無機(jī)硒對(duì)青年獺兔生產(chǎn)性能及抗氧化性能的影響

楊 杰， 潘孝青， 宋丹丹， 秦 楓， 邵 樂， 李 健， 張 霞， 潘翠玲

(1.江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧研究所，江蘇南京 210014；2.南京農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，江蘇南京 210095)

無機(jī)硒對(duì)青年獺兔生產(chǎn)性能及抗氧化性能的影響

楊 杰1， 潘孝青1， 宋丹丹2， 秦 楓1， 邵 樂1， 李 健1， 張 霞1， 潘翠玲2

(1.江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧研究所，江蘇南京 210014；2.南京農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，江蘇南京 210095)

為了探討硒對(duì)獺兔生產(chǎn)性能及血漿抗氧化能力的影響，將90只初始體質(zhì)量為(690±7.0) g的青年獺兔分為C、SS和D組3組，每組30只(雌雄各半)。C組直接飼喂基礎(chǔ)日糧，SS組和D組日糧添加亞硒酸鈉，經(jīng)測定C組、SS組和D組日糧硒元素含量分別為0.20、0.36、0.75 mg/kg，其他營養(yǎng)指標(biāo)3組均一致，飼養(yǎng)30 d。試驗(yàn)結(jié)果表明：D組試驗(yàn)兔采食0.72 mg/kg硒水平日糧后1周開始出現(xiàn)零星死亡，直至3周后D組試驗(yàn)兔全部死亡。與C組相比，SS組獺兔日增質(zhì)量顯著降低50.5%(P<0.01)，腹瀉率提高16.7百分點(diǎn)，死亡率提高13.4百分點(diǎn)；SS組血液中硒含量與C組相比提高42.96%(P<0.05)；SS組血漿中SOD活性、T-AOC總抗氧化能力與C組相比分別降低19.77%與30.35%(P<0.01)，MDA含量與C組相比提高90.70%(P<0.01)?？梢姡萌占Z中無機(jī)硒添加量安全范圍窄，過量添加會(huì)引起獺兔生產(chǎn)性能及抗氧化能力顯著降低甚至死亡。

硒；兔；生產(chǎn)性能；抗氧化能力；安全范圍

硒是人和動(dòng)物體內(nèi)必需礦物質(zhì)微量元素，人和動(dòng)物對(duì)硒的需要量和耐受量是不同的[1]。動(dòng)物機(jī)體硒缺乏表現(xiàn)為生長停滯、肌肉萎縮、心肌變性并伴有微血管受損、肝壞死，幼畜可出現(xiàn)白肌病；硒缺乏還可導(dǎo)致畜禽繁殖機(jī)能下降，生產(chǎn)性能降低。但是過量的硒會(huì)導(dǎo)致動(dòng)物出現(xiàn)中毒癥狀，豬硒中毒表現(xiàn)為生長遲緩、脫毛、蹄甲變形、運(yùn)動(dòng)失調(diào)、呼吸困難等。所以添加適量的硒對(duì)硒發(fā)揮其生物學(xué)作用是很重要的。

機(jī)體對(duì)硒的攝入量因不同地區(qū)(富硒地區(qū)和缺硒地區(qū))、不同品種以及不同的生長階段而有所不同。1980年美國國家科學(xué)院制定了人的第一個(gè)硒的膳食標(biāo)準(zhǔn)，該膳食標(biāo)準(zhǔn)建議成人的硒的日膳食攝入量約50～200 μg[2]。在2014年6月，中國營養(yǎng)學(xué)會(huì)把硒的日營養(yǎng)攝入最低量從 50 μg/d上調(diào)到60 μg/d。對(duì)于生長豬的日糧硒的需要量，我國推薦量為0.28～0.30 mg/kg，1998年美國NRC標(biāo)準(zhǔn)則公布為0.15～0.30 mg/kg[3]。畜禽中硒日糧攝入推薦標(biāo)準(zhǔn)(NRC，1998)為：火雞0.2 mg/kg，肉雞0.1～0.15 mg/kg，豬0.1 mg/kg。1977年美國NRC標(biāo)準(zhǔn)顯示生長肥育兔硒的需要量是0 mg/kg，泌乳母兔需要量為0.08 mg/kg[4]；李克廣等研究表明，日糧中添加硒可顯著促進(jìn)獺兔繁殖性能提高，最佳劑量為 0.18 mg/kg，但硒添加量差異較大，不能確定獺兔生產(chǎn)中適宜添加量[5]。

本研究是基于課題組在家兔規(guī)模養(yǎng)殖過程中發(fā)現(xiàn)的一個(gè)實(shí)際問題而展開的，目前國內(nèi)外還未針對(duì)皮毛動(dòng)物(獺兔、貂等)提出具體含硒日糧標(biāo)準(zhǔn)，在獺兔日糧加工過程中，為獲得較好皮張品相，往往通過適度過量添加無機(jī)硒來增加獺兔皮張品質(zhì)；但因硒的安全添加量范圍極窄，經(jīng)常引發(fā)硒中毒現(xiàn)象，導(dǎo)致獺兔出現(xiàn)生長遲緩和大面積的被毛稀疏甚至死亡。針對(duì)這一現(xiàn)狀，本研究通過獺兔生產(chǎn)性能的變化以及兔體抗氧化能力等指標(biāo)來探討過量硒對(duì)獺兔生長的影響，旨在為家兔飼料中硒的安全添加提供一定參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物來源及分組

試驗(yàn)所用獺兔來源于江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院六合動(dòng)物科學(xué)基地試驗(yàn)兔場，將90只初始體質(zhì)量為(690±7.0)g的獺兔分為C、SS和D組3組，每組30只(雌雄各半)。C組直接飼喂基礎(chǔ)日糧，不添加亞硒酸鈉，SS組和D組日糧添加亞硒酸鈉，經(jīng)測定，C組、SS組和D組日糧硒元素含量分別為0.20、0.36、0.75 mg/kg(C組未添加亞硒酸鈉，測出的硒元素來源于其他日糧組分)，其他營養(yǎng)指標(biāo)3組均一致，飼養(yǎng)30 d。

1.2 主要試劑及器材

主要試劑：超氧化物歧化酶(SOD)試劑盒、總抗氧化物能力(T-AOC)試劑盒、丙二醛(MDA)試劑盒均購自于南京建成生物有限公司。

主要器材：試管、微量移液器、漩渦混勻器、恒溫水浴鍋、可見分光光度計(jì)等。

1.3 生產(chǎn)性能記錄及樣品采集與處理

生產(chǎn)性能：預(yù)飼期7 d，正試期30 d，在試驗(yàn)開始和結(jié)束時(shí)以個(gè)體為單位對(duì)所有試驗(yàn)兔進(jìn)行空腹稱質(zhì)量；記錄采食量以及腹瀉、死亡情況。正試期30 d結(jié)束即采樣，每組選擇10只體質(zhì)量接近、公母各半的獺兔待收集樣本。兔全血獲?。赫嚻?0 d結(jié)束即采樣，耳緣靜脈采血。準(zhǔn)確吸取一定量兔全血置于聚四氟乙烯消化罐中，加入1 ∶1 HNO33 mL，旋緊消化罐蓋進(jìn)行微波消解，冷卻后再加入1 mL H2O2再次微波消解。用0.2% HNO3定容消化液至10 mL，同時(shí)做試劑空白。兔血漿獲?。赫嚻?0 d結(jié)束即采樣，采血至真空肝素鈉管后 2 500 r/min 低速離心10 min，取上清分離血漿待測。

1.4 全血及皮膚組織中硒含量測定

準(zhǔn)確移取消化液1 mL，用0.2%HNO3逐級(jí)將其稀釋，使硒的濃度在測定線性范圍內(nèi)。用0.2% HNO3逐級(jí)稀釋 1 000 μg/mL 的硒標(biāo)準(zhǔn)溶液至0.100 0 μg/mL作為硒標(biāo)準(zhǔn)工作液，儀器自動(dòng)稀釋配制濃度為20、40、60、80 ng/mL的標(biāo)準(zhǔn)系列。

1.5 氧化性能檢測指標(biāo)及方法

采用相關(guān)試劑盒檢測獺兔血漿中SOD活性和MDA、T-AOC 含量。

1.6 數(shù)據(jù)處理

生產(chǎn)性能及抗氧化性能數(shù)據(jù)經(jīng)過SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)軟件采用單因素方差顯著性檢驗(yàn)分析，數(shù)據(jù)均以“平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)誤”表示。差異判斷標(biāo)準(zhǔn)為：P<0.05表示差異顯著；P<0.01 表示差異極顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 硒對(duì)獺兔生產(chǎn)性能的影響

從表1可知，當(dāng)日糧硒水平為0.36 mg/kg時(shí)(SS組)，與C組相比(日糧硒水平為0.2 mg/kg)，日增質(zhì)量降低50.5%(P<0.01)，腹瀉率提高16.7百分點(diǎn)，死亡率提高13.4百分點(diǎn)。

表1 硒對(duì)獺兔生產(chǎn)性能的影響

注：腹瀉率=∑(腹瀉兔只數(shù)×兔腹瀉天數(shù))/(試驗(yàn)兔只數(shù)×試驗(yàn)天數(shù))×100%；同列標(biāo)注不同小寫、大寫字母分別表示差異顯著(P<0.05)、極顯著(P<0.01)；N：表示試驗(yàn)結(jié)束時(shí)試驗(yàn)兔全部死亡。

2.2 硒在獺兔血液及皮膚組織中的沉積變化

從表2可知，當(dāng)日糧硒水平為0.36 mg/kg時(shí)(SS組)，與C組相比(日糧硒水平為0.2 mg/kg)，血液中硒含量顯著提高42.96%(P<0.05)，表明SS組日糧硒水平已明顯高于C組，此結(jié)果與表1中的SS組獺兔生產(chǎn)性能相對(duì)應(yīng)，表明硒元素已在SS組獺兔血液中大量累積并造成一定程度中毒。

表2 獺兔全血和皮膚中的硒含量

2.3 硒對(duì)兔血漿SOD活力的影響

如圖1所示，SS組獺兔血漿中SOD活性降低了19.77%(P<0.01)。

2.4 硒對(duì)兔血漿T-AOC的影響

如圖2所示，SS組獺兔血漿中T-AOC降低了30.35%(P<0.01)。

2.5 硒對(duì)兔血漿MDA含量的影響

如圖3所示，SS組獺兔血漿組織中MDA含量升高了90.7%(P<0.01)。

3 小結(jié)與討論

3.1 硒對(duì)兔生產(chǎn)性能的影響

馮婧等研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)?shù)傍嗭暳现形教砑拥?.08～0.16 mg/kg時(shí)，蛋鴨生長處于高峰平臺(tái)，但當(dāng)硒添加水平為0.36～0.66 mg/kg時(shí)，蛋鴨的生長性能有降低的趨勢[6]。高宏偉等在研究中發(fā)現(xiàn)，在獺兔日糧中添加不同劑量的硒飼喂60 d時(shí)，以硒水平0.25 mg/kg組的平均日增質(zhì)量(average daily gain，ADG)最高，并且差異顯著(P<0.05)；再繼續(xù)提高硒水平為0.4、0.55、0.7 mg/kg的情況下，ADG有下降的趨勢[7]。陳明濤研究表明：飼料中硒水平為0.317 mg/kg時(shí)，對(duì)小鼠的生產(chǎn)性能有明顯的促進(jìn)作用；當(dāng)硒水平增加為1.586、7.93 mg/kg時(shí)，小鼠的生產(chǎn)性能明顯降低[8]。本研究結(jié)果也顯示，D組試驗(yàn)兔采食0.75 mg/kg硒水平日糧后1周開始出現(xiàn)零星死亡，直至3周后D組試驗(yàn)兔全部死亡。SS組硒水平為0.36 mg/kg時(shí)，與C組(日糧硒水平為 0.2 mg/kg)相比獺兔日增質(zhì)量降低50.5%(P<0.01)，腹瀉率提高16.7百分點(diǎn)，死亡率提高13.4百分點(diǎn)。這說明日糧中硒水平為 0.36 mg/kg 及以上時(shí)，對(duì)青年獺兔的正常生長需求是過量的，而過量的硒可能產(chǎn)生過氧化的作用損傷細(xì)胞抗氧化能力，從而導(dǎo)致兔體生長受阻甚至死亡。本試驗(yàn)中所選擇的0.20、0.36、0.75 mg/kg 3個(gè)梯度，從結(jié)果來看，青年獺兔日糧硒水平在0.75 mg/kg時(shí)已出現(xiàn)大量死亡現(xiàn)象，說明硒水平在高于0.75mg/kg時(shí)的日糧不能用于獺兔飼喂，這一結(jié)果對(duì)生產(chǎn)有現(xiàn)實(shí)指導(dǎo)意義；本研究團(tuán)隊(duì)下一步將在0.20～0.36 mg/kg 含量間重新設(shè)定梯度試驗(yàn)，以期精準(zhǔn)確定獺兔日糧中硒的安全添加量范圍。

3.2 不同硒含量日糧在獺兔血液及皮膚組織中的累積效應(yīng)

伊小平研究表明，過量的硒飼喂雞，隨著硒的不斷攝入，硒在血液和組織中的含量增加，并引起慢性中毒癥狀[9]。張艷艷研究表明，在日糧中添加硒水平分別為0、0.15、0.30、0.45、0.60 mg/kg，飼喂斷奶肉兔30 d后，隨硒添加水平的增加肝臟中硒沉積極顯著增加，硒水平為0.45 mg/kg時(shí)，肝臟硒沉積量達(dá)到最大，硒水平為0.6 mg/kg時(shí)肝臟硒沉積量增加不顯著[10]。管延杰研究表明，用亞硒酸鈉低劑量組(0.14 mg/kg)、中劑量組(0.54 mg/kg)、高劑量組(2.16 mg/kg)及對(duì)照組(0.00 mg/kg)對(duì)雄性昆明小鼠進(jìn)行灌胃后，小鼠脾臟硒含量明顯上升，并且隨著劑量的增加和灌胃時(shí)間的延長呈明顯的上升趨勢[11]。田園等研究表明，給大鼠補(bǔ)充硒水平為3、6、10、15 mg/kg的亞硒酸鈉后，硒在大鼠肝臟、血漿及紅細(xì)胞中的蓄積量隨著硒水平的增加而增多[12]。Zhang等研究表明飼喂BALB/c小鼠硒水平為0.045、0.1、0.4、0.8 mg/kg的日糧56 d后，飼喂硒水平為0.8 mg/kg的小鼠肝臟和腎臟中的硒含量顯著高于飼喂硒水平為 0.045 mg/kg 和0.1 mg/kg的小鼠[13]。本研究也發(fā)現(xiàn)相類似的結(jié)果，SS組日糧添加硒水平0.36 mg/kg的亞硒酸鈉可顯著提高獺兔血液中硒含量(P<0.05)，這一結(jié)果引起的慢性中毒效應(yīng)與表1相對(duì)應(yīng)，導(dǎo)致了SS組獺兔生產(chǎn)性能的顯著降低。

3.3 硒對(duì)兔血漿抗氧化能力的影響

張?jiān)谙愕妊芯堪l(fā)現(xiàn)，在低硒酵母飼料的基礎(chǔ)上添加硒水平為0.2和5.0 mg/kg(適硒和高硒)的亞硒酸鈉，飼喂斷乳雄性Wistar大鼠20周后，高硒組的血漿細(xì)胞內(nèi)谷胱甘肽過氧化物酶GPx活性與適硒組比較顯著下降[14]。張偉民等通過增加飼料中硒含量來探究籠養(yǎng)蛋雛鴨抗氧化能力的結(jié)果表明，雛鴨血清和肝臟的T-AOC水平呈明顯的先上升后下降的趨勢[15]。張艷艷等在日糧不同硒水平對(duì)2～3月齡肉兔抗氧化能力的影響研究中發(fā)現(xiàn)，硒水平為0.6 mg/kg添加組的兔血清SOD活性比硒水平分別為0、0.15、0.30、0.45 mg/kg 添加組的兔血清SOD活性顯著降低[16]。Zhang等研究表明飼喂BALB/c小鼠硒水平為0.045、0.1、0.4、0.8 mg/kg 的日糧56 d后，0.8 mg/kg時(shí)小鼠肝臟MDA含量最高，并且SOD和GPx的活性顯著降低[13]。在本試驗(yàn)中，SS組獺兔所食日糧總硒0.36 mg/kg，獺兔血漿中SOD活性和 T-AOC總抗氧化能力極顯著降低，而MDA含量極顯著升高，提示過量的硒可引起獺兔機(jī)體抗氧化能力下降。

而目前關(guān)于硒中毒的真正機(jī)理并不完全清楚。Seko等在1989年提出谷胱甘肽能夠使亞硒酸鹽中的Se(Ⅳ)還原成Se(Ⅱ)，Se(Ⅱ)與氧反應(yīng)產(chǎn)生氧自由基ROS，造成細(xì)胞損傷，從而使機(jī)體受到氧化損傷[17]。本研究中發(fā)現(xiàn)的獺兔血漿中抗氧化能力下降這一現(xiàn)象，可能是由于硒的過量導(dǎo)致細(xì)胞氧化應(yīng)激，產(chǎn)生過多的氧自由基，擾亂GPx、SOD等各種抗氧化物酶的合成及生化功能，從而導(dǎo)致機(jī)體抗氧化能力下降，推測這一結(jié)果可能是SS組獺兔生產(chǎn)性能顯著下降的主要原因。

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10.15889/j.issn.1002-1302.2017.02.044

2016-10-21

江蘇省農(nóng)業(yè)科技自主創(chuàng)新資金[編號(hào)：CX(14)2078]。

楊 杰(1972—)，男，安徽蒙城人，碩士，副研究員，主要從事家兔飼料營養(yǎng)調(diào)控研究。E-mail：jieyangbwx@hotmail.com。

S829.15

A

1002-1302(2017)02-0149-03

楊 杰，潘孝青，宋丹丹，等. 無機(jī)硒對(duì)青年獺兔生產(chǎn)性能及抗氧化性能的影響[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2017，45(2)：149-151.