FDP試劑在Sysmex CS5100全自動凝血分析儀上使用的性能評估

陳登鍇

【摘要】 目的：驗證日本積水（Sekisui）醫(yī)療株式會生產(chǎn)的FDP試劑盒在日本Sysmex公司CS5100全自動凝血分析儀檢測FDP的分析性能。方法：參照臨床和實驗室標(biāo)準(zhǔn)協(xié)會（Clinical and Laboratory Standars Institute，CLSI）及其他相關(guān)文獻(xiàn)，檢測FDP檢測系統(tǒng)的精密度、準(zhǔn)確性、分析測量范圍、可報告范圍、樣本針的攜帶污染、抗干擾能力和參考范圍，并與試劑說明書的質(zhì)量性能進行比較。結(jié)果：FDP批內(nèi)變異系數(shù)<5%；批間變異系數(shù)<5%。FDP的線性方程為Y=0.9853X+1.4031，r2=0.9993，r2>0.975，在2.5～120 μg/mL范圍內(nèi)，F(xiàn)DP結(jié)果呈線性。檢測高值標(biāo)本時稀釋倍數(shù)不宜超過8倍，以保證結(jié)果的準(zhǔn)確性?？垢蓴_實驗：在游離型膽紅素和結(jié)合型膽紅素<20.0 mg/dL，溶血血紅蛋白<500 mg/dL，乳糜濁度<3000 CM的情況下，對FDP的檢測影響均不明顯，相對偏差均<10%。參考區(qū)間驗證：檢測20個健康體檢者的FDP值結(jié)果均在廠商提供的生物參考區(qū)間FDP<5.0 μg/mL范圍內(nèi)。結(jié)論：日本積水公司生產(chǎn)的FDP試劑盒及標(biāo)準(zhǔn)品和質(zhì)控品在Sysmex CS5100全自動凝血分析儀上檢測FDP系統(tǒng)主要分析性能驗證結(jié)果與廠家提供的分析性能一致，符合質(zhì)量目標(biāo)的要求。

【關(guān)鍵詞】 FDP； 全自動凝血分析儀； 性能； 評估

【Abstract】 Objective：To verify the Japanese Sekisui medical strains will produce FDP kit in Japan Sysmex CS5100 Automatic Coagulation Analyzer to detect FDP analysis performance.Method：According to clinical and laboratory standards institute and other relevant documents，the FDP system precision，accuracy，measurement range，reportable range，sample carryover needle，the anti-interference ability and the reference range were detected，and quality performance and kit were compared.Result：The within-run coefficients of variations（CV）were less than 5.0%，between-run coefficients of variations（CV）were less than 5.0%.The linear equation of FDP was Y=0.9853X+1.4031，r2=0.9993，r2>0.975，its linear was 2.5-120 μg/mL.It was not more than 8 times to detect high value samples to ensure the accuracy of the results.Interference test：there was no obvious interference observed when the concentration of free bilirubin or conjugated bilirubin <20.0 mg/dL，hemoglobin<500 mg/dL，and turbidity chyle<3000 CM in the sample.The relative deviation was <10%.Reference range：the measured results of FDP in 20 normal individuals were all in the reference interval of producers.Conclusion：The main performance index of the reagent for the FDP made in Japanese Sekisui on sysmex CS5100 automatic coagulation analyzer consistent with the analysis of the manufacturers performance，and meet the requirements of quality objectives.

【Key words】 FDP； Automatic coagulation analyzer； Performance； Evaluation

First-authors address：Fujian Provincial Maternal and Child Health Hospital，F(xiàn)uzhou 350001，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2016.36.034

纖維蛋白（原）降解產(chǎn)物（fibrin degradation products，F(xiàn)DP）是指當(dāng)機體纖溶亢進時，血中纖溶酶降解血漿中的纖維蛋白和纖維蛋白原的各種降解產(chǎn)物，包括X、X、Y、Y、A、B、C、H、D、D-二聚體等，統(tǒng)稱為FDP，是繼發(fā)性和原發(fā)性纖溶系統(tǒng)亢進的判定指標(biāo)[1]。作為纖維蛋白特殊降解產(chǎn)物的D-二聚體和FDP較凝血酶原時間、血小板等更早出現(xiàn)，可輔助診斷前期DIC[2]。DIC是在某種致病因素的作用下，全身小血管內(nèi)廣泛微血栓的形成及繼發(fā)性纖溶亢進的一種綜合征[3]。由于現(xiàn)有的檢測方法可快速、敏感、特異地檢測血中D-二聚體和FDP水平，故在臨床應(yīng)用尤為廣泛。本研究應(yīng)用Sysmex公司CS5100全自動凝血分析儀，根據(jù)臨床和實驗室標(biāo)準(zhǔn)協(xié)會（Clinical and Laboratory Standars Institute，CLSI）要求[4-5]，對日本Sekisui FDP試劑盒檢測FDP的精密度、準(zhǔn)確度、靈敏度、分析測量范圍、可報告范圍、樣本針攜帶污染、抗干擾性能等方面進行臨床應(yīng)用評價。endprint

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑 （1）儀器：日本Sysmex公司CS5100全自動凝血分析儀。（2）參數(shù)：樣本量為10 μL，試劑量為R1∶100 μL，R2∶100 μL。（3）試劑：日本積水（Sekisui）醫(yī)療株式會社生產(chǎn)的FDP試劑（批號為817REK）；質(zhì)控品批號為827REJ；干擾物批號為ZS6003。

1.2 標(biāo)本 本院住院患者或正常體檢者新鮮全血，按1∶9的比例與109 mmol/L的枸櫞酸鈉抗凝劑混勻抗凝，3500 r/min下離心10 min，以取得少血小板血漿，并在2 h內(nèi)完成檢測。

1.3 方法

1.3.1 質(zhì)量控制 每天開機進行日常保養(yǎng)，檢測質(zhì)控品，所有實驗必須在質(zhì)控結(jié)果在控的前提下進行，質(zhì)控的控制范圍為L∶7.1～13.1 μg/mL；

H∶23.8～35.8 μg/mL。

1.3.2 精密度 批內(nèi)精密度，根據(jù)CLSI EP15-A2文件[4-6]，取混合血漿（接近參考值/醫(yī)學(xué)決定水平）、高值質(zhì)控樣本、低值質(zhì)控樣本，分別連續(xù)測定10次，所有檢測在2 h內(nèi)完成，計算平均值（X）、標(biāo)準(zhǔn)差（SD）和變異系數(shù)（CV）。

1.3.3 正確度 （1）不同批標(biāo)準(zhǔn)品的測定：使用廠家提供的有注冊證的5個水平配套校準(zhǔn)品，各校準(zhǔn)品濃度分別測定3次，計算平均值，并與定標(biāo)值進行比較考核，偏差范圍應(yīng)≤5%。（2）方法學(xué)相關(guān)性的參考：根據(jù)CLSI EP-9A對能力比對與偏差評估的相關(guān)要求[6]，選取60例以上標(biāo)本（樣本應(yīng)分為高中低三種濃度，均勻分布在分析測量范圍內(nèi)），在對照檢測系統(tǒng)上和考核檢測系統(tǒng)上各進行1次測定，進行相關(guān)系數(shù)曲線的擬合，相關(guān)系數(shù)應(yīng)r≥95%。

1.3.4 分析測量范圍 根據(jù)CLSI EP6-A對分析測量范圍的相關(guān)要求，取高值血漿標(biāo)本和接近零值的血漿標(biāo)本進行配置，按0∶10、1∶10、2∶10、3∶10、4∶10、5∶10、6∶10、7∶10、8∶10、9∶10和10∶10配制成11個濃度梯度，重復(fù)檢測2次。計算每個濃度的平均值、標(biāo)準(zhǔn)差及變異系數(shù)，擬合一條曲線，分別計算每個濃度檢測平均值Xs與理論濃度值Xs偏差。

1.3.5 可報告范圍 使用定值的高值樣本，以儀器自動稀釋模式進行2×、4×、5×、8×、10×、20×的測定，稀釋模式下的計算結(jié)果與理論值進行比較，偏差在20%以內(nèi)，則可視為可接受的稀釋倍數(shù)。可接受的稀釋倍數(shù)×線性上限=臨床可接受的最高報告范圍。

1.3.6 樣本針的攜帶污染 檢測一組樣本（3次高值→3次生理鹽水→FDP），試驗重復(fù)5次。計算攜帶污染的平均污染量，平均污染量≤5%。

1.3.7 抗干擾性能 選用4種已知干擾物質(zhì)（游離型膽紅素，結(jié)合型膽紅素，溶血血紅蛋白及乳糜）和空白液分別與混合血漿進行混合，混合后的兩個濃度分別進行配制，形成8組具有6個干擾物濃度梯度的樣本（高、低值各4組），每個樣本重復(fù)測定2次。計算平均值，各平均結(jié)果與空白對照樣本的偏移量應(yīng)≤±10%，結(jié)果可接受。

1.3.8 參考區(qū)間的驗證 選取20例正常體檢的標(biāo)本驗證參考范圍的適用性。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS.19.0軟件及Microsoft office Excel軟件匯總統(tǒng)計及繪制圖表。

2 結(jié)果

2.1 質(zhì)控結(jié)果 質(zhì)控結(jié)果均落在x±s范圍內(nèi)，顯示在控，可進行后續(xù)的實驗。

2.2 精密度 Control L為低水平、Control H為高水平，批內(nèi)CV均<5%，見表1。

2.3 正確度 （1）不同批標(biāo)準(zhǔn)品的測定：檢測的5個水平標(biāo)準(zhǔn)品的均值，分別與定標(biāo)值比較，偏差范圍分別為1.01%、1.25%、2.81%、1.85%、4.01%，均≤5%。（2）方法學(xué)相關(guān)性的參考：本實驗用CS5100配套的BIOLINK試劑作對照檢測系統(tǒng)，對64例標(biāo)本進行測定，結(jié)果如圖1，直線方程Y=0.508X-0.261，相關(guān)系數(shù)r=0.984。

2.4 分析測量范圍 結(jié)果分析見表2，回歸曲線見圖2，線性方程為Y=0.9853X+1.4031。r2=0.9993，r2>0.975，斜率a在0.97～1.03范圍內(nèi)。本實驗驗證了在2.5～120 μg/mL范圍內(nèi)，F(xiàn)DP結(jié)果呈線性。

2.5 可報告范圍 實驗結(jié)果顯示，結(jié)果偏差范圍在20%以內(nèi)的稀釋倍數(shù)為8倍，故可報告范圍為120×8=960 μg/mL。

2.6 樣本針攜帶污染 結(jié)果顯示平均污染率為0.30%，小于規(guī)定的5%，則樣本針攜帶污染評價為合格，見表3。

2.7 抗干擾性能 在游離型膽紅素和結(jié)合型膽紅素<20.0 mg/dL，溶血血紅蛋白<500 mg/dL，乳糜濁度<3000 CM的情況下，對FDP的檢測影響均不明顯，相對偏差均<10%，見表4。

2.8 參考區(qū)間驗證 檢測20個健康體檢者的FDP值均落在0.5～4.0 μg/mL，平均（1.53±0.28）μg/mL，結(jié)果均在廠商提供的生物參考區(qū)間FDP<5.0 μg/mL范圍內(nèi)。

3 討論

正常情況下，人體內(nèi)的促凝與抗凝系統(tǒng)呈動態(tài)平衡，各種促凝及抗凝物質(zhì)的相互作用與相互制約形成了凝血自我調(diào)控過程[7-9]。FDP有抗凝血酶及抗血小板聚集功能，在生理情況下可防止微循環(huán)形成[2]。血中FDP濃度的高低與機體纖溶系統(tǒng)活性程度成正比，F(xiàn)DP升高，表示纖溶活性增強[10]，提示體內(nèi)存在著頻繁的纖維蛋白降解過程。結(jié)合D-二聚體檢測，可用于原發(fā)性和繼發(fā)性纖溶亢進的鑒別[11]。FDP的增高是診斷彌漫性血管內(nèi)凝血（DIC）的實驗指標(biāo)之一，是孕期凝血功能監(jiān)測、術(shù)后危重患者、嚴(yán)重感染、惡性腫瘤、羊水栓塞等嚴(yán)重疾病的重要觀察指標(biāo)之一[12-16]。臨床上選擇快速簡便且準(zhǔn)確性高的方法檢測FDP尤為重要[17]。endprint

FDP的檢測由早期的定性、半定量發(fā)展為定量分析，方法學(xué)由手工操作的ELISA、膠體凝集法到可自動化操作的膠體免疫比濁法[18-19]，其檢測速度和定量的靈敏度與特異性都明顯提高。本實驗室使用的日本積水公司的FDP試劑采用乳膠凝集比濁法，標(biāo)本中的FDP與鼠抗FDP單克隆抗體膠乳粒發(fā)生抗原抗體反應(yīng)，產(chǎn)生凝聚以致濁度上升。通過分光光度計測定濁度變化率，從而測得FDP的濃度。由于其干擾因素少，精密度和準(zhǔn)確性高，得到廣泛的應(yīng)用[20]。

本驗證結(jié)果顯示，日本積水公司的FDP試劑在Sysmex CS5100全自動凝血分析儀上批內(nèi)和批間的變異系數(shù)均≤5%，說明該檢測系統(tǒng)具有良好的重復(fù)性和穩(wěn)定性。檢測下限低于廠家提供的參考范圍，提示有較好的靈敏度。在分析測量范圍的驗證中計算相關(guān)系數(shù)r=0.9853，提示檢測值與預(yù)期值相關(guān)系數(shù)線性良好。當(dāng)稀釋倍數(shù)超過8倍時，結(jié)果偏差范圍超過10%，提示檢測高值標(biāo)本時稀釋倍數(shù)不宜超過8倍，否則影響準(zhǔn)確性。樣本針攜帶污染的驗證結(jié)果顯示平均污染率為0.30%，小于規(guī)定的5%，提示樣本針攜帶污染合格，可忽略?？垢蓴_性能的驗證結(jié)果提示檢測系統(tǒng)有良好的抗干擾能力，則對標(biāo)本的要求就相對較低。由20例健康體檢者的檢測結(jié)果統(tǒng)計的參考區(qū)間落在廠家提供的參考區(qū)間內(nèi)，提示引用的參考區(qū)間適用用本實驗體系。

本研究對日本積水公司生產(chǎn)的FDP試劑盒及標(biāo)準(zhǔn)品和質(zhì)控品在Sysmex CS5100全自動凝血分析儀上檢測FDP系統(tǒng)進行了質(zhì)量性能的評價，提示檢測FDP的主要分析性能驗證結(jié)果與廠家提供的分析性能一致，符合質(zhì)量目標(biāo)的要求，可供臨床使用。

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（收稿日期：2016-10-12） （本文編輯：張爽）endprint