關(guān)于女性生殖道HPV感染的研究進(jìn)展

吳 楊，王振美

(揚州市中醫(yī)院婦科，江蘇 揚州 225000)

人乳頭瘤病毒(human papillomavirus，HPV)屬于嗜上皮性病毒，在人類生殖道內(nèi)分布較多，其引發(fā)的生殖道感染往往在生殖道內(nèi)潛伏，可能長達(dá)數(shù)年、數(shù)十年，當(dāng)人體免疫力減弱時，潛伏中的人乳頭瘤病毒受到激活而大量釋放，容易引發(fā)生殖道良性腫瘤，存在惡變風(fēng)險[1-2]。近年來，臨床上發(fā)現(xiàn)與女性生殖道HPV感染相關(guān)的疾病(如宮頸上皮內(nèi)瘤變、宮頸癌、外陰癌等)發(fā)生率升高，嚴(yán)重威脅到廣大女性人群的生殖健康[3]，因此，對女性生殖道HPV感染的發(fā)病機(jī)理、診治進(jìn)一步明確十分重要。本文主要就女性生殖道HPV感染的概念、發(fā)病機(jī)理、常用檢測方法以及常見治療方法等方面進(jìn)行綜述，以歸納總結(jié)女性生殖道HPV感染的發(fā)病機(jī)理和診治進(jìn)展。

1 女性生殖道HPV感染的概念

HPV病毒是一種常見的嗜上皮性病毒，無包膜，其DNA基因組為雙鏈閉環(huán)，DNA基因組大小約為7.2～8.0 kb，相對分子量為5.0×106，目前，臨床上已經(jīng)克隆且鑒定出的HPV病毒多達(dá)上百種，約有30多種HPV病毒自人類生殖道分離得到[4]。根據(jù)HPV病毒的致病能力，臨床上通常將HPV病毒分為高危型、低危型，其中，高危型HPV病毒主要包括HPV16、HPV18、HPV31、HPV33、HPV35、HPV45、HPV51等，在女性生殖道內(nèi)長期潛伏，多見于高齡婦女，容易引發(fā)宮頸上皮內(nèi)瘤變，且該病變不易治愈，存在發(fā)展為宮頸癌的高風(fēng)險；低危型HPV病毒主要包括HPV6、HPV11、HPV30、HPV39、HPV42、HPV43等，在女性生殖道內(nèi)分布的低危型HPV感染多見于年輕婦女，容易引發(fā)外陰濕疣、扁平濕疣，少數(shù)患者會發(fā)生低度宮頸上皮內(nèi)瘤變，其治愈率較高，發(fā)展為宮頸癌的風(fēng)險相對較低[5-6]。

HPV病毒具有嚴(yán)格的嗜上皮性，一旦侵入上皮細(xì)胞，往往會在上皮基底層細(xì)胞中廣泛復(fù)制，且隨著上皮基底層細(xì)胞的分化和成熟，逐漸進(jìn)入表層，病毒DNA經(jīng)包裝形成完整的病毒顆粒，經(jīng)修飾后往往會快速在上皮細(xì)胞表面釋放，并經(jīng)性、母嬰垂直等方式廣泛傳播[7]。

2 女性生殖道HPV感染的發(fā)病機(jī)理

HPV病毒通常是經(jīng)由微小糜爛創(chuàng)面進(jìn)入上皮細(xì)胞基底層，造成生殖道內(nèi)感染。有研究采用小鼠進(jìn)行HPV病毒移植感染研究后發(fā)現(xiàn)，感染4周后可見小鼠HPV病毒基因組發(fā)生早期開放閱讀框架轉(zhuǎn)錄，6～8周內(nèi)病毒大量復(fù)制，可見晚期開放閱讀框架轉(zhuǎn)錄，且細(xì)胞增生至平臺期，10～12周內(nèi)形成完整的病毒顆粒，在上皮細(xì)胞表層大量復(fù)制，形成尖銳濕疣[8]。HPV病毒DNA在上皮細(xì)胞表層中的含量增多，尤其是高度分化的上皮細(xì)胞表皮層中存在大量病毒DNA復(fù)制，病毒DNA受到衣殼蛋白包被后可形成完整病毒顆粒，具有感染性，可通過病毒E4對細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞角蛋白網(wǎng)進(jìn)行破壞，并向外釋放，而在低度分化的上皮細(xì)胞基底層中，HPV病毒DNA復(fù)制和轉(zhuǎn)錄相對較弱。采用傳統(tǒng)的原位雜交方法無法對潛伏的HPV病毒DNA予以檢出，故目前對潛伏期HPV病毒感染的發(fā)生過程尚未明確[9-10]。導(dǎo)致女性生殖道HPV感染的相關(guān)因素主要為宿主免疫應(yīng)答抗體反應(yīng)以及細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)，此外，性行為過早或性伴侶過多、妊娠、人類免疫缺陷病毒等也有可能會引起女性生殖道內(nèi)HPV感染[11]。

3 女性生殖道HPV感染的常用檢測方法

3.1 實時熒光定量PCR檢測

實時熒光定量PCR檢測是一種較為新型的核酸定量檢測方法，主要是利用Taq酶5’→3’外切酶的活性，通過熒光標(biāo)記探針與引物序列中的DNA模板結(jié)合，使探針的5’端標(biāo)記熒光對基團(tuán)FAM予以發(fā)射，而靠近3’端標(biāo)記熒光則對基團(tuán)TAMRA予以淬滅，延伸期的Taq酶隨著引物的延伸向DNA模板移動至探針結(jié)合部位時，充分發(fā)揮Taq酶的5’→3’外切酶活性，切斷探針，解除熒光淬滅作用，使熒光信號有效釋放，再采用光電傳導(dǎo)系統(tǒng)對熒光信號變化予以檢測，利用計算機(jī)分析系統(tǒng)獲得定量檢測結(jié)果[12]。實時熒光定量PCR檢測可有效提高HPV病毒分型的檢測特異性，可對女性生殖道內(nèi)HPV感染予以有效檢出，但這種檢測方法的成本相對較高，所需設(shè)備和試劑均較為昂貴，且需要專人操作，對其臨床應(yīng)用產(chǎn)生一定程度的限制。

3.2 PCR-ELISA法檢測

PCR-ELISA法主要是先對PCR體系進(jìn)行擴(kuò)增，再利用ELISA法對其產(chǎn)物進(jìn)行定量，選取通用引物，利用引物5’端對地高辛進(jìn)行標(biāo)記，采用探針對生物素進(jìn)行標(biāo)記，將擴(kuò)增產(chǎn)物加入預(yù)先包被的聚苯乙烯微孔板中，在42℃下持續(xù)雜交20～30 min，最后利用酶底物與標(biāo)記酶進(jìn)行顯色，通過對其顯色吸光度進(jìn)行測定，再對其感染情況予以判斷[13]，這種檢測方法具有較高的靈敏度和特異度，且操作相對簡便，可采用全自動化酶標(biāo)儀進(jìn)行測定，檢測成本也較低，在臨床上的應(yīng)用相對廣泛。

3.3 宮頸脫落細(xì)胞薄層涂片檢查

目前，臨床上檢測HPV感染應(yīng)用最廣泛的檢測方法為宮頸脫落細(xì)胞薄層涂片技術(shù)，該檢測方法主要是通過對宮頸脫落細(xì)胞進(jìn)行涂片，再對其涂片進(jìn)行計算機(jī)快速圖像分析，可對細(xì)胞形態(tài)是否異常進(jìn)行有效識別，還可對其他病毒感染引起的細(xì)胞異常情況進(jìn)行有效鑒別，具有較高的靈敏度和特異度，相對于傳統(tǒng)巴氏涂片法，可減少漏診。

4 女性生殖道HPV感染的常見治療方法

目前，臨床上治療女性生殖道HPV感染的方法主要包括局部藥物治療、局部物理治療、手術(shù)治療以及免疫治療，其中，局部藥物治療主要是采用5-Fu軟膏、三氯醋酸等外用藥物對患者外陰、陰道內(nèi)進(jìn)行涂抹；局部物理治療主要是采用微波、激光或冷凍方法治療，微波適用于微小病變，激光適用面于淺表病變，冷凍適用于平坦病變；手術(shù)治療多用于病灶積大且蒂部較長的HPV感染，通過手術(shù)對病灶予以切除，但在手術(shù)后為減少復(fù)發(fā)，還應(yīng)采用藥物治療；免疫治療主要是利用干擾素對患者的免疫功能予以提高，增強(qiáng)其局部或全身抵抗HPV病毒的能力。此外，近幾年，臨床上還對HPV病毒疫苗進(jìn)行研發(fā)，為HPV病毒感染開辟新道路，但其進(jìn)展緩慢，尚無法廣泛應(yīng)用于臨床[14]。

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