• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    一起犢牦牛腹瀉病的病原學診斷

    2017-02-23 08:46:48陳天祥
    四川畜牧獸醫(yī) 2017年2期
    關(guān)鍵詞:腸毒素牦牛犢牛

    李 凡,阿 繼,嚴 州,陳天祥,張 斌,湯 承*

    (1.西南民族大學生命科學與技術(shù)學院,四川 成都 610041;2.四川省若爾蓋縣農(nóng)業(yè)畜牧和水務局,四川 若爾蓋 624500)

    一起犢牦牛腹瀉病的病原學診斷

    李 凡1,阿 繼2,嚴 州2,陳天祥2,張 斌1,湯 承1*

    (1.西南民族大學生命科學與技術(shù)學院,四川 成都 610041;2.四川省若爾蓋縣農(nóng)業(yè)畜牧和水務局,四川 若爾蓋 624500)

    四川省若爾蓋縣某養(yǎng)殖戶的犢牦牛出現(xiàn)以腹瀉為主要特征的疾病,傳播迅速,發(fā)病率為100%,為弄清病因,我們采集了6份腹瀉樣本,分別用Trizol法和酚氯仿法提取腹瀉糞便的總RNA和DNA,再用牦牛輪狀病毒(RV)、牛冠狀病毒(BcoV)、牛病毒性腹瀉病毒(BVDV)、沙門氏菌(Salmonella)、產(chǎn)腸毒素大腸桿菌(ETEC)特異的PCR方法進行病原檢測,結(jié)果得出這5種病原的檢出數(shù)分別為6、0、6、0、5,可見該地區(qū)犢牦牛腹瀉主要由RV、BVDV和ETEC混合感染引起。

    牦牛腹瀉;病原;牦牛輪狀病毒;牛病毒性腹瀉病毒

    犢牦牛腹瀉是指新生犢牦牛所發(fā)生的一種以腹瀉為主要癥狀的消化道疾病,該病一年四季均可發(fā)生,尤其以初春及夏末秋初氣候多變季節(jié)多發(fā),病犢牛以精神沉郁,體溫升高,腹脹、腹痛,廢食,呼吸短促,糞便惡臭,間或混有血絲氣泡,急性大量水瀉,脫水,自體中毒及心力衰竭為主要臨床特征,是造成犢牛死亡、生長發(fā)育不良最嚴重的疾病之一,給養(yǎng)牛業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟損失[1]。

    當前引起犢牛腹瀉的原因極其復雜,包括感染性因素(病毒、細菌和寄生蟲)和非感染性因素(營養(yǎng)因素和環(huán)境因素)[2-3]。其中,病原微生物感染是造成犢牛腹瀉的重要原因,常見的引起犢牛腹瀉的病原主要有RV、BcoV、BVDV、Salmonella以及ETEC等[4-5],其臨床癥狀及病理剖檢很相似,需要通過實驗室檢測才能確診。本試驗對2016年采自若爾蓋縣某牦牛養(yǎng)殖戶的6份腹瀉樣本進行了RV、BCoV、BVDV、Salmonella和ETEC的PCR檢測,以確診到底是何種病原引起的腹瀉,現(xiàn)將結(jié)果報告如下。

    1 材料與方法

    1.1 被檢樣本及試劑 6份無菌采集的犢牦牛腹瀉糞便樣本,2016年8月采于若爾蓋縣某養(yǎng)殖戶的3月齡發(fā)病犢牦牛,臨床表現(xiàn)為腹瀉,排出灰白色、深綠色糞便和血便,脫水。

    試劑:2×Taq PCR Master Mix(擎科公司),DNA Marker II、Marker DL2000(北京天根公司),RNAiso Plus、PrimeScriptTM等均購自寶生物工程(大連)股份有限公司;DEPC試劑購自Sigema生物公司。

    1.2 參考毒株 牦牛RV分離株、BCoV陽性樣本、BVDV分離株、沙門氏菌分離株及ETEC分離株均為西南民族大學動物醫(yī)學實驗室保存。

    1.3 引物 牦牛RV、BVDV和Ecoli.K99的檢測引物均參照文獻,由大連寶生物工程有限公司合成,引物信息見表1。

    表1 RT-PCR引物信息

    1.4 方法

    1.4.1 被檢樣本處理與核酸提取 將6份腹瀉樣本用0.1mol/L PBS緩沖液按1∶3(m/v)比例稀釋,渦旋混勻,-80℃冰箱中反復凍融3次,以12000r/min離心15min,取上清,然后按照Trizol Reagent說明書提取總RNA,并按照反轉(zhuǎn)錄試劑盒說明書合成cDNA。反應體系為:5×buffer 4μL,Random primer 2μL,PrimeScript RTase 1 μL,ddH2O 9 μL;反轉(zhuǎn)錄條件為:37℃ 15 min,85℃ 15 s,16℃ 1min,-20℃保存?zhèn)溆?。DNA的提取采用酚氯仿法。

    1.4.2 PCR擴增 用 RV、BCoV、BVDV、Salmonella和ETEC的引物對67份樣本的cDNA和DNA模板進行PCR擴增。反應體系為:cDNA 2.0 μL,2×Taq PCR Master Mix 12.5μL,上、下游引物各1.0 μL,ddH2O 8.5μL,總體積共25μL。PCR擴增條件為:95℃5min,95℃ 30s,52℃ 45s,72℃ 45s,72℃ 10 min。取擴增產(chǎn)物5μL在2%瓊脂糖凝膠板上點樣,100V電壓下電泳40min,于凝膠成像系統(tǒng)中觀察結(jié)果。將RV、BCoV、BVDV、Salmonella和ETEC檢測呈陽性的PCR產(chǎn)物送至生物工程(上海)股份有限公司測序。

    2 結(jié)果

    2.1 被檢樣本的RT-PCR檢測結(jié)果 電泳結(jié)果顯示:在PCR擴增產(chǎn)物電泳中分別擴增出約231bp、230 bp、498 bp的條帶,分別為牦牛RV、BVDV和Ecoli.K99的特異條帶,BCoV與Salmonella僅有陽性對照擴增出條帶,結(jié)果見圖1~圖5。將擴增出的陽性產(chǎn)物送至生物工程(上海)股份有限公司測序,結(jié)果顯示:牦牛RV與NCBI上所登錄序列的同源性為100%,BVDV同源性為90.6%,Ecoli.同源性為98%。

    圖1 牦牛RV擴增結(jié)果

    圖2 牦牛BCoV擴增結(jié)果

    圖3 牦牛BVDV擴增結(jié)果

    圖4 牦牛Salmonella擴增結(jié)果

    圖5 牦牛ETEC擴增結(jié)果

    2.2 陽性檢出率及混合感染情況 6份臨床腹瀉樣本中,牦牛RV的陽性檢出率為100%(6/6),BCoV的陽性檢出率為 0,BVDV的陽性檢出率為 100%(6/6),Salmonella的陽性檢出率為0,ETEC的陽性檢出率為83.3%(5/6)?;旌细腥韭蕿?3.3%。

    3 小結(jié)與討論

    實驗室檢測結(jié)果結(jié)合臨床癥狀分析,本次若爾蓋縣養(yǎng)殖戶的犢牦牛腹瀉病呈混合感染,主要是由牦牛RV、BVDV和ETEC混合感染所致。

    2016年周芳等[6]在青藏高原地區(qū)進行了BRV病原流行病學調(diào)查,發(fā)現(xiàn)BRV在云南、青海、四川和西藏的腹瀉樣本的感染率分別為90%、95%、85.19%和60%,證明BRV是引起牦牛腹瀉的重要病原。2016年陳新諾等[11]對青藏高原地區(qū)四個省的牦牛腹瀉樣本進行了BVDV病原流行病學調(diào)查,發(fā)現(xiàn)BVDV感染在青藏高原地區(qū)的牦牛中普遍存在。達娃次仁等[12]從西藏地區(qū)的240份牦牛腹瀉病料中分離到200株牦牛源大腸桿菌。郝一妹等[13]對26份牦牛腹瀉糞便樣本和部分健康糞便樣本進行產(chǎn)腸毒素大腸桿菌(ETEC)的分離和檢測,結(jié)果表明產(chǎn)腸毒素大腸桿菌在牦牛腹瀉樣本中的檢出率顯著高于外表健康的牦牛,說明產(chǎn)腸毒素大腸桿菌在牦牛糞便中廣泛存在。

    [1] Chen X,Zhang B,Yue H,et al.A novel astrovirus species in the gut of yaks with diarrhea in the Qinghai Tibetan plateau,2013[J].Journal of General Virology,2015,96(12).

    [2] Bartels C J,Holzhauer M,Jorritsma R,et al. Prevalence, prediction and risk factors of enteropathogens in normal and non-normal faeces of young Dutch dairy calves[J].Preventive Veterinary Medicine,2010,93(2/3):162-169.

    [3] Izzo M M,Kirkland P D,Mohler V L,et al. Prevalence of major enteric pathogens in Australian dairy calves with diarrhea[J].Australian Veterinary Journal,2011,89(5):167-173.

    [4] Soltan M A,Wilkes R P,Elsheery M N,et al. Circulation of bovine viral diarrhea virus-1(BVDV-1)in dairy cattle and buffalo farms in Ismailia province,Egypt[J].Journal of Infection in Developing Countries,2015,9(12):1331-1337.

    [5] Yong-Il Cho,Won-Il Kim,Siyuan Liu,et al.Development of a panel of multiplex real-time polymerase chain reaction assays for simultaneous detection of major agents causing calf diarrhea in feces[J]. J.Vet.Diagn.Invest.,2010,22(7):509-517.

    [6]周芳,岳華,張斌,等.牦牛輪狀病毒VP6基因序列分析及RT-PCR檢測方法的建立與應用[J].畜牧獸醫(yī)學報,2016,47(7):1465-1473.

    [7] Engel M,Krupke R,et al.A novel pancoronavirus RT-PCR assay:frequent detection of human coronavirus NL63 in children hospitalized with respiratory tract infections in Belgium[J].BMC Infectious Dis -eases,2005,5(1):166-168.

    [8] Gong X,Liu L,Zheng F,et al.Molecular investigation of bovine viral diarrhea virus infection in yaks(Bos gruniens)from Qinghai,China[J].Virology Journal,2014,11(1):619.

    [9] Moreno C,Romero J,Espejo R T.Polymorphism in repeated 16S rRNA genes is a common property of type strains and environmental isolates of the genus vibrio[J].Microbiology,2002,148(4):1233-1239.

    [10]姜宣鵬,張煥容.產(chǎn)腸毒素大腸埃希菌K99菌毛基因的克隆與原核表達[J].動物醫(yī)學進展,2014,35(5):12-16.

    [11]陳新諾,張朝輝,徐林,等.青藏高原牦牛感染BVDV和BEV的分子流行病學調(diào)查[J].動物醫(yī)學進展,2016,37(9):35-38.

    [12]達娃次仁,格桑卓瑪,貢嘎,等.牦牛源大腸桿菌西藏分離株的血清型鑒定[J].黑龍江畜牧獸醫(yī),2013(21):160-161.

    [13]郝一妹,張煥容,張斌,等.川西北牦牛源產(chǎn)腸毒素大腸桿菌的分子流行病學調(diào)查[J].西南民族大學學報(自然科學版),2014,40(1):16-19.

    Pathogen Diagnosis of a Case of Yak Diarrhea

    Li Fan1,A Ji2,Yan Zhou2,et al.
    (1.College of Life Science and Technology,Southwest University for Nationalities,Sichuan Chengdu 610041;2.Agriculture and Animal Husbandry and Water Authority of Ruoergai County,Sichuan Ruoergai 624500,China)

    There were some prominent feature of the diseases with diarrhea in yak of some farmers at Ruoergai area,Sichuan province,which spreaded rapidly and its incidence rate was 100%.In order to find out the causes,6 diarrhea samples were collected,Trizol regent kit and phenol-chloroform extraction methods were used to extract total RNA and DNA of diarrhea feces,then yak rotavirus(RV),bovine coronavirus(BcoV),bovine viral diarrhea virus(BVDV),Salmonella,enterotoxigenic escherichiacoli(ETEC)were detected by specific PCR methods.The results showed that the amount of the five kinds of pathogens were 6,0,6,0,5,which meaned that yak diarrhea was mainly caused by mixed infection of yak RV,BVDV and ETEC.

    Yak diarrhea;Pathogen;Yak rotavirus;Bovine viral diarrhea virus

    S858.234.43

    :B

    :1001-8964(2017)02-0029-03

    2016-11-29

    “十三五”國家重點研發(fā)計劃(2016YFD0500907)

    李凡(1992-),女(壯族),云南文山人,研究生,主要從事動物病原分子生物學研究。

    *

    :湯承,博士,教授。

    猜你喜歡
    腸毒素牦牛犢牛
    美仁大草原的牦牛(外一章)
    散文詩(2021年22期)2022-01-12 06:13:54
    產(chǎn)腸毒素大腸桿菌病商用疫苗的研究進展
    跟著牦牛去巡山
    某市致病性弧菌及腸毒素的檢測分析
    金黃色葡萄球菌腸毒素研究進展
    一列犢牛消化不良性腹瀉的診治
    犢牛腹瀉的發(fā)生和防治
    目前牦??谔阋叩脑\斷與防治
    重組輪狀病毒腸毒素NSP4肽段aa112-175的免疫佐劑活性研究
    犢牛水中毒的發(fā)生及預防
    国产一区二区在线av高清观看| 秋霞伦理黄片| 免费搜索国产男女视频| 亚洲欧美成人综合另类久久久 | 日韩人妻高清精品专区| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 亚洲美女搞黄在线观看| 午夜福利视频1000在线观看| 久久6这里有精品| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区| videos熟女内射| 老司机影院成人| 成人特级av手机在线观看| 欧美精品一区二区大全| 国产午夜福利久久久久久| 超碰97精品在线观看| 国产成人精品婷婷| 欧美一区二区精品小视频在线| 国产午夜精品一二区理论片| 日韩亚洲欧美综合| 国产精品三级大全| 边亲边吃奶的免费视频| 中文资源天堂在线| 国产精品久久久久久久久免| av卡一久久| 国产一区亚洲一区在线观看| 1000部很黄的大片| 日韩在线高清观看一区二区三区| 国产单亲对白刺激| 1024手机看黄色片| 乱人视频在线观看| 日日撸夜夜添| 亚洲怡红院男人天堂| 在线观看66精品国产| 亚洲av成人精品一区久久| 啦啦啦啦在线视频资源| 校园人妻丝袜中文字幕| 国产一区二区在线观看日韩| 欧美人与善性xxx| 天堂影院成人在线观看| 一本一本综合久久| 久久精品综合一区二区三区| 国产精品综合久久久久久久免费| 国产伦理片在线播放av一区| 成人亚洲精品av一区二区| 女人十人毛片免费观看3o分钟| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 国产精品综合久久久久久久免费| 99久久精品一区二区三区| 亚洲国产色片| 性插视频无遮挡在线免费观看| 少妇丰满av| 熟女电影av网| 国语自产精品视频在线第100页| a级毛色黄片| 亚洲av熟女| 我的女老师完整版在线观看| 男的添女的下面高潮视频| 欧美潮喷喷水| 久热久热在线精品观看| 国产乱来视频区| 日韩成人av中文字幕在线观看| 国产精品无大码| 亚洲国产精品久久男人天堂| 国产精品日韩av在线免费观看| 色5月婷婷丁香| 别揉我奶头 嗯啊视频| 久久久久性生活片| 亚洲精品影视一区二区三区av| 丰满人妻一区二区三区视频av| 两个人的视频大全免费| 国产精品不卡视频一区二区| 国产在线一区二区三区精 | 欧美成人a在线观看| 爱豆传媒免费全集在线观看| 久久久亚洲精品成人影院| 日韩,欧美,国产一区二区三区 | 国产三级中文精品| 小说图片视频综合网站| 亚洲三级黄色毛片| 国产精品蜜桃在线观看| 久久久色成人| 国产精品女同一区二区软件| 亚洲综合色惰| 三级国产精品欧美在线观看| 国产精品一区二区三区四区免费观看| 你懂的网址亚洲精品在线观看 | 欧美日韩精品成人综合77777| 黄色日韩在线| 精品久久久久久成人av| 99热全是精品| 嫩草影院入口| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片 精品乱码久久久久久99久播 | 国产精品1区2区在线观看.| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 欧美色视频一区免费| av卡一久久| 欧美激情在线99| 亚洲综合精品二区| 狂野欧美激情性xxxx在线观看| 免费电影在线观看免费观看| 日日啪夜夜撸| 久久精品国产99精品国产亚洲性色| 国产成人a∨麻豆精品| 激情 狠狠 欧美| 久久婷婷人人爽人人干人人爱| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 人体艺术视频欧美日本| 久久久久久久久中文| 别揉我奶头 嗯啊视频| 少妇人妻精品综合一区二区| 免费在线观看成人毛片| 一夜夜www| 亚洲av.av天堂| 亚洲精品自拍成人| 老司机影院毛片| 在线播放无遮挡| 欧美日本视频| 亚洲无线观看免费| 欧美一级a爱片免费观看看| 天堂影院成人在线观看| 欧美极品一区二区三区四区| 午夜激情欧美在线| 国产片特级美女逼逼视频| 我要看日韩黄色一级片| 最新中文字幕久久久久| 国产午夜福利久久久久久| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 国产真实伦视频高清在线观看| 日韩一本色道免费dvd| 国产黄片美女视频| 一级黄色大片毛片| 国产黄片美女视频| 亚洲经典国产精华液单| www.av在线官网国产| 亚洲人成网站在线观看播放| 高清毛片免费看| 中文在线观看免费www的网站| 免费黄网站久久成人精品| 成年免费大片在线观看| 麻豆成人午夜福利视频| 国模一区二区三区四区视频| 偷拍熟女少妇极品色| 欧美性猛交黑人性爽| 色综合站精品国产| av免费在线看不卡| 又粗又爽又猛毛片免费看| 亚洲欧美成人精品一区二区| 午夜激情欧美在线| 能在线免费看毛片的网站| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 国产视频首页在线观看| 精品久久久久久久久av| 亚洲av福利一区| 亚洲av免费在线观看| 婷婷六月久久综合丁香| 国内揄拍国产精品人妻在线| 日本色播在线视频| 日日啪夜夜撸| 亚洲av中文av极速乱| 91久久精品电影网| 国语自产精品视频在线第100页| 精品少妇黑人巨大在线播放 | 91久久精品电影网| 日韩精品青青久久久久久| 日本色播在线视频| 亚洲美女视频黄频| 97人妻精品一区二区三区麻豆| 国产高潮美女av| 国产免费一级a男人的天堂| 国产精品乱码一区二三区的特点| 国产精品永久免费网站| 蜜桃亚洲精品一区二区三区| 舔av片在线| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 嫩草影院新地址| 超碰av人人做人人爽久久| 成人午夜高清在线视频| 中国国产av一级| 国产精品女同一区二区软件| 在线观看美女被高潮喷水网站| 九九热线精品视视频播放| 亚洲欧洲日产国产| 国产欧美另类精品又又久久亚洲欧美| 日日撸夜夜添| 久久精品久久久久久噜噜老黄 | 插阴视频在线观看视频| 亚洲av成人av| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 国产一区亚洲一区在线观看| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 精品午夜福利在线看| 免费电影在线观看免费观看| 偷拍熟女少妇极品色| 国产成人福利小说| 成人特级av手机在线观看| 午夜亚洲福利在线播放| 午夜激情欧美在线| 中文字幕免费在线视频6| 亚洲av电影不卡..在线观看| 男人狂女人下面高潮的视频| 色尼玛亚洲综合影院| 久久久久久久国产电影| 亚洲人成网站高清观看| 午夜久久久久精精品| 久久久a久久爽久久v久久| 亚洲在线自拍视频| 十八禁国产超污无遮挡网站| 久久人妻av系列| 日韩一区二区视频免费看| 亚洲美女搞黄在线观看| 国产成人精品一,二区| 中文字幕av在线有码专区| 欧美日韩国产亚洲二区| 尾随美女入室| 欧美激情国产日韩精品一区| 人人妻人人看人人澡| 中文资源天堂在线| 国产黄片美女视频| 国产女主播在线喷水免费视频网站 | 91久久精品国产一区二区三区| 床上黄色一级片| 一边亲一边摸免费视频| 国产成人精品婷婷| 亚州av有码| 舔av片在线| 亚洲av熟女| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 国产亚洲精品久久久com| 男人和女人高潮做爰伦理| 简卡轻食公司| 嘟嘟电影网在线观看| 99久久成人亚洲精品观看| 国产高清三级在线| 午夜视频国产福利| 中文字幕av在线有码专区| 精品少妇黑人巨大在线播放 | 亚洲自偷自拍三级| 麻豆国产97在线/欧美| 久久久久久久午夜电影| 欧美性感艳星| 一二三四中文在线观看免费高清| 亚洲精品国产av成人精品| 午夜爱爱视频在线播放| 桃色一区二区三区在线观看| 久久久国产成人精品二区| 亚洲精品456在线播放app| 免费看日本二区| 欧美高清性xxxxhd video| 亚洲精品一区蜜桃| 一级爰片在线观看| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| h日本视频在线播放| 免费观看在线日韩| 亚洲乱码一区二区免费版| 成人国产麻豆网| 99久久中文字幕三级久久日本| 国产精品日韩av在线免费观看| 我要搜黄色片| 丰满少妇做爰视频| 毛片女人毛片| 人妻系列 视频| 亚洲久久久久久中文字幕| 亚洲在线自拍视频| 伦精品一区二区三区| 插逼视频在线观看| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 日本午夜av视频| 97超视频在线观看视频| 国产欧美另类精品又又久久亚洲欧美| 国产一区二区在线av高清观看| 观看美女的网站| 美女内射精品一级片tv| 日本一二三区视频观看| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频 | 国产色婷婷99| 欧美变态另类bdsm刘玥| 免费看光身美女| 在线a可以看的网站| 身体一侧抽搐| 午夜日本视频在线| 亚洲欧美日韩无卡精品| 久久久久精品久久久久真实原创| 免费av毛片视频| 精品久久国产蜜桃| 亚洲五月天丁香| 毛片女人毛片| 亚洲综合精品二区| 三级毛片av免费| 18禁动态无遮挡网站| 日本一本二区三区精品| av在线老鸭窝| 91精品一卡2卡3卡4卡| 大香蕉久久网| 国产极品天堂在线| 美女国产视频在线观看| 综合色丁香网| 欧美成人a在线观看| 欧美xxxx性猛交bbbb| 国产单亲对白刺激| 国产高清三级在线| 国产亚洲午夜精品一区二区久久 | 久久久a久久爽久久v久久| 欧美高清成人免费视频www| 日韩欧美 国产精品| 一边亲一边摸免费视频| 成人午夜高清在线视频| 少妇熟女欧美另类| 久久久久久久亚洲中文字幕| 免费看光身美女| 日本免费一区二区三区高清不卡| 高清日韩中文字幕在线| 嫩草影院新地址| 亚洲最大成人手机在线| 日韩一区二区三区影片| 中文字幕免费在线视频6| 国产综合懂色| 日韩国内少妇激情av| ponron亚洲| 久久久久久久久大av| 国产高清有码在线观看视频| 日韩亚洲欧美综合| 乱码一卡2卡4卡精品| 不卡视频在线观看欧美| 男的添女的下面高潮视频| 欧美精品国产亚洲| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频 | 国产亚洲精品av在线| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看| 国产视频内射| 成年女人永久免费观看视频| 久久人人爽人人爽人人片va| 高清av免费在线| 日本免费a在线| 男人的好看免费观看在线视频| 日韩高清综合在线| 中文字幕制服av| 免费看日本二区| 成人鲁丝片一二三区免费| 亚洲久久久久久中文字幕| 九九爱精品视频在线观看| 精品久久久久久久久久久久久| 精品人妻一区二区三区麻豆| 亚洲天堂国产精品一区在线| 亚洲人成网站在线观看播放| av在线亚洲专区| 国产成人一区二区在线| 黄色欧美视频在线观看| 国产久久久一区二区三区| 国产色爽女视频免费观看| 欧美潮喷喷水| 日韩欧美在线乱码| 中文资源天堂在线| 久久久久久久久久成人| 国内精品一区二区在线观看| 天天一区二区日本电影三级| 一级爰片在线观看| 中文字幕亚洲精品专区| 中文字幕制服av| 国产乱人偷精品视频| 波多野结衣巨乳人妻| 99久久九九国产精品国产免费| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 国产真实伦视频高清在线观看| 五月伊人婷婷丁香| 久久国产乱子免费精品| 国产视频首页在线观看| 亚洲精品影视一区二区三区av| 99热全是精品| 麻豆一二三区av精品| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线 | 国产亚洲一区二区精品| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 欧美zozozo另类| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 久99久视频精品免费| 一级黄片播放器| 久久精品国产亚洲av天美| 欧美日本视频| 国产午夜福利久久久久久| 久久久久精品久久久久真实原创| 精品久久久久久久久亚洲| 国产精品久久久久久精品电影| 我的女老师完整版在线观看| 亚洲av免费在线观看| a级毛片免费高清观看在线播放| 我要搜黄色片| 亚洲国产最新在线播放| 国产精品熟女久久久久浪| 一边摸一边抽搐一进一小说| 国产单亲对白刺激| av线在线观看网站| 日韩视频在线欧美| 色综合色国产| 99九九线精品视频在线观看视频| 日韩中字成人| 五月伊人婷婷丁香| or卡值多少钱| 亚洲国产色片| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看| 日韩大片免费观看网站 | 国产一区二区亚洲精品在线观看| 简卡轻食公司| a级一级毛片免费在线观看| 国产免费福利视频在线观看| 自拍偷自拍亚洲精品老妇| 久久精品久久久久久噜噜老黄 | 亚洲综合精品二区| 国产av在哪里看| 亚洲伊人久久精品综合 | 日韩在线高清观看一区二区三区| 白带黄色成豆腐渣| 少妇人妻一区二区三区视频| 校园人妻丝袜中文字幕| 一本一本综合久久| 亚洲av成人精品一区久久| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 自拍偷自拍亚洲精品老妇| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 日本一二三区视频观看| 成年免费大片在线观看| 国产成人精品一,二区| 三级国产精品欧美在线观看| 亚洲av成人av| 久久精品久久精品一区二区三区| 国产在线一区二区三区精 | 亚洲成人久久爱视频| 色视频www国产| 黄色欧美视频在线观看| 日韩,欧美,国产一区二区三区 | 欧美不卡视频在线免费观看| 国产午夜福利久久久久久| 纵有疾风起免费观看全集完整版 | 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 黄色欧美视频在线观看| 国产午夜精品一二区理论片| 老司机影院毛片| 国产真实伦视频高清在线观看| 国产一区亚洲一区在线观看| 两个人视频免费观看高清| 国产精品熟女久久久久浪| 亚洲美女搞黄在线观看| 国产午夜精品论理片| 成人毛片a级毛片在线播放| 精品久久久久久久久亚洲| 久久国产乱子免费精品| 国产精品一及| 久久综合国产亚洲精品| 精品久久久久久久末码| 国产真实乱freesex| 九九爱精品视频在线观看| 赤兔流量卡办理| 国产免费福利视频在线观看| 97人妻精品一区二区三区麻豆| 亚洲欧美精品自产自拍| 九九热线精品视视频播放| 免费在线观看成人毛片| 精品国产一区二区三区久久久樱花 | 亚洲人成网站高清观看| 欧美激情久久久久久爽电影| 日韩欧美 国产精品| 一个人免费在线观看电影| 久久精品久久久久久久性| 久久久久久久久中文| 久久久久久久久久久免费av| 美女脱内裤让男人舔精品视频| www日本黄色视频网| 一级毛片久久久久久久久女| 中文字幕精品亚洲无线码一区| 国产精品久久久久久久电影| 麻豆国产97在线/欧美| 青春草国产在线视频| 午夜免费男女啪啪视频观看| 少妇人妻一区二区三区视频| 一个人免费在线观看电影| 国产精品熟女久久久久浪| 真实男女啪啪啪动态图| 欧美精品一区二区大全| 床上黄色一级片| 干丝袜人妻中文字幕| 一个人看的www免费观看视频| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 日韩欧美精品免费久久| 国产在视频线在精品| 久久99蜜桃精品久久| 狂野欧美激情性xxxx在线观看| 热99re8久久精品国产| 国产一区有黄有色的免费视频 | 精品午夜福利在线看| 国产精品美女特级片免费视频播放器| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 看非洲黑人一级黄片| av在线播放精品| 欧美成人精品欧美一级黄| 精品酒店卫生间| 91久久精品国产一区二区三区| 亚洲国产精品成人久久小说| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| 国产精品一区二区三区四区久久| 在现免费观看毛片| 最近最新中文字幕大全电影3| 纵有疾风起免费观看全集完整版 | 精品无人区乱码1区二区| 99久久精品一区二区三区| 精品人妻偷拍中文字幕| 欧美性猛交黑人性爽| 青春草国产在线视频| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 久久人人爽人人爽人人片va| 精品久久久久久久末码| 亚洲久久久久久中文字幕| 在线播放国产精品三级| 神马国产精品三级电影在线观看| 综合色av麻豆| 一级黄片播放器| 欧美+日韩+精品| 午夜a级毛片| 一本久久精品| 国产亚洲av片在线观看秒播厂 | 免费av不卡在线播放| 国产精品日韩av在线免费观看| 人妻系列 视频| 欧美+日韩+精品| 男人舔女人下体高潮全视频| 久久精品国产亚洲网站| 亚洲无线观看免费| 欧美日韩在线观看h| 91在线精品国自产拍蜜月| 欧美日本视频| 精品熟女少妇av免费看| 国产精品日韩av在线免费观看| 在线播放国产精品三级| 国产精品一区二区性色av| av在线天堂中文字幕| 丝袜喷水一区| 国产女主播在线喷水免费视频网站 | 国产欧美另类精品又又久久亚洲欧美| 国产在视频线精品| 欧美最新免费一区二区三区| 久久久精品欧美日韩精品| 久久精品国产亚洲av天美| 色吧在线观看| 国产精品伦人一区二区| 五月伊人婷婷丁香| 最近的中文字幕免费完整| 永久网站在线| 亚洲欧洲日产国产| 晚上一个人看的免费电影| 欧美另类亚洲清纯唯美| 久久欧美精品欧美久久欧美| 乱系列少妇在线播放| 亚洲无线观看免费| 国产精品,欧美在线| 中文字幕制服av| 亚洲真实伦在线观看| 日韩高清综合在线| 熟女电影av网| 国产精品日韩av在线免费观看| 欧美另类亚洲清纯唯美| 国产一区二区三区av在线| 亚洲四区av| 网址你懂的国产日韩在线| 欧美一区二区国产精品久久精品| 99久久精品国产国产毛片| 久久精品国产亚洲av涩爱| 亚洲18禁久久av| 免费人成在线观看视频色| 能在线免费观看的黄片| 久久久久久久久久成人| 在线观看美女被高潮喷水网站| 午夜精品一区二区三区免费看| 免费观看a级毛片全部| 亚洲av电影不卡..在线观看| 男人舔奶头视频| 美女黄网站色视频| 99热6这里只有精品| 日本免费在线观看一区| 国产伦精品一区二区三区视频9| 精品久久久久久久久久久久久| 中文欧美无线码| 人妻少妇偷人精品九色| 91久久精品电影网| 欧美激情在线99| 成人美女网站在线观看视频| 长腿黑丝高跟| 天堂影院成人在线观看| 午夜a级毛片| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 深爱激情五月婷婷| 级片在线观看| 1000部很黄的大片| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 国产伦精品一区二区三区四那| 国产伦精品一区二区三区视频9| 精品人妻熟女av久视频| 日韩视频在线欧美| 久久久亚洲精品成人影院| 51国产日韩欧美| 国产精品1区2区在线观看.| 国产亚洲午夜精品一区二区久久 | 欧美成人a在线观看| 亚洲丝袜综合中文字幕| 国产黄a三级三级三级人| 成年免费大片在线观看| 三级国产精品欧美在线观看| 日韩成人av中文字幕在线观看| 精品人妻一区二区三区麻豆| 22中文网久久字幕| 最近中文字幕高清免费大全6| 伊人久久精品亚洲午夜| 亚洲av成人精品一二三区| 少妇人妻精品综合一区二区| 国产三级中文精品|