人免疫球蛋白對血液病患者梅毒螺旋體抗體檢測的影響

王曉偉 靳麗麗 邵春燕 卓海龍 駱群

人免疫球蛋白對血液病患者梅毒螺旋體抗體檢測的影響

王曉偉 靳麗麗 邵春燕 卓海龍 駱群

目的 分析血液病患者靜注人免疫球蛋白前后梅毒螺旋體抗體檢測結(jié)果的變化，為臨床檢驗診斷提供參考。方法采用化學(xué)發(fā)光法（CLIA）試劑檢測人免疫球蛋白血液病患者梅毒螺旋體抗體S/CO＞0.5標(biāo)本52例，其中42例輸注人免疫球蛋白，采用兩種酶聯(lián)免疫法（ELISA）試劑復(fù)查，梅毒螺旋體血凝實驗（TPHA）進(jìn)行確認(rèn)。追蹤9例血液病患者停止輸注人免疫球蛋白后梅毒螺旋體抗體檢測結(jié)果的變化。為將人免疫球蛋白（PH4）用生理鹽水和AB型血漿倍比稀釋，檢測梅毒螺旋體抗體，比較體內(nèi)外人免疫球蛋白檢測結(jié)果。結(jié)果10例患者經(jīng)TPHA確證為陽性。42例輸注人免疫球蛋白的血液病患者梅毒螺旋體抗體經(jīng)強(qiáng)生、萬泰和索林試劑檢測，陽性率分別為78.6%、88.1%和66.7%，TPHA確認(rèn)均為陰性。9例患者停止輸注人免疫球蛋白一段時間后，梅毒螺旋體抗體檢測結(jié)果轉(zhuǎn)為陰性。人免疫球蛋白用生理鹽水和AB型血漿稀釋前、后經(jīng)3種試劑檢測均有不同程度的陽性。結(jié)論人免疫球蛋白會引起血液病患者梅毒螺旋體抗體檢測呈假陽性，有人免疫球蛋白輸注史且梅毒螺旋體抗體檢測陽性反應(yīng)低的患者，建議停止輸注3個月后復(fù)查梅毒螺旋體抗體。

人免疫球蛋白 梅毒螺旋體抗體 血液病

人免疫球蛋白靜脈注射法可用以治療原發(fā)性免疫缺陷綜合征繼發(fā)性免疫球蛋白缺陷病和自身免疫性疾病，生物半衰期為16～24 d。近年來，梅毒已成為嚴(yán)重危害我國公共衛(wèi)生安全的問題之一[1]。梅毒檢驗方法因抗原制備方法不同分為非螺旋體抗原試驗和螺旋體抗原試驗，前者包括：VDRL、USR、RPR等，后者包括FTA-ABS、ELISA、TPHA、TPPA等。TPHA、TPPA操作簡單且特異性、敏感性好，被廣泛應(yīng)用于確認(rèn)試驗。為探索人免疫球蛋白對梅毒螺旋體抗體檢測的影響，用強(qiáng)生、索林和萬泰三種試劑檢測血液病患者梅毒螺旋體抗體52例，有42例患者至少有一種試劑檢測為陽性，追蹤發(fā)現(xiàn)這些患者均輸注了哈爾濱派斯菲科靜注人免疫球蛋白（PH4）。檢測該PH4梅毒螺旋體抗體，同時對比檢測成都蓉生藥業(yè)有限責(zé)任公司的PH4。準(zhǔn)確判斷人免疫球蛋白對血液病患者梅毒螺旋體抗體檢測結(jié)果的影響，對患者和臨床檢驗診斷均具有重要意義。

對象與方法

1 對象 2014年1月～2015年3月本院臨床送檢的52例血液病患者標(biāo)本，其中急性髓性白血病13例，急性白血病20例，骨髓增生異常綜合征5例，急性淋巴細(xì)胞白血病6例，再生障礙性貧血2例，淋巴瘤2例，慢性粒單核細(xì)胞白血病1例，急性非淋巴細(xì)胞白血病1例，非霍奇金淋巴瘤1例，血小板減少癥1例。

2 試劑 美國強(qiáng)生公司梅毒螺旋體抗體CLIA檢測試劑盒（批號0360、0400、0440）；意大利索林公司梅毒螺旋體抗體ELISA診斷試劑盒（批號D278510、D309510）；北京萬泰公司梅毒螺旋體抗體ELISA診斷試劑盒（批號N20140608）；哈爾濱派斯菲科人免疫球蛋白（批號20140601、20131213）；成都蓉生藥業(yè)有限責(zé)任公司人免疫球蛋白（批號201206B041）。

3 儀器 愛康公司Uranus AE 280全自動酶免分析儀；強(qiáng)生公司Vitros3600全自動免疫分析儀。

4 方法

4.1 采用強(qiáng)生公司CLIA從患者標(biāo)本中篩出靜注人免疫球蛋白血液病患者梅毒螺旋體抗體S/CO＞0.5的血清樣本，再采用索林公司和萬泰公司兩種ELISA試劑復(fù)查，將至少有一種試劑呈陽性反應(yīng)的標(biāo)本采用TPHA進(jìn)行確證實驗。

4.2 首先將哈爾濱派斯菲科和成都蓉生的不同批號的人免疫球蛋白用生理鹽水和AB型血漿分別倍比稀釋，然后用強(qiáng)生公司CLIA、索林公司和萬泰公司兩種ELISA試劑分別檢測，最后用TPHA進(jìn)行確認(rèn)。TPHA試驗是一種針對梅毒螺旋體抗體特異的靈敏的被動血凝試驗。試驗細(xì)胞是用螺旋體特異性抗原包被經(jīng)過醛化和鞣化的雞紅細(xì)胞，對照細(xì)胞是沒有用上述抗原包被的經(jīng)過醛化和鞣化的雞紅細(xì)胞，如果是陽性標(biāo)本，當(dāng)和致敏的雞紅細(xì)胞混合后，抗體和抗原的結(jié)合會引起致敏血球的凝集，在血凝板底部形成凝集塊，如為陰性標(biāo)本，則血細(xì)胞在孔底形成致密的沉淀。

結(jié) 果

1 10例血液病患者經(jīng)三種方法檢測均為陽性，TPHA確認(rèn)后均陽性。

2 42例輸注人免疫球蛋白血液病患者梅毒螺旋體抗體檢測結(jié)果見表1。這些患者輸注前強(qiáng)生試劑檢測均為陰性，輸注中強(qiáng)生試劑檢測陽性33例，陽性率為78.6%；萬泰試劑檢測陽性37例，陽性率為88.1%；索林試劑檢測陽性28例，陽性率為66.7%。TPHA最后確認(rèn)均為陰性。

3 9例輸注人免疫球蛋白的血液病患者停止輸注一段時間后梅毒螺旋體抗體檢測前后的變化見表2?；颊?經(jīng)強(qiáng)生和萬泰試劑檢測均為陽性，索林試劑為陰性；患者7經(jīng)萬泰試劑檢測為陽性，強(qiáng)生和索林試劑為陰性；患者30經(jīng)萬泰試劑檢測為陽性，強(qiáng)生和索林試劑為陰性；其余6例患者經(jīng)3種試劑檢測均為陽性。9例患者停藥后梅毒螺旋體抗體檢測為陰性的停藥時間最長為80 d。

4 哈爾濱派斯菲科人免疫球蛋白經(jīng)不同稀釋法梅毒螺旋體抗體檢測結(jié)果見表3。用生理鹽水稀釋8倍，經(jīng)強(qiáng)生和索林試劑檢測均為陽性，稀釋16倍及以后均為陰性，萬泰試劑均為陰性；用AB型血漿稀釋8倍，經(jīng)強(qiáng)生和萬泰試劑檢測均為陽性，稀釋16倍及以后均為陰性，萬泰試劑原倍為陰性，索林試劑稀釋4倍均為陽性，稀釋8倍及以后均為陰性。

5 成都蓉生的人免疫球蛋白梅毒螺旋體抗體檢測結(jié)果見表4。用生理鹽水稀釋，經(jīng)強(qiáng)生檢測原倍為陽性，其他均為陰性。用AB型血漿稀釋，經(jīng)強(qiáng)生檢測原倍為陽性，稀釋8倍經(jīng)索林檢測均為陽性，原倍及稀釋16倍以后均為陰性。稀釋2倍經(jīng)萬泰檢測為陽性，原倍及稀釋4倍以后均為陰性。

討 論

人免疫球蛋白是健康人血漿、血清和胎盤血中分離提純的免疫球蛋白制劑，主要用于某些疾病的預(yù)防和治療，含健康人血清具有的各種抗體，有增強(qiáng)機(jī)體抵抗力以預(yù)防感染的作用[2]。靜脈注射用免疫球蛋白含有廣譜抗病毒、細(xì)菌或其他病原體的IgG抗體，具有免疫替代和免疫調(diào)節(jié)的雙重作用。現(xiàn)有研究表明，人免疫球蛋白不傳播HIV、CMV、HBV，可治療原發(fā)性免疫球蛋白缺乏癥、繼發(fā)性免疫球蛋白缺陷病、同種異體骨髓移植和自身免疫性疾病，常用于血液病患者的輔助治療。梅毒螺旋體是引起人類梅毒的病原體，隨著性傳播疾病的流行，其發(fā)病率有增加的趨勢，部分無明顯癥狀者為隱性感染[3]。近年來，由于梅毒感染率迅速增加，已成為國際社會共同關(guān)注的社會性問題[4]。檢驗方法因抗原制備方法不同分為非螺旋體抗原試驗和螺旋體抗原試驗，由于常規(guī)檢測方法的局限性及其他因素的干擾，兩類

梅毒血清學(xué)試驗都存在生物學(xué)假陽性及假陰性問題，檢測結(jié)果不能完全反映患者的真實情況。避免醫(yī)療糾紛，構(gòu)建和諧醫(yī)患關(guān)系一直是大家所期待的，準(zhǔn)確的臨床檢驗診斷結(jié)果尤為重要。

表1 靜注人免疫球蛋白前后血液病患者梅毒螺旋體抗體檢測結(jié)果

表2 輸注人免疫球蛋白血液病患者的梅毒螺旋體抗體檢測前后的變化比較

表3 哈爾濱派斯菲科人免疫球蛋白不同稀釋法梅毒螺旋體抗體檢測結(jié)果

表4 成都蓉生不同稀釋法梅毒螺旋體抗體檢測結(jié)果

本實驗采用CLIA檢測人免疫球蛋白血液病患者梅毒螺旋體抗體，對檢測結(jié)果S/CO＞0.5的標(biāo)本分別采用兩種ELISA試劑復(fù)查，將3種試劑中至少有一種試劑有陽性反應(yīng)的標(biāo)本用TPHA最后確認(rèn)。42例白血液病患者輸注人免疫球蛋白前經(jīng)強(qiáng)生試劑檢測均為陰性，輸注中強(qiáng)生試劑檢測陽性33例，陽性率為78.6%；萬泰試劑檢測陽性37例，陽性率為88.1%；索林試劑檢測陽性28例，陽性率為66.7%。三種試劑至少有一種試劑檢測為陽性，TPHA最后確認(rèn)均為陰性。機(jī)體若無梅毒抗原刺激，一般不會產(chǎn)生TPHA抗體，如產(chǎn)生抗體，則可能在體內(nèi)存在很長時間甚至終生攜帶。TPHA是利用間接血凝法測定人血清或血漿中梅毒螺旋體的特異性抗體，只要有微量的抗體就可成為致敏的紅細(xì)胞發(fā)生凝集作用，試劑盒配制的血清吸收劑可消除試驗中的生物學(xué)假陽性反應(yīng)，提高實驗的特異性。此實驗用于確診梅毒，具有快速、簡便、敏感和特異等特點，但不適宜大樣本量檢測[5]。追蹤9例患者停止輸注人免疫球蛋白一段時間后，梅毒螺旋體抗體檢測為陰性，TPHA確認(rèn)也為陰性，說明輸注人免疫球蛋白患者產(chǎn)生的抗體可能是非特異性的。9例患者停藥后梅毒螺旋體抗體檢測為陰性的停藥時間最長為80 d，建議靜注人免疫球蛋白的血液病患者停止輸注3個月后復(fù)查梅毒螺旋體抗體。哈爾濱派斯菲科的人免疫球蛋白梅毒螺旋體抗體用生理鹽水稀釋，經(jīng)萬泰試劑檢測為陰性，AB型血漿稀釋后經(jīng)萬泰試劑檢測均為陽性，說明萬泰試劑對該檢測的敏感性較好。分析原因可能與人體內(nèi)pH環(huán)境及人免疫球蛋白進(jìn)入機(jī)體后與血漿作用有關(guān)，具體機(jī)制待進(jìn)一步研究證實。人免疫球蛋白輸入人體后被稀釋的倍數(shù)遠(yuǎn)大于實驗檢測稀釋的倍數(shù)，但仍能檢測出梅毒螺旋體抗體，可能與患者持續(xù)輸注或人免疫球蛋白能夠刺激機(jī)體產(chǎn)生非特異性梅毒螺旋體抗體有關(guān)。將成都蓉生的人免疫球蛋白用生理鹽水和AB型血漿倍比稀釋，用3種方法檢測也有不同的陽性反應(yīng)，說明國內(nèi)其他廠家的試劑也能引起梅毒螺旋體抗體檢測假陽性。

人免疫球蛋白引起血液病患者梅毒螺旋體抗體檢測假陽性，應(yīng)結(jié)合初篩試驗、確認(rèn)試驗和患者臨床、流行病學(xué)資料綜合分析。有人免疫球蛋白輸注史且梅毒螺旋體抗體檢測陽性反應(yīng)低的患者，建議停止輸注3個月后復(fù)查梅毒螺旋體抗體。

1 俞樹榮．微生物和微生物學(xué)檢驗[M]．第2版．北京：人民衛(wèi)生出版社，2001：320-323．

2 徐洋.丙種球蛋白及其應(yīng)用[J].貴州醫(yī)藥，2005，29（9）：863.

3 賈月琴，季必華．梅毒螺旋體實驗室診斷研究進(jìn)展[J].安徽醫(yī)學(xué)，2005，26（5）：453-454．

4 李靜，趙媛春，楊麗．3585例婚前醫(yī)學(xué)檢查人群梅毒感染情況分析[J]．中外醫(yī)學(xué)研究，2011，9（28）：26-27．

5 邵春燕，王海平，卓海龍.化學(xué)發(fā)光法檢測輸血前梅毒特異性抗體復(fù)查策略的研究[J].臨床輸血與檢驗，2015，2（17）：46-48.

Influence of Human Immunoglobulin on the Detection of Antibodies to Syphilis in Patients with Hematopathy

WANG Xiao-wei，JIN Li-li，SHAO Shun-yan，et al. Department of Transfusion Medicine，Affiliated Hospital of Academy of Military Medical Science 100071

Objective To Analyze the change of Syphilis antibodies in patients with hematopathy before or after use of human Immunoglobulintreatment，and provide a reference for clinical diagnosis.MethodFifty-two cases of Syphilis antibody absorbance signal of sample cutoff value（S/CO）＞0.5 in patients with hematological diseases were detected by chemiluminescence immunoassay （CLIA），42 of them were injected with human immunoglobulin. Two ELISA reagents were used for verication. Syphilis haemagglutination assay（TPHA） was performed for confirmation. Nine cases were followed up for detection of Syphilis antibody after withdraw of human Immunoglobulin administration. To compare the results of human Immunoglobulin in vivo and in vitro，times dilution the Harbin Paisi ficco Human Immunoglobulin with saline and AB type plasma to detect Syphilis antibody，simultaneous test the results of Chengdu rongsen Human Immunoglobulin（PH4）.Result10 patients showed positive TPHA，42 patients who had received human Immunoglobulin injection presented positive rates of 78.6%，88.1% and 66.7% in Syphilis antibody detection when tested by different reagents purchased from Johnson，Wan Tai and Sorin，TPHA，however，was found to be negative in all patients. Nine patients revealed positive Syphilis antibody after withdraw of human Immunoglobulin.ConclusionHuman Immunoglobulin administration may cause a false positive detection of Syphilis antibody in patients with hematological diseases. The patients with the experience of human Immunoglobulin treatment together with low Syphilis antibody reaction should be re-checked for Syphilis antibody after three months.

Human immunoglobulin Syphilis antibody Hematopathy

R446.11 R377+.1 R552

A

1671-2587（2017）01-0040-04

2016-10-12）

（本文編輯：王虹）

10.3969/j.issn.1671-2587.2017.01.011

100071 北京，軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院附屬醫(yī)院

王曉偉（1988–），女，技師，學(xué)士，主要從事臨床輸血檢驗工作，（Tel）18600962758（E-mail）wangxiaowei.nm@163.com。

駱群，男，副主任醫(yī)師，博士，主要從事臨床輸血研究，（E-mail）luoq66@aliyun.com。