月季組織培養(yǎng)的研究

盧娟

（遼寧水利職業(yè)學院 110122）

月季組織培養(yǎng)的研究

盧娟

（遼寧水利職業(yè)學院 110122）

月季組織培養(yǎng)通常選擇健壯枝條飽滿而未萌發(fā)的側(cè)芽作為外植體，滅菌用75%酒精和10%次氯酸鈉，初代培養(yǎng)基為MS+BA0.3～1.0mg/L，繼代培養(yǎng)基為MS+BA1～2mg/L+NAA0.01～0.1mg/L，壯苗培養(yǎng)基為 MS+BA0.3～0.5mg/L+NAA0.01～0.1mg/L，生根培養(yǎng)基為MS+NAA0.5mg/L。

月季；腋芽；組培

月季屬薔薇科薔薇屬多年生落葉或常綠直立灌木，它適應性強，栽培容易，每年多次開花，而且香味怡人，在觀賞植物中地位很高，被譽為“花中皇后”。月季是世界四大切花之一，具有很高的觀賞價值和經(jīng)濟價值。月季傳統(tǒng)的繁殖手段是扦插、嫁接、壓條，若用組織培養(yǎng)技術(shù)，能大幅地提高獲得月季植株的速度和質(zhì)量。一方面，組織培養(yǎng)可有效地保持母株的優(yōu)良性狀；另一方面，它對植物品種改良和選育新品種也有重要意義。

1 初代培養(yǎng)

1.1 外植體的選擇與滅菌

選取生長健壯的當年生月季枝條，用飽滿而未萌發(fā)的側(cè)芽作為外植體。以枝條中段芽最好，因為接種后，中段芽5d左右就能萌發(fā)，而基部和梢部的芽往往遲至15d才萌發(fā)。

采回的枝條切去葉和刺，先整段用洗衣粉水仔細刷洗，再用自來水沖洗，切成2～3cm一段，每段至少一個側(cè)芽，裝入小燒杯帶到超凈工作臺上。先用75%酒精滅菌10s，然后用10%次氯酸鈉溶液滅菌10min，再用無菌水清洗3～5次。

1.2 切割接種

將滅過菌的月季莖段上下端面均切掉一薄層后，接種到初代培養(yǎng)基中。注意芽尖朝上，莖段豎直插入培養(yǎng)基中。每瓶接種3～4段即可。

1.3 培養(yǎng)

初代培養(yǎng)的目的是獲得健壯的新生芽，初代培養(yǎng)基MS+BA0.3～1.0mg/L出芽效果都不錯。培養(yǎng)條件：溫度21℃最好，最高不超過 25℃，有晝夜溫差，光照 10～12h/d，光強 800～1200LX。初代培養(yǎng)7d左右，叢生芽即可萌發(fā)，2～3周左右芽長可達1cm。

2 繼代培養(yǎng)

將上述無菌芽從原莖段上切下，轉(zhuǎn)接到MS+BA1～2mg/L+NAA0.01～0.1mg/L的繼代培養(yǎng)基上，促使嫩莖長出更多的側(cè)芽。每5～6周做一次繼代增殖，對增殖倍率高的品種，要求進行一次壯苗培養(yǎng)，壯苗培養(yǎng)基為：MS+BA0.3～0.5mg/L+NAA0.01～0.1mg/L。繼代培養(yǎng)受糖濃度、pH值、激素配比的影響。糖量加大、pH值降低會使月季繼代苗分化率提高20%，同時可縮短繼代周期，但糖濃度不可超過50g/L，pH值不可低于5.5。適宜的激素種類和濃度配比是月季腋芽萌發(fā)和叢生芽增殖的關鍵。培養(yǎng)條件：光照10～12h/d，光強 800～1800LX，溫度 20～23℃。

3 生根培養(yǎng)

月季嫩芽長度為2～3cm時，就應切割下來轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基。生根培養(yǎng)基用MS+NAA0.5mg/L即可，此外加入300mg/L活性炭，30g/L蔗糖。

4 馴化移栽

組培苗的移栽是從無菌環(huán)境到有菌環(huán)境的過程，因此在移栽前還要對小苗進行馴化，讓其適應溫室外的環(huán)境。馴化是讓組培苗適應外界有菌環(huán)境的過程，具體的操作步驟是將封口膜打開一個口子，使之與外界聯(lián)通，同時在培養(yǎng)瓶中加入少量的水防止培養(yǎng)基變干，馴化一般要持續(xù)一周左右。在幼苗基部傷口愈合，已長出根原基且幼根尚未長出時，即可移栽。這種方法不會損傷根系，移栽速度快，成活率高。幼苗出瓶后，先洗去沾附的培養(yǎng)基，再種植到粗沙+園田土（1：3）介質(zhì)中。移栽完畢澆透水，并用0.1%的百菌清、多菌靈或甲基托布津等噴霧保苗，能顯著提高成活率。

5 問題和對策

5.1 初代培養(yǎng)中的褐變問題

褐變是由于植物組織中的多酚氧化酶被激活而使細胞的代謝發(fā)生變化。在褐變過程中產(chǎn)生醌類物質(zhì)，他們多呈褐色，當擴散到培養(yǎng)基后，就會抑制其他酶的活性，從而影響從接種的外植體的一種現(xiàn)象。

解決方法有：選擇適當?shù)耐庵搀w；對外植體進行預處理；添加褐變抑制劑和吸附劑；連續(xù)轉(zhuǎn)移。

5.2 繼代培養(yǎng)的玻璃化現(xiàn)象

玻璃化現(xiàn)象：試管苗生長異常，葉、莖呈透明或半透明的水浸狀，整株失綠，這種現(xiàn)象很難繼代培養(yǎng)和擴繁。產(chǎn)生的原因：濕度太大；光照水平低；細胞分裂素水平較高。

解決方法：適當增加培養(yǎng)基瓊脂的濃度；適當提高培養(yǎng)基中蔗糖含量或加入滲透劑；適當降低培養(yǎng)基中細胞分裂素和赤霉素的濃度；適當?shù)蜏靥幚怼?/p>

[1]王清蓮.植物組織培養(yǎng)[M].北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2001，11.

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S685.12

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1005-7897（2017）10-0003-02

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