3種方法檢測128例兒童肺炎支原體感染結果分析

龔亞東 林牧 馬慶慶 王芳

563000貴州航天醫(yī)院中心實驗室

3種方法檢測128例兒童肺炎支原體感染結果分析

龔亞東 林牧 馬慶慶 王芳

563000貴州航天醫(yī)院中心實驗室

目的：比較3種檢測方法檢查肺炎支原體(MP)感染的結果。方法：收治呼吸道感染患兒128例，均給予MP咽拭子快速培養(yǎng)、血清酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)法檢測和痰MP-DNA-PCR檢測。結果：MP-DNA-PCR法檢出MP陽性8例(6.25%)。IgM ELISA法檢出MP陽性64例(50.2%)。MP咽拭子快速培養(yǎng)測檢出MP陽性25例(24.35%)。各年齡組之間血清MP-IgM檢測法的陽性率比較，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。結論：聯(lián)合采用MP咽拭子快速培養(yǎng)、ELISA法檢測和痰MP-DNA-PCR檢測可以提高MP感染的檢出率。

肺炎支原體；酶聯(lián)免疫吸附試驗；聚合酶鏈反應

肺炎支原體(MP)可引起呼吸道感染，尤其常見于兒童和青少年，其中3%～10%可發(fā)展為支原體肺炎。因細菌、病毒，或MP等病原體引起的兒童呼吸道感染臨床癥狀相似，很難鑒別，不利于臨床治療。目前常用的檢測方法存在一定時限性，不利于早期診斷和治療。本研究旨在探討MP-DNA-PCR法檢測、血清酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)法檢測、MP咽拭子快速培養(yǎng)檢測MP感染的結果，現(xiàn)報告如下。

資料與方法

2015年8月-2016年1月收治呼吸道感染患兒128例，男80例，女48例；病程7～28 d；年齡1個月～12歲，中位年齡31個月。

方法：所有患兒均采用MP咽拭子快速培養(yǎng)、MP-DNA-PCR法檢測和ELISA法進行檢測。MP咽拭子快速培養(yǎng)使用培養(yǎng)液(陜西百盛園生物科技信息有限公司)并按照說明書操作，MP-DNA-PCR的儀器與試劑儀器設備RQ-PCR儀為美國Applied Biosystems real time PCR 7500，試劑為艾康生物技術(杭州)有限公司生產(chǎn)的MP熒光PCR。血清MP-IgM采用深圳博卡生物有限公司的說明書進行操作。①MP咽拭子快速培養(yǎng)：清晨患兒洗漱前用咽拭子取咽部分泌物，用無菌生理鹽水處理咽拭子，接種于預溫培養(yǎng)基中，搖勻后置于37℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)，培養(yǎng)基液體清亮，由紫紅色變?yōu)槟劬G色或草綠色，且靜置時瓶底有藍色顆?；蛭镔|(zhì)沉淀為陽性，5 d后無藍色顆?；蛭镔|(zhì)沉淀或培養(yǎng)基顏色不變?yōu)殛幮?。②痰MP-DNA-PCR法檢測：痰液吸取使用一次性吸痰器取氣管深部分泌物，標本振蕩、離心、去上清液，加入裂解液提取DNA后進行PCR擴增，標本核酸提取嚴格按試劑說明書操作。結果判定：增長曲線呈S型且CT值＜36為陽性。③血清MP-IgM檢測：入院當天采集靜脈血2 mL，用ELISA法檢測，第1份血標本MP-IgM可疑者，5～7 d復查第2份，血清MP-IgM值明顯增高或增高1.5倍也判為急性感染。

統(tǒng)計學處理：采用SPSS 17.0軟件分析數(shù)據(jù)，計數(shù)資料組間比較采用χ2檢驗，不滿足條件采用Fisher確切概率法，P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計學意義。

結果

呼吸道感染的疾病種類及臨床表現(xiàn)：間質(zhì)性肺炎1例，上呼吸道感染14例，大葉性肺炎l8例，支氣管肺炎95例，診斷標準見諸福棠《實用兒科學》第7版?；純褐饕R床表現(xiàn)為氣喘(21.24%)、 噴 嚏 (22.30%)、 流 涕(38.86%)、 發(fā) 熱 (64.77%)、 有 痰(70.47%)、咳嗽(93.78%)，其中101例患兒肺部聽診可聞及干啰音或(和)濕啰音，74例(38.34%)患兒有不同程度的扁桃體腫大，下呼吸道感染患兒胸部X線片可見相應的肺紋理增深或斑片狀陰影改變。

3種方法檢測肺炎支原體感染的結果：MP-DNA-PCR法檢出MP陽性8例(6.25%)，IgM ELISA法檢出MP陽性64例(50.2%)，MP咽拭子快速培養(yǎng)測檢出MP陽性25例(24.35%)。血清MP-IgM檢測過程中，雙份血清送檢100例，單份血清送檢28例。第1份血清檢測MP感染陽性率16.54%(21/128)，雙份血清陽性率18.93%(24/128)，第2份血清抗體轉為陽性11例。

表1 3種方法檢測不同病程階段患兒MP感染陽性率變化

3種方法檢測不同年齡段患兒MP感染情況：血清MP-IgM檢測法的陽性率隨患兒年齡增加而升高，由＜6個月組的7.14%升高至＞3歲組的42.37%，且各年齡組之間血清MP-IgM檢測法的陽性率比較，差異有統(tǒng)計學意義(χ2=389，P= 0.000)。

3種方法檢測不同病程階段患兒MP感染情況：患兒病程≤7 d、＞7 d，第1份血清MP-IgM檢測陽性率分別為16.90 (12/71)、17.54(10/57)。病程早期，咽拭子快速培養(yǎng)的陽性率高于第1份血清MP-IgM檢測結果。見表1。

定量檢測的標準曲線：擴增曲線處除未出現(xiàn)特異性擴增的陰性對照曲線外大致分為3種形態(tài)：①Ct(Cycle threshold)值從12開始上揚的曲線，形狀呈標準的“S”形，說明該樣本中含有的結核分枝桿菌數(shù)量很多；②Ct值從22～26區(qū)間開始上揚的曲線，形狀基本呈“S”形，說明該樣本中含有的肺炎支原體數(shù)量較多；③Ct值從30開始上揚的曲線，形狀暫無法看出呈“S”形，但若再經(jīng)過數(shù)個循環(huán)后便會出現(xiàn)“S”形曲線，說明該樣本中含有一定數(shù)量的結核分枝桿菌，能診斷為肺炎支原體陽性。見圖1。

圖1 Taq酶探針RQ-PCR法檢測陽性標本的標準曲線

討論

MP感染臨床表現(xiàn)無特異性，臨床中易與病毒性感冒相混淆，診斷MP感染的常見方法包括分離培養(yǎng)、血清學診斷和核酸檢測[4]。但分離培養(yǎng)法要求高、時間長，不利于早期診斷，目前PCR對MP感染的早期診斷意義較大[5，6]。但本研究中PCR的敏感性不高，檢測MP感染的陽性率僅4.15%，遠低于文獻的報道[7，8]。但在8例痰MP-DNA PCR法陽性中，咽拭子快速培養(yǎng)法陽性5例，血MP-IgM檢測法陽性7例，故PCR法的特異性是毋庸置疑的。

本研究128例呼吸道感染患兒第1份血清MP-IgM陽性21例，陽性率16.54%，其中100例復查第2份血清，11例由陰性或可疑轉為陽性，陽性率升高18.93%，故雙份血清法可減少漏診。血清MP-IgM檢測法的陽性率隨患兒年齡增加而升高，由＜6個月組的7.14%升高至＞3歲組的42.37%，且各年齡組之間血清MP-IgM檢測法的陽性率比較，差異有統(tǒng)計學意義(χ2=389，P=0.000)，這也與機體免疫系統(tǒng)發(fā)育成熟度相關[9]。年齡越小，免疫系統(tǒng)發(fā)育越不完善，易導致假陰性結果。而咽拭子快速培養(yǎng)法不受機體免疫系統(tǒng)的影響，結果顯示＜6個月組、6個月～1歲組、1～3歲組、＞3歲組的陽性率分別為23.81%、20.00%、19.23%、32.20%，差異無統(tǒng)計學意義。且＜6個月組和6個月～1歲組患兒，血清MP-IgM檢測法的陽性率分別為7.14%和12.50%，明顯低于咽拭子快速培養(yǎng)法，說明咽拭子快速培養(yǎng)法在小年齡組可減少漏診。而且咽拭子快速培養(yǎng)法檢測MP感染陽性率(24.35%)高于第1份血清MP-IgM檢測結果(18.65%)。因此，咽拭子快速培養(yǎng)法更有助于早期診斷。

綜上所述，咽拭子快速培養(yǎng)法和血清MP-IgM檢測法的敏感性均較高，但咽拭子快速培養(yǎng)法的結果可受口腔中食物殘渣、酸性飲料的影響，可能出現(xiàn)假陽性；而血清MP-IgM檢測法易受機體免疫系統(tǒng)的影響而出現(xiàn)假陰性，且雙份血清采集耗時較長。PCR法在本研究中雖然敏感性低，但特異性強。因此3種方法各有特點，臨床上可根據(jù)需要選擇不同方法，聯(lián)合采用3種方法可以提高診斷的陽性率和準確性，有利于早診斷、早治療，可指導抗生素的合理應用。

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安徽投入1.5億元助力健康脫貧

近日，安徽省農(nóng)村貧困人口大病專項救治工作啟動會召開。據(jù)悉，安徽目前經(jīng)過摸底已建立健康脫貧對象個人信息數(shù)據(jù)庫，投入1.5億元專項資金助力健康脫貧，組織27家三級醫(yī)院“組團式”結對幫扶貧困縣醫(yī)院，通過組建醫(yī)聯(lián)體、遠程醫(yī)療和派駐專家等方式開展幫扶工作。

目前，安徽省已經(jīng)完成新農(nóng)合信息系統(tǒng)改造升級和聯(lián)網(wǎng)調(diào)試，基本實現(xiàn)省內(nèi)“一站式”結算。建立貧困人口就診管理組織網(wǎng)絡，實行定點診療、基層首診、分級轉診和雙向轉診。優(yōu)先開展貧困人口家庭醫(yī)生簽約服務，建立電子健康檔案，統(tǒng)一設計制發(fā)《健康脫貧醫(yī)療服務證》。

(據(jù)www.news.cn)

Results analysis of three methods for the detection of mycoplasma pneumoniae infection in 128 cases of children

Gong Yadong,Lin Mu,Ma Qingqing,Wang Fang
The Central Laboratory,Guizhou Aerospace Hospital 563000

Objective:To compare the results of three methods for the detection of mycoplasma pneumoniae(MP)infection. Methods:128 cases of children with respiratory tract infection were treated with MP throat swab culture,serum enzyme linked immunosorbent assay(ELISA)and sputum MP-DNA-PCR test.Results:8 cases had positive MP detected by MP-DNA-PCR (6.25%).64 cases had positive MP detected by(IgM)serum enzyme linked immunosorbent assay(ELISA)(50.2%).25 cases had positive MP detected by rapid culture of MP throat swab(24.35%).There were statistically significant differences of positive rate of serum MP-IgM among all age groups(P＜0.05).Conclusion:Combined the rapid culture of MP throat swab,serum enzyme linked immunosorbent assay(ELISA)and sputum MP-DNA-PCR detection could improve the detection rate of MP infection.

Mycoplasma pneumoniae;Enzyme linked immunosorbent assay;Polymerase chain reaction

10.3969/j.issn.1007-614x.2017.2.81