抗-HCV篩查反應(yīng)性獻(xiàn)血者的確證結(jié)果分析*

李莉華 韓雪峰 馬印圖

抗-HCV篩查反應(yīng)性獻(xiàn)血者的確證結(jié)果分析*

李莉華 韓雪峰 馬印圖

目的 分析無償獻(xiàn)血者抗-HCV篩查反應(yīng)性標(biāo)本的確證試驗結(jié)果。方法隨機(jī)收集無償獻(xiàn)血者抗-HCV篩查反應(yīng)性標(biāo)本284例，采用免疫印跡法（WB）進(jìn)行確證試驗。將檢測結(jié)果結(jié)合獻(xiàn)血者基本資料進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。結(jié)果對284例抗-HCV篩查反應(yīng)性血液標(biāo)本進(jìn)行確證試驗，其中：ELISA方法檢測抗-HCV確證陽性率為49.82%；雙試劑ELISA反應(yīng)性與單試劑反應(yīng)性標(biāo)本確證陽性率的差異有統(tǒng)計學(xué)意義；初次獻(xiàn)血者與重復(fù)獻(xiàn)血者確證陽性率的差異、不同性別和不同年齡組確證陽性率的差異均有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)論采供血機(jī)構(gòu)應(yīng)開展篩查反應(yīng)性獻(xiàn)血者的確證試驗，和/或補充試驗，尤其是單試劑反應(yīng)性的獻(xiàn)血者和重復(fù)獻(xiàn)血者，減少獻(xiàn)血隊伍的流失。

抗-HCV 免疫印跡法 酶聯(lián)免疫法

丙型肝炎病毒（ hepatitis C virus，HCV）為丙型肝炎的病原體，輸血傳播是其重要傳播途徑之一［1］。為降低臨床輸血后感染HCV的殘余風(fēng)險，采供血機(jī)構(gòu)多采用敏感度較高的兩種不同廠家的ELISA篩查試劑，對獻(xiàn)血者進(jìn)行抗-HCV常規(guī)篩查。其篩查結(jié)果存在一定程度的假陽性，會造成無償獻(xiàn)血者隊伍的流失。本文分析了不同特征人群的抗-HCV篩查反應(yīng)性獻(xiàn)血者的免疫印跡（WB）確證情況，為采供血機(jī)構(gòu)制定適宜的獻(xiàn)血者招募、血液篩查策略和獻(xiàn)血者歸隊機(jī)制提供依據(jù)?，F(xiàn)報告如下。

材料與方法

1 標(biāo)本來源 隨機(jī)抽取河北省血液中心獻(xiàn)血者抗-HCV篩查反應(yīng)性標(biāo)本284例，其中使用2個不同ELISA試劑廠家檢測的雙試劑反應(yīng)性標(biāo)本135例、單試劑重復(fù)反應(yīng)性標(biāo)本149例，包括灰區(qū)（0.7≤S / CO＜1）標(biāo)本5例。217例為初次獻(xiàn)血者、67例為重復(fù)獻(xiàn)血者，其中男性168例、女性116例。

2 試劑與儀器 抗-HCV檢測試劑：HCV抗體診斷試劑盒（北京萬泰，批號C20130711、C20140101等；北京金豪，批號2013071017、2013121027等）；確證試劑：HCV抗體診斷試劑盒（免疫印跡法）HCV Blot 3. 0（新加坡MP Biomedicals Asia Pacific Pte，Ltd 公司，簡稱MP，批號AD5002）。所有試劑均為批批檢合格且在有效期內(nèi)使用。STAR全自動加樣儀（瑞士HAMILTON），F(xiàn)AME酶免全自動分析系統(tǒng)（瑞士HAMILTON），洗板機(jī)（TECAN Columbus）；離心機(jī)（SORVALL ST 40R ）等，現(xiàn)代SHINENOW實驗室管理軟件。

3 ELISA檢測及判定規(guī)則 均嚴(yán)格按照試劑盒說明書操作，采用2種ELISA試劑檢測血液標(biāo)本抗-HCV，2種試劑均反應(yīng)性，判為該檢測項目不合格；1種試劑有反應(yīng)性或處于灰區(qū)的標(biāo)本（即ELISA單試劑反應(yīng)性標(biāo)本），則進(jìn)行該試劑的雙孔復(fù)試，1孔有反應(yīng)性即為該檢測項目不合格。

4 WB確證試驗 實驗操作均嚴(yán)格按照試劑盒說明書，根據(jù)說明書判斷試驗結(jié)果，無任何條帶陽性，該標(biāo)本視為陰性；只有1 條帶陽性，定義為不確定結(jié)果；2 條帶以上陽性或單獨核心抗原條帶≥2+，標(biāo)本視為陽性。

5 統(tǒng)計學(xué)處理 采用χ2檢驗進(jìn)行率的比較。

結(jié) 果

1 抗-HCV篩查雙試劑反應(yīng)性和單試劑反應(yīng)性標(biāo)本的確證結(jié)果 對284例抗-HCV篩查反應(yīng)性標(biāo)本進(jìn)行WB確證試驗，陽性符合率為49.82%（142/284）；雙試劑反應(yīng)性標(biāo)本確證陽性率與單試劑確證陽性率比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)果見表1。

2 不同廠家試劑篩查抗-HCV反應(yīng)性的確證結(jié)果試劑1和試劑2確證陽性率比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)果見表2。

3 抗-HCV篩查雙試劑反應(yīng)性標(biāo)本的確證結(jié)果 雙試劑反應(yīng)性S/CO均大于5.0與至少一種試劑S/ CO≤5.0且大于2.0，及S/CO≤2.0且≥0.7標(biāo)本的確證陽性率比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。見表3。

4 不同類型獻(xiàn)血者的確證結(jié)果 初次和重復(fù)獻(xiàn)血者、不同性別以及不同年齡獻(xiàn)血者的確證陽性率比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)果見表4。

表1 284例HCV篩查反應(yīng)性標(biāo)本的確證結(jié)果

表2 不同廠家ELISA試劑的確證結(jié)果

表3 135例HCV篩查雙試劑反應(yīng)性標(biāo)本的確證結(jié)果

表4 抗-HCV篩查反應(yīng)性獻(xiàn)血者的確證結(jié)果

討 論

《血站技術(shù)操作規(guī)程》中要求：可以選用2種不同廠家的試劑對獻(xiàn)血者進(jìn)行抗-HCV酶聯(lián)免疫篩查。為降低輸血后感染HCV殘余風(fēng)險、提高檢測質(zhì)量，采供血機(jī)構(gòu)多選擇靈敏度高、特異性強的試劑進(jìn)行檢測。目前，國內(nèi)外丙肝抗體試劑的特異性和靈敏度均有很大提高，絕大多數(shù)可達(dá)到我國國家標(biāo)準(zhǔn)，在血源篩查、阻斷HCV傳播中起到很大作用，但也存在個別漏檢及非特異反應(yīng)現(xiàn)象［2］。尤其是用于低危HCV 感染人群（ 流行率＜10%） 的檢測，其結(jié)果仍然存在相對高的假陽性［3，4］。本研究結(jié)果提示采用ELISA 法進(jìn)行抗-HCV血液篩查，存在一定程度的生物學(xué)假陽性。單試劑反應(yīng)性獻(xiàn)血者的確證陽性率明顯低于雙試劑確證陽性率。ELISA法檢測抗-HCV具有較高的靈敏度，國外報道假陽性率大于 26%，有的甚至高達(dá)50%以上［3，5］，本文數(shù)據(jù)與之較接近。造成抗-HCV ELISA 假陽性有多種原因，如：高IgG 血癥、類風(fēng)濕因子干擾、超氧化物歧化酶（SOD）干擾、試劑制備環(huán)節(jié)中HCV 抗原不純等。不同廠家試劑均存在假陽性結(jié)果，同時也有結(jié)果確證陽性，說明單一試劑檢測存在抗-HCV漏檢的可能。因此，血站應(yīng)建立反應(yīng)性獻(xiàn)血者的相應(yīng)確認(rèn)程序，尤其是建立對單試劑反應(yīng)性獻(xiàn)血者的評估、確認(rèn)體系。

WB確證結(jié)果與ELISA 法篩查抗-HCV結(jié)果的S/CO值具有相關(guān)性，國內(nèi)外有多個針對不同人群抗-HCV ELISA S/CO 值與確證試驗的研究，均認(rèn)為兩者存在相關(guān)性［6-9］?？?HCV確證陽性情況可通過抗-HCV的S/CO值預(yù)測，其確證陽性預(yù)期值與S/CO值成正比。

不同特征人群的獻(xiàn)血者，其WB確證情況存在差異，初次獻(xiàn)血者的確證陽性率顯著高于重復(fù)獻(xiàn)血者。所謂重復(fù)獻(xiàn)血者指曾在本中心獻(xiàn)過血液，檢測結(jié)果合格，其再次獻(xiàn)血時定義為重復(fù)獻(xiàn)血者；獻(xiàn)血者首次在本血液中心捐獻(xiàn)血液（全血或成分血），則定義為初次獻(xiàn)血者。重復(fù)獻(xiàn)血者經(jīng)過多次體格檢查和血液檢測[6]，屬于低危獻(xiàn)血人群，通常低危人群中的假陽性率較高[10]。采供血機(jī)構(gòu)更應(yīng)對重復(fù)獻(xiàn)血者開展確證工作。女性獻(xiàn)血者WB確證陽性率高于男性的原因有待進(jìn)一步研究。不同年齡組抗-HCV反應(yīng)性獻(xiàn)血者確證陽性率存在差異，陽性率隨年齡增長而增高，≥46歲齡組最高，與各年齡段HCV感染率不同有關(guān)。據(jù)謝守鳳[11]等報道：不同年齡組HCV陽性檢出率的差異有統(tǒng)計學(xué)意義，≥50歲年齡組感染率最高。HCV感染率越高，其確證陽性率也就相應(yīng)增高。因此，對于抗-HCV反應(yīng)性的低齡組獻(xiàn)血者及重復(fù)獻(xiàn)血者實施屏蔽，其假陽性和誤判的可能性更高。對于采供血機(jī)構(gòu)而言，為保證血液安全，應(yīng)采取多種方式以降低輸血感染HCV殘余風(fēng)險，如增加HCV的核酸檢測等，與此同時還應(yīng)為獻(xiàn)血者提供獻(xiàn)血后續(xù)服務(wù)，對抗-HCV篩查反應(yīng)性的獻(xiàn)血者開展確證和/或補充試驗，消除假陽性結(jié)果給獻(xiàn)血者帶來心理壓力和諸多不便，以利于采供血事業(yè)的可持續(xù)性發(fā)展。

1 Verbeeck J，Maes P，Lemey P，et al． Investigating the origin and spread of hepatitis C virus genotype 5a［J].J Virol，2006，80（ 9） ： 4220-4226．

2 谷金蓮，祁自柏，劉艷，等. 丙型肝炎抗體確證試劑檢測結(jié)果的分析［J］．中國生物制品學(xué)雜志，2010，23（5）：514-516.

3 Centers for Disease Control and Prevention．Guidelines for laboratory testing and result reporting of antibody to hepatitis C virus[J]．MMWR，2003，52（3）：5-6.

4 Contreras AM．False and true positive HCV antibody．Diagnostic Strategies［J］．Rev Invest Clin，2006，58（ 2）：153-160．

5 Kesli R，Ozdemir M，Kurtoglu MG，et al. Evaluation andcomparison of three different anti-hepatitis C virus antibody testsbased on chemiluminescence and enzyme-linked immunosorbent assay methods used in the diagnosis of hepatitis C infections inTurkey［J］. J Int Med Res，2009，37（5）：1420-1429.

6 Ren FR，Lv QS，Zhuang H，et al．Significance of the signal-to-cutoff ratios of anti-hepatitis C virus enzyme immunoassays in screening ofChinese blood donors［J］．Transfusion，2005，45（ 11）：1816-1822．

7 林洪鏗，江偉梅，周曉真，等．獻(xiàn)血者ELISA 抗-HCV篩查反應(yīng)性強度與RIBA確證陽性的相關(guān)性研究［J］．中國輸血雜志，2010，23（ 8）：617-619．

8 許曉絢，王宋興，陳云龍，等．抗-HCV ELISA S /CO比值與確證試驗陽性的相關(guān)性探討［J］．熱帶醫(yī)學(xué)雜志，2011，11（ 7）：746-767．

9 Acar A，Kemahli S，Altunay H，et al．Thesignificance of repeat testingin Turkish blood donors screened with HBV，HCV and HIV immunoassaysand the importance of S /CO ratios in the interpretationof HCV/HIV screening test results and as a determinant for furtherconfirmatory testing［J］． Transfus Med，2010，20（ 3）：152-159．

10 劉宇寧，蔡菊英，劉曉音.血液篩查HBsAg、抗-HCV假陽性獻(xiàn)血者歸隊的調(diào)查分析［J］．中國輸血雜志，2012，25（3）：260-262.

11 謝守鳳，劉順江，謝強，等． 湖北棗陽市2010-2014年丙型病毒性肝炎流行病學(xué)調(diào)查［J］．公共衛(wèi)生與預(yù)防醫(yī)學(xué)，2015，26（4）：64-66.

Confirmation of Anti-HCV Screening-Positive Donor Samples in Blood Center

LI Li-hua，HAN Xue-feng，MA Yintu. Department of Laboratory in Hebei Province Blood Center 050071

Objective To analyze the confirmation test results of anti-HCV screening-positive samples of the blood donors.MethodThe 284 anti-HCV screening-positive donor samples were collected randomly. Western blotting（WB）test was used to confirm the results. The results were evaluated based on the data of WB test and personal information of the blood donors.Result49.82 percent of 284 cases of anti-HCV screening-positive donor samples were confirmed to be positvie. Compared with the confirmation results of positive samples screened by two round ELISA and positive samples screened by single round ELISA ，significant statistical differences were noted in positive rates. The confirmed positive rates between initial and repeated blood donations，genders and ages revealed significant statistical differences.ConclusionConfirmation or additional tests should be carried out for screening-positive donors，particularly in those screened by single round ELISA and repeated blood donors.

Anti-HCV Western Blot（WB） ELISA

R512.6+3 R446.61

A

1671-2587（2017）01-0046-04

2016-09-06）

（本文編輯：王敏）

10.3969/j.issn.1671-2587.2017.01.013

*本課題受河北省衛(wèi)生和計劃生育委員會指令性課題（No. ZL-20140122）資助

050071 河北省血液中心檢驗科（李莉華，韓雪峰）；解放軍白求恩國際和平醫(yī)院輸血科（馬印圖）

李莉華（1971-），女，河北石家莊人，副主任檢驗師，學(xué)士，主要從事輸血相關(guān)傳染病及血液安全方面的研究，（Tel）0311-87044310（E-mail）15931096399@163. com。