黄p国产| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 丰满饥渴人妻一区二区三| av福利片在线| 精品亚洲成国产av| 一级片'在线观看视频| 国产又爽黄色视频| 国产高清国产精品国产三级| 国产一区二区三区综合在线观看 | 国产成人精品在线电影| 色婷婷久久久亚洲欧美| 国产精品国产三级专区第一集| 晚上一个人看的免费电影| 国产成人免费观看mmmm| 国产xxxxx性猛交| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久 | 国产精品久久久久久久电影| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 男女啪啪激烈高潮av片| 亚洲成人一二三区av| 亚洲国产av影院在线观看| 男人添女人高潮全过程视频| 久久影院123| 欧美激情极品国产一区二区三区 | 日韩欧美一区视频在线观看| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久 | 国产成人精品久久久久久| 日韩 亚洲 欧美在线| 成人黄色视频免费在线看| 亚洲少妇的诱惑av| 九色成人免费人妻av| 精品少妇黑人巨大在线播放| 丝袜美足系列| 边亲边吃奶的免费视频| 啦啦啦啦在线视频资源| 精品久久久久久电影网| 国产淫语在线视频| 午夜久久久在线观看| 国产成人一区二区在线| 精品卡一卡二卡四卡免费| 男女下面插进去视频免费观看 | 男女免费视频国产| 国产亚洲一区二区精品| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 久久久久久久亚洲中文字幕| 狂野欧美激情性xxxx在线观看| 欧美激情极品国产一区二区三区 |