31例乙型肝炎病毒核酸檢測陽性獻血者跟蹤調(diào)查

孫海英 范恩勇 許守廣 黃文杰

31例乙型肝炎病毒核酸檢測陽性獻血者跟蹤調(diào)查

孫海英 范恩勇 許守廣 黃文杰

目的 了解揚州地區(qū)無償獻血者乙型肝炎病毒核酸檢測陽性獻血者的跟蹤調(diào)查情況。方法對22518例獻血者先經(jīng)ELISA法兩次檢測及NAT一次檢測；對本血站HBsAg ELISA法雙試劑陰性或單試劑陽性而NAT檢測為陽性的標本，再送江蘇省血液中心進行羅氏核酸檢測和乙肝“兩對半”跟蹤檢測。對ELISA法HBsAg雙試劑陰性核酸檢測陽性獻血者6個月后再進行跟蹤檢測。結(jié)果ELISA法雙試劑陰性標本中上海科華NAT檢測為陽性26例，占0.12%；OBI感染22例，HBV窗口感染期4例。OBI獻血者的血液學特征以HBcAb為主，占100.0%，其次為HBeAb，占63.6%。31例送檢標本乙肝“兩對半”均出現(xiàn)HBsAg、HBsAb、HBeAb、HbcAb單項或合并陽性。結(jié)論核酸檢測能夠在一定程度上彌補ELISA方法學的局限性，有效縮短窗口期，減少漏檢的發(fā)生，降低經(jīng)輸血途徑傳播疾病的風險，從而確保血液質(zhì)量和輸血安全。

乙型肝炎病毒表面抗原 核酸檢測技術(shù) 酶聯(lián)免疫法 隱匿性乙型肝炎病毒感染

當前，隨著國家衛(wèi)計委加強血站血液安全保障能力建設(shè)、全面推進血站核酸檢測技術(shù)（Mucleic acids technology，NAT）實施方案的落實，NAT已在采供血機構(gòu)全面開展及覆蓋。作為ELISA法血液檢測的有益補充，NAT有效縮短了病毒檢測窗口期，降低輸血傳播病原體的殘余風險，特別是對于隱匿性乙型肝炎病毒感染（Occult hepatits B virus infection，OBI）的檢出發(fā)揮重要作用。HBsAg作為當前我國采供血機構(gòu)血液篩查的常規(guī)項目之一，可有效切斷HBV經(jīng)輸血感染，但由于存在病毒窗口期感染和無應(yīng)答持續(xù)感染等造成病毒污染血液的殘余風險，特別是隱匿性HBV感染，常規(guī)ELISA法無法檢出HBsAg[1]。OBI不同于HBV“窗口期”感染，“窗口期”過后血清學HBsAg結(jié)果會轉(zhuǎn)為陽性，而OBI則始終呈陰性（以目前的血清學檢測手段），對于臨床安全輸血方面有可能產(chǎn)生潛在的HBV感染風險[2]。揚州地區(qū)于2015年1月全面開展血液NAT檢測技術(shù)以來，取得了較好效果，現(xiàn)報告如下。

材料與方法

1 標本來源 所有標本均來自2015年1月23～8月31日揚州市中心血站無償獻血者血液標本，共計22 518例，年齡18～55歲，均符合《獻血法》、《獻血者健康檢查要求》中獻血者體檢、獻血前血液檢測要求。

2 試劑與方法 所有標本均先經(jīng)ELISA法兩次檢測及NAT一次檢測；對HBsAg ELISA法雙試劑陰性或單試劑陽性而NAT檢測為陽性的標本，再送江蘇省血液中心進行羅氏核酸檢測和乙肝“兩對半”跟蹤檢測。對ELISA法HBsAg雙試劑陰性、核酸檢測陽性獻血者，6個月后再進行跟蹤檢測。ELISA法HBsAg“一檢”采用珠海麗珠試劑，“二檢”采用上海科華試劑；核酸檢測試劑采用上海科華核酸試劑采用PCR-熒光法。江蘇省血液中心進行跟蹤標本檢測，試劑采用羅氏核酸檢測試劑、乙肝“兩對半”試劑采用進口試劑。均嚴格按照試劑說明書操作，并在有效期內(nèi)使用。

3 主要儀器與設(shè)備 FAME 2420全自動酶免分析儀（Hamilton公司，瑞士）、Microlab STAR CH-8全自動加樣系統(tǒng)（Hamilton公司，瑞士）、Zenyth 340酶標儀（Biochrom Anthos公司，英國），ABI 7500熒光定量PCR儀（ABI公司，美國）等。

4 統(tǒng)計學處理 應(yīng)用SPSS18.0軟件進行統(tǒng)計分析，定性資料采用卡方檢驗，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學意義。

結(jié) 果

1 共檢測22 518例標本，其中ELISA法陰性22 438例，陰性率99.65%，ELISA法陽性79例（一檢單試劑陽性11例，二檢單試劑陽性24例，雙試劑陽性44例），陽性率0.35%。

2 22 518例獻血者HBV核酸檢測結(jié)果見表1。

表1 22 518例獻血者HBV NAT檢測結(jié)果

3 26例ELISA法HBsAg雙試劑陰性核酸檢測陽性獻血者，6個月后再進行跟蹤檢測，ELISA法檢測仍為雙試劑陰性22例，考慮為OBI感染，OBI流行率為1∶1 020（22/22 439）；4例跟蹤檢測HBsAg轉(zhuǎn)為陽性，考慮為HBV窗口期感染。

4 31例HBsAg ELISA法雙試劑陰性（26例）或單試劑陽性（5例）經(jīng)上海科華NAT檢測陽性標本，送江蘇省血液中心進行羅氏核酸檢測及“兩對半”檢測，結(jié)果見表2。

表2 31例上海科華NAT陽性標本送檢結(jié)果情況

討 論

我國人群有較高的HBsAg攜帶者，盡管當前采供血機構(gòu)已通過對獻血者血液HBsAg進行篩查，較大程度地降低了HBV感染風險，提高了血液質(zhì)量。但由于HBV感染窗口期、OBI的存在等，導(dǎo)致ELISA法HBsAg的漏檢[3-6]，故此全面推進血站核酸檢測技術(shù)在獻血者中的應(yīng)用就顯得尤為重要了。

表1結(jié)果顯示，ELISA法雙試劑陰性標本中仍有0.12% NAT檢測為陽性，說明相對于NAT檢測技術(shù)，ELISA法仍存在窗口期漏檢或OBI感染現(xiàn)象，跟蹤檢測結(jié)果顯示，窗口期感染4例，OBI感染22例，揚州市無償獻血者OBI的流行率為1∶1 020（22/22 439），高于深圳地區(qū)，低于廈門和萊蕪地區(qū)，可能與各地人群的HBV感染率相關(guān)[7]。本地區(qū)OBI獻血者的血液學特征以HBcAb為主（占100%，22/22），其次為HBeAb（占63.6%，14/22），未發(fā)現(xiàn)有全陰性的OBI標本，與文獻[2]報道基本相符。由于OBI的發(fā)生機制仍不明確，更多學者認為可能與pre-S/S區(qū)基因變異有關(guān)[1，2]。由于實驗條件的限制，本研究未能針對本地區(qū)OBI標本進行pre-S/S區(qū)基因的序列分析。另外，ELISA法單試劑陽性標本，也有0.02%的NAT檢測陽性率，說明ELISA法單試劑存在漏檢情況；對于ELISA法雙試劑陽性標本，NAT檢測100.0%為陽性，說明雙試劑ELISA法陽性標本與核酸檢測結(jié)果一致，今后可考慮對ELISA法雙試劑陽性標本不建議再進行NAT檢測，可降低實驗室感染機會及減少核酸試劑的浪費。

表2結(jié)果顯示，本血站31例HBsAg ELISA法雙試劑陰性或單試劑陽性而上?？迫ANAT檢測陽性標本中，經(jīng)江蘇省血液中心羅氏NAT檢測為陽性29例，NAT檢測一致率93.5%（29/31）。送檢標本乙肝“兩對半”跟蹤結(jié)果顯示，29例羅氏NAT陽性標本均出現(xiàn)HBsAg、HBsAb、HBeAb、HBcAb單項或合并陽性，2例羅氏NAT陰性標本也均伴有HBsAb、HBcAb陽性，且有1例伴HBeAb陽性，可能為乙肝感染恢復(fù)期[3]。HBcAb檢測陽性率為100.0%（31/31），說明這些獻血者捐獻的血液都存在輸血風險，均不適合發(fā)往臨床。

綜上所述，核酸檢測作為當前最靈敏和準確的檢測方法，能夠在一定程度上彌補ELISA方法學的局限性，有效縮短窗口期，減少漏檢的發(fā)生，降低經(jīng)輸血途徑傳播疾病的風險。同時核酸檢測并不能完全取代ELISA法，只能作為有益補充，從而確保血液質(zhì)量和輸血安全。

1 容瑩，鄭欣，葉賢林，等.無償獻血者隱匿性乙型肝炎病毒Pre-S/S區(qū)變異的研究[J].中國輸血雜志，2011，24（7）：565-571.

2 王東;鄧雪蓮;周璐，等.大連地區(qū)無償獻血者隱匿性乙型肝炎病毒感染pre-S/S區(qū)基因分析[J].中國輸血雜志，2015，28（1）：26-31.

3 胡貴賓，釋艷華，李霜云，等.襄陽地區(qū)無償獻血者乙型肝炎病毒核酸檢測效果分析[J].臨床血液學雜志（輸血與檢驗），2014，27（5）：875-878.

4 曠潔平.應(yīng)用核酸檢測獻血者乙型肝炎病毒的效果分析[J].現(xiàn)代診斷與治療，2015，26（10）：2344-2345.

5 劉麗，王明民，趙林.隱匿性乙型肝炎病毒感染的研究進展[J].疑難病雜志，2013，12（7）：568-571

6 王鐵兵，陳海霞，楊飛鵬，等.深圳市隱匿性乙型肝炎病毒感染現(xiàn)狀和感染因素分析[J].中國公共衛(wèi)生管理，2013，29（1）：58-60.

7 秦偉斐，田耘博，李小紅，等.獻血者乙型肝炎病毒篩查結(jié)果分析[J].中國輸血雜志，2015，28（6）：679-683.

A Follow-up Survey of 31 Cases HBV DNA Positive Cases of Blood Donors

SUN Hai-ying，F(xiàn)AN En-yong，XU Shou-guang，et al. Yangzhou Blood Center of Jiangsu Province Yangzhou，225007

Objective To track the voluntary blood donors who showed positive hepatitis B virus DNAs to ensure blood transfusion safety.Methods22 518 cases of blood donors were subjected to repeated ELISA testing and NAT detection. The NAT-positive samples that showed negative HBsAg by repeated ELISA but positive HBsAg by single ELISA were checked by both DNA detections and routine profile tests for HBV infection. The individuals with negative repeated ELISA but positive DNA detection were followed-up after 6 months of primary examinations.Results0.12 % cases presented positive NAT although they were negative when tested by repeated ELISA. Among them，22 cases were OBI infections and 4 fell in window phase of HBV infection. All of the OBI donors were characterized by positive HBcAb（100%），followed by HBeAg （63.6%）.All of the 31 samples exhibited single or combined positivity of routine profile tests for HBsAg，HBsAb，HBeAb，or HbcAb.ConclusionDNA detection may cover the shortage of ELISA，shorten the window phase，and avoid misdiagnosis so as to reduce the risk at transmission of infectious diseases.

Hepatitis B virus surface antigen Nucleic acid detection technology ELISA Latent hepatitis B virus infection

R446.61 R392.11

A

1671-2587（2017）01-0053-03

2016-10-12 ）

（本文編輯：王敏）

10.3969/j.issn.1671-2587.2017.01.015

225007 江蘇省揚州市中心血站

孫海英（1977–）女，內(nèi)蒙古赤峰市人，主管技師，學士，主要從事血液免疫學檢驗及輸血技術(shù)研究，（Tel）18936220186。

范恩勇，（Tel）18936220169（E-mail）fanenyong@163.com。