4種藥物對(duì)烏斑雜交鱧的急性毒性作用

于振海， 朱永安， 孟慶磊， 朱樹人， 王錫榮

(山東省淡水漁業(yè)研究院/山東省淡水水產(chǎn)遺傳育種重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，山東濟(jì)南 250013)

4種藥物對(duì)烏斑雜交鱧的急性毒性作用

于振海， 朱永安， 孟慶磊， 朱樹人， 王錫榮

(山東省淡水漁業(yè)研究院/山東省淡水水產(chǎn)遺傳育種重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，山東濟(jì)南 250013)

采用半靜水式試驗(yàn)方法，在水溫(27.1±1.1)℃、pH值8.01±0.12、溶氧(4.9±0.8)mg/L條件下進(jìn)行敵百蟲、高錳酸鉀、硫酸銅、甲醛4種漁藥對(duì)烏斑雜交鱧魚苗的急性毒性試驗(yàn)。結(jié)果顯示：4種藥物中硫酸銅的96 h半致死質(zhì)量濃度最低，為1.831 mg/L；甲醛的96 h半致死質(zhì)量濃度最高，為58.052 mg/L；4種藥物的毒性大小依次為硫酸銅>敵百蟲>高錳酸鉀>甲醛；4種藥物的安全質(zhì)量濃度大小依次為甲醛(27.615 mg/L)>高錳酸鉀(1.898 mg/L)>敵百蟲(1.012 mg/L)>硫酸銅(0.530 mg/L)。結(jié)果表明：4種藥物中，敵百蟲和甲醛的安全質(zhì)量濃度高于常規(guī)用量，按照常規(guī)用量進(jìn)行病害防治是安全的；高錳酸鉀和硫酸銅的安全質(zhì)量濃度在常規(guī)用量范圍內(nèi)，生產(chǎn)中可按照烏斑雜交鱧對(duì)藥物的安全質(zhì)量濃度進(jìn)行病害防治。

烏斑雜交鱧；急性毒性；半致死質(zhì)量濃度；安全質(zhì)量濃度

烏斑雜交鱧是以烏鱧(Channaargus)為母本、斑鱧(C.maculata)為父本雜交獲得的子一代，具有生長(zhǎng)速度快、成活率高、易馴食膨化顆粒飼料等優(yōu)點(diǎn)[1]。雜交鱧的養(yǎng)殖可改善傳統(tǒng)烏鱧養(yǎng)殖造成的環(huán)境污染，減少對(duì)自然資源的過度利用，穩(wěn)定養(yǎng)殖成本，提高產(chǎn)量和效益，實(shí)現(xiàn)低碳養(yǎng)殖[2]。雜交鱧正在逐漸取代烏鱧成為鱧科魚類的主要養(yǎng)殖品種[3]。

1 材料與方法

1.1 材料

選取健康、游泳活潑、無病、無傷、無畸形的烏斑雜交鱧魚苗進(jìn)行試驗(yàn)，魚苗體長(zhǎng)為(8.5±1.1) cm，體質(zhì)量為(5.2±0.9) g。試驗(yàn)前，在試驗(yàn)條件下暫養(yǎng)3 d，每天投食1次，于試驗(yàn)開始前24 h停止投食。

1.2 試驗(yàn)條件

試驗(yàn)在規(guī)格為60 cm×40 cm×40 cm的白色塑料箱內(nèi)進(jìn)行。試驗(yàn)時(shí)間為2015年8月2—28日，每個(gè)周期為4 d。試驗(yàn)用水為養(yǎng)殖場(chǎng)用深井水，水質(zhì)符合漁業(yè)水質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)(GB 11607—1989)，水溫(27.1±1.1)℃、pH值8.01±0.12、溶氧(4.9±0.8)mg/L。每箱盛水30 L，放入8尾魚苗，每天測(cè)量1次水溫、pH值、溶解氧。

1.3 試驗(yàn)操作

采用半靜態(tài)試驗(yàn)，參照盧玲等的方法[6]在室內(nèi)進(jìn)行。試驗(yàn)期間不投餌。甲醛具有揮發(fā)性，為保證試驗(yàn)藥液的質(zhì)量濃度，每隔24 h更換1次試驗(yàn)藥液。于試驗(yàn)開始和結(jié)束時(shí)分別測(cè)定試驗(yàn)容器中受試物的質(zhì)量濃度。

表1 試驗(yàn)藥物的規(guī)格與成分

1.3.1 預(yù)試驗(yàn) 進(jìn)行預(yù)試驗(yàn)以確定正式試驗(yàn)所需的質(zhì)量濃度范圍。每個(gè)質(zhì)量濃度組放入5尾魚，采用靜態(tài)方式進(jìn)行，不設(shè)平行組，試驗(yàn)持續(xù)48～96 h。每天至少2次記錄各容器內(nèi)的死魚數(shù)，及時(shí)取出死魚。

伴隨著廣西農(nóng)業(yè)取得較大成就的同時(shí)，農(nóng)業(yè)環(huán)境如土地、水過度利用和農(nóng)業(yè)污染等問題日益突出，直接影響到農(nóng)業(yè)供給質(zhì)量，也為鄉(xiāng)村振興戰(zhàn)略的實(shí)施埋下隱患。

1.3.2 正式試驗(yàn) 根據(jù)預(yù)試驗(yàn)結(jié)果，在使魚全部死亡的最低質(zhì)量濃度、96 h魚類全部存活的最高質(zhì)量濃度之間至少設(shè)置5個(gè)質(zhì)量濃度組，以幾何級(jí)數(shù)排布，質(zhì)量濃度間隔系數(shù) ≤2.2[7]。由預(yù)試驗(yàn)得到的4種藥物質(zhì)量濃度見表2。每個(gè)質(zhì)量濃度組設(shè)2個(gè)平行，每個(gè)系列設(shè)1個(gè)空白對(duì)照。將試驗(yàn)溶液調(diào)節(jié)至相應(yīng)溫度后，從馴養(yǎng)魚群中隨機(jī)取魚并隨機(jī)迅速放入各試驗(yàn)容器中。同一試驗(yàn)的試驗(yàn)用魚在30 min內(nèi)完成分組。

表2 試驗(yàn)藥物的質(zhì)量濃度

分別于24、48、72、96 h檢查受試魚的狀況，以試驗(yàn)對(duì)象失去活力、對(duì)外界刺激無反應(yīng)為死亡標(biāo)準(zhǔn)[8]。于試驗(yàn)開始后3 h或6 h觀察各試驗(yàn)組魚苗的狀況，并記錄異常行為。

1.4 數(shù)據(jù)處理

半致死質(zhì)量濃度(LC50)、安全質(zhì)量濃度(SC)采用寇氏法[9]計(jì)算，公式為：

logLC50=xm-d(∑p-0.5)；

(1)

SC=B×0.3/(C/B)2。

(2)式(1)中：xm為死亡組最大劑量的對(duì)數(shù)，LC50為半致死質(zhì)量濃度(mg/L)，d為相鄰質(zhì)量濃度的對(duì)數(shù)差，p為各組的死亡率(%)，∑p為各組死亡率之和(%)。式(2)中：SC為安全質(zhì)量濃度(mg/L)，B為48 hLC50(mg/L)，C為24 hLC50(mg/L)。

2 結(jié)果與分析

2.1 試驗(yàn)觀察結(jié)果

整個(gè)試驗(yàn)過程中，空白對(duì)照組沒有出現(xiàn)死魚現(xiàn)象，即死亡率為0。敵百蟲、高錳酸鉀、硫酸銅、甲醛4種藥物對(duì)烏斑雜交鱧的毒性試驗(yàn)結(jié)果見表3。

硫酸銅、高錳酸鉀、敵百蟲、甲醛最低質(zhì)量濃度組的96 h死亡率分別為0、6.25%、12.50%、12.50%。4種藥物最高質(zhì)量濃度組的24 h死亡率均為100.00%；高錳酸鉀試驗(yàn)組中，7.905、14.057 mg/L質(zhì)量濃度組的24 h死亡率均達(dá)到100.00%(表3)。

表3 各藥物對(duì)烏斑雜交鱧魚苗的致死率

烏斑雜交鱧在敵百蟲藥液中的中毒癥狀表現(xiàn)為：對(duì)外界刺激反應(yīng)遲緩，上下游竄，逐漸失去平衡，最后死亡并沉于箱底。死亡的烏斑雜交鱧體色發(fā)白，體表黏液增多。當(dāng)質(zhì)量濃度為10.000 mg/L時(shí)，烏斑雜交鱧約于1 h出現(xiàn)中毒癥狀，約于2 h開始死亡，24 h死亡率達(dá)100.00%。質(zhì)量濃度為 1.000 mg/L 時(shí)，烏斑雜交鱧無明顯中毒癥狀，24、48、96 h死亡率分別為0、0、12.50%(表3)。

烏斑雜交鱧在高錳酸鉀藥液中的中毒癥狀表現(xiàn)為：不安，反應(yīng)較劇烈，不停游竄，時(shí)而躍出水面，后趨于安靜，逐漸失去平衡，直至最后死亡。死亡后的魚體表皮破損，呈絮狀，顏色為紫黑色。高錳酸鉀質(zhì)量濃度為25 mg/L時(shí)，魚苗約于0.5 h出現(xiàn)中毒癥狀，約于1 h開始死亡，24 h死亡率為100.00%。7.905、14.057、25.000 mg/L質(zhì)量濃度組的24、48、96 h死亡率均達(dá)到100.00%。2.500 mg/L質(zhì)量濃度組的24、48 h死亡率為0，約于90 h出現(xiàn)死亡，96 h死亡率為6.25%(表3)。

烏斑雜交鱧在低質(zhì)量濃度硫酸銅藥液中最初無明顯反應(yīng)，隨著時(shí)間的延長(zhǎng)逐漸表現(xiàn)出中毒癥狀，初期失去平衡后能夠自行恢復(fù)正常姿態(tài)，后期徹底失去平衡并沉于箱底。放入高質(zhì)量濃度組時(shí)，反應(yīng)較為激烈，竄游不安，很快對(duì)外界刺激失去反應(yīng)，最后失去平衡并沉于箱底。當(dāng)硫酸銅質(zhì)量濃度為5.000 mg/L時(shí)，約于0.5 h出現(xiàn)中毒癥狀，約于2 h開始死亡，24 h死亡率為100.00%。0.500、0.889 mg/L質(zhì)量濃度組的24、48 h死亡率均為0，96 h死亡率分別為0、6.25%(表3)。

烏斑雜交鱧在高質(zhì)量濃度甲醛藥液中表現(xiàn)為：焦躁不安，來回游竄，出現(xiàn)浮頭現(xiàn)象，初期能對(duì)外界刺激作出反應(yīng)，后期逐漸失去平衡并沉于箱底。死亡后魚體僵硬，鰓蓋擴(kuò)張，口張開。試驗(yàn)箱中甲醛質(zhì)量濃度為300.000 mg/L時(shí)，魚苗約于0.2 h開始出現(xiàn)中毒癥狀，約于0.5 h開始死亡，24 h死亡率達(dá)100.00%。122.475、191.683 mg/L質(zhì)量濃度組的48、96 h死亡率均為100.00%(表3)。

2.2 半致死質(zhì)量濃度(LD50)和安全質(zhì)量濃度

由式(1)和式(2)得到4種藥物的半致死質(zhì)量濃度和安全質(zhì)量濃度(表4)。4種藥物的24、48、96 h半致死質(zhì)量濃度均為24 h>48 h>96 h，4種藥物的半致死質(zhì)量濃度大小依次為甲醛>高錳酸鉀>敵百蟲>硫酸銅。4種藥物的安全質(zhì)量濃度大小依次為甲醛(27.615 mg/L)>高錳酸鉀(1.898 mg/L)>敵百蟲(1.012 mg/L)>硫酸銅(0.530 mg/L)。

表4 各藥物的半致死質(zhì)量濃度(LC50)及其95%置信區(qū)間、安全質(zhì)量濃度

3 結(jié)論與討論

3.1 4種藥物對(duì)烏斑雜交鱧的毒性評(píng)價(jià)

半致死質(zhì)量濃度(LC50)用來衡量藥物對(duì)試驗(yàn)魚毒性的大小，其值越小則藥物毒性越高，其值越大則藥物毒性越低[10-11]。以96 h為魚類急性毒性分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，分為極高毒(<1 mg/L)、高毒(1～10 mg/L)、中毒(>10～100 mg/L)、低毒(>100 mg/L)4個(gè)等級(jí)[7]。本試驗(yàn)中4種藥物對(duì)烏鱧的 96 h 半致死質(zhì)量濃度依次為甲醛>高錳酸鉀>敵百蟲>硫酸銅，藥物對(duì)烏斑雜交鱧的毒性大小依次為硫酸銅>敵百蟲>高錳酸鉀>甲醛。試驗(yàn)結(jié)果表明，硫酸銅、敵百蟲、高錳酸鉀是高毒藥物，甲醛是中毒藥物。

由表3可知，4種藥物的24、48、96 h死亡率與質(zhì)量濃度梯度均呈正相關(guān)，表明隨著藥物質(zhì)量濃度的增加，藥物對(duì)試驗(yàn)魚的毒性效應(yīng)也相應(yīng)增加。由表4可知，隨著試驗(yàn)的進(jìn)行，魚苗24、48、96 h死亡率依次遞增，4種藥物對(duì)烏斑雜交鱧的半致死質(zhì)量濃度均呈24 h>48 h>96 h的規(guī)律，表明隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，4種藥物對(duì)試驗(yàn)魚的毒性效應(yīng)相應(yīng)提高。

3.2 4種藥物對(duì)烏斑雜交鱧的用藥安全

敵百蟲為膽堿酯酶抑制劑，能將膽堿酯酶的活性點(diǎn)磷酸化而抑制其活性，因其在魚體內(nèi)殘留量少、殘留時(shí)間短而被廣泛用于體外寄生甲殼類、單殖吸蟲、部分腸內(nèi)寄生蠕蟲的防治，常用劑量為0.2～0.5 mg/L[12]。本試驗(yàn)中，敵百蟲對(duì)烏斑雜交鱧的安全質(zhì)量濃度為1.012 mg/L，高于常用劑量，且其在毒性分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)中屬于高毒，因此在烏斑雜交鱧魚苗養(yǎng)殖過程中可采用該藥物進(jìn)行病害防治。

甲醛具有廣譜性殺滅細(xì)菌、寄生蟲、真菌、芽孢、病毒的作用，已被廣泛應(yīng)用于水生動(dòng)物疾病防治，且使用劑量較大，常規(guī)用量為10～30 mg/L[13]。本試驗(yàn)中甲醛的安全質(zhì)量濃度為27.615 mg/L，在常規(guī)用量范圍內(nèi)，其毒性分級(jí)屬于中毒，因此可作為烏斑雜交鱧養(yǎng)殖過程中的病害防治藥物。甲醛使用成本較高，生產(chǎn)中一般采用浸泡方式防治病害。

高錳酸鉀是一種常用的外用消毒藥物，具有很強(qiáng)的氧化性，一般作為消毒劑用于細(xì)菌、真菌、寄生蟲類等疾病的治療和設(shè)施、工具的消毒，生產(chǎn)中的常用遍灑質(zhì)量濃度為1～2 mg/L[10]。本試驗(yàn)中高錳酸鉀對(duì)烏斑雜交鱧的安全質(zhì)量濃度為1.898 mg/L，處于常規(guī)用量范圍內(nèi)，因此高錳酸鉀可作為烏斑雜交鱧養(yǎng)殖過程中的病害防治藥物。

硫酸銅在生產(chǎn)中主要用于殺滅鞭毛蟲、車輪蟲、斜管蟲等寄生蟲，對(duì)殺滅寄生于魚體體表及魚鰓的車輪蟲具有獨(dú)特作用[14]。硫酸銅的常用潑灑質(zhì)量濃度為0.5～0.7 mg/L[15]。本試驗(yàn)中硫酸銅的安全質(zhì)量濃度為0.530 mg/L，在常規(guī)用量范圍內(nèi)，因此硫酸銅可作為烏斑雜交鱧養(yǎng)殖過程中的病害防治藥物。

4種藥物中，敵百蟲、甲醛的安全質(zhì)量濃度均高于常規(guī)用量，按照常規(guī)用量進(jìn)行病害防治是安全的；高錳酸鉀、硫酸銅在常規(guī)用量范圍內(nèi)，生產(chǎn)中可按照烏斑雜交鱧對(duì)藥物的安全質(zhì)量濃度進(jìn)行病害防治。在生產(chǎn)中選用藥物，不僅要考慮藥物的半致死質(zhì)量濃度和安全質(zhì)量濃度，還需綜合考慮藥物的常用質(zhì)量濃度及用藥時(shí)間。

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10.15889/j.issn.1002-1302.2017.02.048

2015-11-18

山東省農(nóng)業(yè)良種工程項(xiàng)目。

于振海(1983—)，男，山東莒縣人，碩士，助理研究員，主要從事養(yǎng)殖工程研究。E-mail：zhenhaiyu-007@163.com。

S948

A

1002-1302(2017)02-0160-03

于振海，朱永安，孟慶磊，等. 4種藥物對(duì)烏斑雜交鱧的急性毒性作用[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2017，45(2)：160-162.