多聯(lián)袋手工法快速制備冰凍去甘油紅細(xì)胞的應(yīng)用

楊建波 王紅娜 趙志弟 馬素芬 尚艷坤

多聯(lián)袋手工法快速制備冰凍去甘油紅細(xì)胞的應(yīng)用

楊建波 王紅娜 趙志弟 馬素芬 尚艷坤

手工法 快速 解凍紅細(xì)胞

冰凍紅細(xì)胞在國(guó)內(nèi)外已普遍投入臨床使用，為稀有血型患者輸血提供了方便，爭(zhēng)取了搶救時(shí)間，冰凍紅細(xì)胞還可用于特殊患者的自身輸血和部分調(diào)節(jié)血液供求不平衡現(xiàn)象，冰凍血是其他制劑所不能代替的血液制品[1]。冰凍紅細(xì)胞使用前要進(jìn)行解凍去甘油，一種簡(jiǎn)便、快速、質(zhì)量穩(wěn)定的解凍去甘油方法是保證患者輸血及時(shí)有效的關(guān)鍵，現(xiàn)將一種手工快速制備冰凍解凍去甘油紅細(xì)胞的方法及質(zhì)量檢測(cè)結(jié)果報(bào)告如下。

材料與方法

1 主要儀器與試劑 0.9%聯(lián)袋鹽水（山東威海高分子），復(fù)方甘油（北京博德桑特），9%鹽水（北京博德桑特），甘油三酯試劑盒（浙江東甌），游離血紅蛋白試劑盒（北京瑞爾達(dá)）；大容量低溫離心機(jī)（SIGMA 8K），分光光度計(jì)（CANY 723C），血細(xì)胞計(jì)數(shù)儀（希森美康K-21N）

2 制備方法

2.1 改良方法：抽取2011～2015年制備的冰凍紅細(xì)胞10袋。冰凍紅細(xì)胞甘油濃度為40%，－65℃以下保存。冰凍紅細(xì)胞37℃～40℃水浴融化，融化過(guò)程中輕緩搖動(dòng)血袋。向解凍的紅細(xì)胞中加入9%鹽水80 ml/U，混勻后將1 U紅細(xì)胞轉(zhuǎn)移至1 000 ml大轉(zhuǎn)移袋中，如為2 U則平均分裝于2個(gè)1 000 ml大轉(zhuǎn)移袋中，見圖1，與聯(lián)袋0.9%鹽水無(wú)菌連接。加完9%鹽水20 min后，將2袋500 ml鹽水加入到大轉(zhuǎn)移袋中與紅細(xì)胞混和，加鹽水時(shí)要快速混勻，不需控制流速。將混合好的紅細(xì)胞懸液平均轉(zhuǎn)移至2個(gè)空鹽水袋中，相對(duì)離心力3 000 g、溫度2℃～6℃條件下離心8 min，放出大部分上清液，每袋內(nèi)保留紅細(xì)胞及上清液約100 ml，將2袋紅細(xì)胞混入1袋。向紅細(xì)胞中加入0.9%鹽水300 ml，加鹽水時(shí)快速混勻，不需控制流速，以同樣條件離心，充分去除上清液，加入0.9%鹽水500 ml混勻后，同樣條件離心充分去除上清液，將紅細(xì)胞中加入適量0.9%鹽水，使其容量符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

2.2 對(duì)照方法：按2.1的方法，解凍紅細(xì)胞中加入9%鹽水80 ml/U ，以滴速60滴/min加入羥乙基淀粉100 ml，靜置5 min后，相對(duì)離心力1 880 g、溫度2℃～6℃條件下離心8 min，去上清后以同樣速度加入羥乙基淀粉100 ml，0.9%鹽水100 ml，同樣條件離心去上清，100滴/min加入生理鹽水200 ml，重復(fù)洗滌3次。

3 質(zhì)量檢測(cè) 對(duì)制備的冰凍解凍紅細(xì)胞進(jìn)行甘油殘留量、游離血紅蛋白濃度、血紅蛋白量檢測(cè)，由于采用的原料血均為去白細(xì)胞懸浮紅細(xì)胞，故未進(jìn)行白細(xì)胞殘留量的檢測(cè)。

4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 所得數(shù)據(jù)以x±s表示，應(yīng)用SPSS13.0軟件采用t檢驗(yàn)。

結(jié) 果

多聯(lián)袋文字圖見圖1。各項(xiàng)質(zhì)量檢測(cè)結(jié)果見表1。

圖1 多聯(lián)袋示意圖

討 論

改良的制備方法大大地增加了鹽水用量，加入9%鹽水后放置20 min，紅細(xì)胞在高滲環(huán)境下變成皺縮狀態(tài)，細(xì)胞內(nèi)更多的甘油也釋放到細(xì)胞外，使甘油去除更充分。皺縮紅細(xì)胞能耐受更大的細(xì)胞內(nèi)的滲透壓差變化，加入鹽水時(shí)快速混勻和洗滌程序的調(diào)整，使紅細(xì)胞內(nèi)外滲透壓變化更好地控制在紅細(xì)胞可耐受范圍內(nèi)，明顯減少了洗滌過(guò)程中造成的紅細(xì)胞破裂溶血。改良方法制備冰凍解凍去甘油紅細(xì)胞的各項(xiàng)質(zhì)量檢測(cè)指標(biāo)均符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)[2]，且優(yōu)于傳統(tǒng)手工制備方法，產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定，整個(gè)制備過(guò)程不超過(guò)2h，可批量制備冰凍解凍去甘油紅細(xì)胞。一般手工制備冰凍解凍去甘油紅細(xì)胞需用時(shí)5 h左右[3]，全自動(dòng)細(xì)胞處理系統(tǒng)制備時(shí)間較短，但設(shè)備、耗材昂貴且每臺(tái)設(shè)備每次只能制備一袋解凍紅細(xì)胞，無(wú)法滿足大量輸血患者的搶救用血。改良后的制備方法與之比較具有一定的優(yōu)勢(shì)。

表1 各項(xiàng)質(zhì)量檢測(cè)結(jié)果

1 王憬惺.輸血技術(shù)學(xué)[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2013：113-118.

2 全血成分血質(zhì)量要求 [S].中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社，GB18469-2012.

3 李凌.全自動(dòng)細(xì)胞處理系統(tǒng)制備與手工制備冰凍紅細(xì)胞質(zhì)量指標(biāo)比較[J].淮海醫(yī)藥，2013，31（4）：332-333.

R331.1+41

B

1671-2587（2017）01-0086-02

2016-07-15）

（本文編輯：姚萍）

10.3969/j.issn.1671-2587.2017.01.024

064400 河北省遷安市血站（楊建波，趙志弟，馬素芬，尚艷坤）；遷安市人民醫(yī)院（王紅娜）

楊建波（1976–），男，河北遷安人，主管檢驗(yàn)師，學(xué)士，主要從事采供血工作，（Tel）13383250606。