淡黃花百合愈傷組織增殖最佳培養(yǎng)基的篩選

陳勝玉

摘 要：采用正交試驗(yàn)法，在MS固體培養(yǎng)基上研究不同濃度蔗糖、NAA及6-BA對(duì)淡黃花百合愈傷組織增殖的影響，結(jié)果表明，愈傷組織增殖的最佳培養(yǎng)基為MS+1mg/LNAA+0.5mg/L6-BA+4%-5%蔗糖。

關(guān)鍵詞：淡黃花百合；愈傷組織生長(zhǎng)；正交試驗(yàn)

百合屬的植物除具有極高的觀賞價(jià)值外，還具有藥用和食用價(jià)值，是我國(guó)衛(wèi)生部審批通過(guò)的首批藥食兩用植物，不僅臨床上有著廣泛的應(yīng)用，而且作為加工保健產(chǎn)品的原料也極具開(kāi)發(fā)前景。淡黃花百合是一種藥食兩用的野生種，為多年生宿根草本植物，主要產(chǎn)于貴州省務(wù)川縣，是百合開(kāi)發(fā)的重要資源。但由于近年的大量開(kāi)發(fā)和利用，導(dǎo)致野生淡黃花百合數(shù)量銳減，遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿足市場(chǎng)的需求。務(wù)川當(dāng)?shù)卦捎萌斯ぴ耘嗟姆椒▉?lái)解決供求問(wèn)題，但效果不甚理想。由于百合組織培養(yǎng)繁殖與傳統(tǒng)繁殖方法相比具有節(jié)省用材，繁殖速度快，病害少等優(yōu)點(diǎn)，目前對(duì)百合組培快繁研究較多。因此我們想通過(guò)用組培方式來(lái)擴(kuò)繁淡黃花百合。李黛、談鋒、祝順琴對(duì)淡黃花百合的組織培養(yǎng)技術(shù)已做了一定的研究并成功地篩選出芽增殖的最佳培養(yǎng)基。本文介紹淡黃花百合愈傷組織增殖最佳培養(yǎng)基的篩選。

一、實(shí)驗(yàn)材料與方法

1.實(shí)驗(yàn)材料的獲得

淡黃花百合采自貴州務(wù)川縣野生林下。將新鮮鱗莖用自來(lái)水沖洗干凈、分瓣，取中間層鱗片在自來(lái)水下用流水沖洗30min左右，于超凈工作臺(tái)上用75%的酒精浸泡10s左右，然后用0.1%的升汞消毒15min，再用無(wú)菌水沖洗5～10次。用嚴(yán)格滅菌的解剖工具切去鱗片的上部和下部，留下長(zhǎng)約1cm的中下部，并將其接種在pH值為5.8的MS+0.5mg/L6-BA+1mg/LNAA+3%蔗糖固體培養(yǎng)基中，每瓶接種1～2個(gè)切段，在25℃的溫度、1200lx的光照強(qiáng)度、12h/d的照光時(shí)間的條件下培養(yǎng)36天后可獲得無(wú)菌叢生芽和愈傷組織。將所得的愈傷組織接種到MS+0.5mg/L6-BA+0.5mg/LNAA+3%蔗糖的培養(yǎng)基中擴(kuò)繁，即可得供試驗(yàn)用的材料。

2.實(shí)驗(yàn)方法

采用正交試驗(yàn)篩選愈傷組織增殖的最佳培養(yǎng)基。所用基本培養(yǎng)基為MS培養(yǎng)基。實(shí)驗(yàn)采用L9（3）4正交表，NAA、6-BA、蔗糖濃度三因素三水平的試驗(yàn)設(shè)計(jì)見(jiàn)表1，D因素為空列。

按正交表將各藥品依濃度要求配成培養(yǎng)基，每一個(gè)組合配10瓶，滅菌后在無(wú)菌條件下將愈傷組織接種到培養(yǎng)基中，每瓶接0.5cm見(jiàn)方的愈傷組織1塊，每組10個(gè)重復(fù)，接種好后用電子天平稱(chēng)重并記錄。同樣在25℃的溫度、1200lx的光照強(qiáng)度、12h/d的照光時(shí)間的條件下培養(yǎng)。培養(yǎng)40天后再次用電子天平稱(chēng)重。用第二次稱(chēng)的重量減去第一次稱(chēng)的重量得出每瓶愈傷組織的凈增重（mg/天·gFW）。

二、實(shí)驗(yàn)結(jié)果

淡黃花百合愈傷組織增殖正交試驗(yàn)L9（3）4結(jié)果及直觀分析見(jiàn)表2。對(duì)試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行直觀分析可知6-BA濃度對(duì)淡黃花百合愈傷組織增殖的影響以0.5mg/L為最好，NAA以1mg/L為最好，蔗糖以5%為最好。

比較表2中三個(gè)因素的R值大?。篈因素的R=0.37，B因素的R=1.79，C因素的R=0.72，B因素的R值比A、C因素的R值都大。因此判定B因素是影響淡黃花百合愈傷組織增生的主要因素，而A為次要因素，具體關(guān)系是：

三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果討論

從本次試驗(yàn)看，愈傷組織增殖較快，不易褐變。但在接種時(shí)應(yīng)嚴(yán)格取材為愈傷組織，盡可能不要取到帶芽的愈傷組織塊。研究證明：6-BA濃度的差異對(duì)淡黃花百合愈傷組織增殖的影響以0.5mg/L為最好，NAA以1mg/L為最好，蔗糖以5%為最好。三個(gè)因素對(duì)淡黃花百合愈傷組織增生影響的大小順序?yàn)椋篘AA>蔗糖>6-BA。蔗糖濃度的最佳濃度為5%，但是4%與5%對(duì)百合愈傷組織增殖的影響差異不大。從節(jié)約用材的角度考慮，蔗糖的濃度取4%～5%。故淡黃花百合愈傷組織增殖的最佳培養(yǎng)基為MS+1mg/LNAA+0.5mg/L6-BA+4%-5%蔗糖。

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（作者單位：貴州省畢節(jié)市民族中學(xué)）