胃低分化腺癌中腫瘤易感基因101的表達(dá)與細(xì)胞增殖的關(guān)系

于鵬杰 戈 銳 王煥麗 張成武 燕 速 馬玉濱

(青海大學(xué)附屬醫(yī)院胃腸腫瘤外科，青海 西寧 810000)

胃低分化腺癌中腫瘤易感基因101的表達(dá)與細(xì)胞增殖的關(guān)系

于鵬杰 戈 銳 王煥麗1張成武 燕 速 馬玉濱

(青海大學(xué)附屬醫(yī)院胃腸腫瘤外科，青海 西寧 810000)

目的 觀察胃低分化腺癌中腫瘤易感基因(TSG)101蛋白的表達(dá)，關(guān)注其與增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)標(biāo)記的增殖指數(shù)的相關(guān)性。方法 57例經(jīng)病理確診為胃低分化腺癌的患者術(shù)后蠟塊組織作為觀察組，21例胃高分化腺癌術(shù)后組織作為對照組，21例正常胃黏膜組織作為正常對照組。三組中TSG101和PCNA的檢測應(yīng)用免疫組化SP法。結(jié)果 觀察組中TSG101表達(dá)的陽性率明顯低于對照組和正常對照組，PCNA表達(dá)的陽性率明顯高于對照組和正常對照組，觀察組中TSG101和PCNA表達(dá)的陽性率與腫瘤的脈管累犯、腫瘤最大徑密切相關(guān)，TSG101表達(dá)的陽性率與腫瘤的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，PCNA表達(dá)的陽性率與腫瘤的浸潤深度密切相關(guān)；相關(guān)分析顯示TSG101與PCNA呈負(fù)相關(guān)性。結(jié)論 TSG101在胃低分化腺癌中可能起抑癌基因樣的作用，TSG101可能通過對腫瘤細(xì)胞增殖進(jìn)行調(diào)節(jié)發(fā)揮作用。

胃腺癌；低分化；腫瘤易感基因(TSG)101；增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)；免疫組化

胃低分化腺癌是胃腺癌最常見的類型，最常見于中老年人，其侵襲和轉(zhuǎn)移的發(fā)生率高〔1〕。腫瘤在低分化狀態(tài)時腫瘤是高增殖性的，其細(xì)胞生長活躍〔2〕。腫瘤性病變形成過程是多基因參與、多種信號轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白調(diào)控的復(fù)雜生物學(xué)行為過程〔3〕。腫瘤易感基因(TSG)101于1997年克隆成功，定位于人類染色體11p15.1～p5.2，最近研究顯示TSG101可能與腫瘤的形成和進(jìn)展有關(guān)〔4,5〕。本實驗關(guān)注胃低分化腺癌中TSG101的表達(dá)及其與增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)標(biāo)記的增殖指數(shù)的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料 2011年1月至2013年12月我院確診為胃低分化腺癌并行手術(shù)治療的患者57例作為觀察組，切取術(shù)后的腫瘤組織，標(biāo)本均于取材后立即應(yīng)用10%甲醛固定、石蠟包埋、切片，烘干后待用。其中男30例，女27例，年齡32～75歲，平均56.5歲。術(shù)前均未行放化療，符合WHO中的診斷標(biāo)準(zhǔn)，并經(jīng)病理醫(yī)師確診。21例胃高分化腺癌術(shù)后組織作為對照組，其中男10例，女11例，年齡35～71歲，平均55.0歲。21例正常胃黏膜組織作為正常對照組，其中男11例，女10例，年齡34～72歲，平均57.6歲。三組性別、年齡分組均無明顯差異，具有可比性。

1.2 TSG101和PCNA的檢測方法 應(yīng)用免疫組化SP方法檢測TSG101和PCNA的表達(dá)，行二氨基聯(lián)苯胺(DAB)染色，嚴(yán)格按說明書進(jìn)行，做好質(zhì)量控制工作，努力減少誤差。

1.3 TSG101和PCNA的判讀 TSG101的陽性部位為細(xì)胞質(zhì)中，PCNA的陽性部位為細(xì)胞核，以出現(xiàn)清晰的棕黃色顆粒為陽性。每張切片選擇染色密集的上皮細(xì)胞分布區(qū)進(jìn)行計數(shù)，選擇3個400倍視野進(jìn)行觀察，計算陽性率的平均值，TSG101以<5%定為陰性，以≥5%定為陽性，PCNA以<25%定為陰性，以≥25%定為陽性。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計軟件行χ2檢驗、線性相關(guān)分析。

2 結(jié) 果

2.1 TSG101和PCNA在三組中陽性率的比較 TSG101在觀察組中的表達(dá)明顯低于對照組和正常對照組，PCNA在觀察組中的陽性率明顯高于對照組和正常對照組。見表1。

表1 TSG101和PCNA在三組中表達(dá)陽性率比較〔n(%)〕

組別nTSG101PCNA觀察組5720(35.1)42(73.7)對照組2115(71.4)6(28.6)正常對照組2120(95.2)1(4.8)χ2/P值8.193/0.00413.591/0.000

2.2 觀察組中TSG101和PCNA陽性率在不同臨床病理特征中的比較 觀察組中TSG101和PCNA表達(dá)的陽性率與腫瘤的脈管累犯、腫瘤最大徑密切相關(guān)，TSG101表達(dá)的陽性率與腫瘤的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，PCNA表達(dá)的陽性率與腫瘤的浸潤深度密切相關(guān)。見表2。

2.3 觀察組中TSG101和PCNA的相關(guān)性 TSG101和PCNA具有負(fù)相關(guān)性(r=-0.46,P<0.05)。

表2 觀察組中TSG101和PCNA陽性率在不同臨床病理特征中的比較〔n(%)〕

臨床特征nTSG101PCNA淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移 無2213(59.1)17(77.3) 有357(20.00)25(71.4) χ2/P值90.63/0.0030.238/0.761脈管累犯 無2513(52.0)14(56.0) 有327(21.9)28(87.5) χ2/P值5.592/0.0187.182/0.007腫瘤最大徑 <5cm1711(64.7)9(52.9) ≥5cm409(22.5)33(82.5) χ2/P值9.330/0.0025.375/0.020浸潤深度 未及漿膜239(39.1)13(56.5) 漿膜及以外3411(32.4)29(85.3) χ2/P值0.277/0.7785.857/0.016

3 討 論

分化在胃腺癌中的意義較大，其預(yù)示著不良的預(yù)后、侵襲性生長的生物學(xué)行為和較高的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率〔6〕。胃低分化腺癌的病因?qū)W涉及日常飲食、膽汁反流、幽門螺桿菌感染、腫瘤細(xì)胞的過度增生和氧化應(yīng)激反應(yīng)等〔7〕。TSG101最初在1996年通過隨機(jī)純合子敲除法在小鼠成纖維細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)的，破壞該基因純合子的功能可導(dǎo)致細(xì)胞發(fā)生轉(zhuǎn)化，恢復(fù)該基因的功能，細(xì)胞則恢復(fù)正常生長，因此其被認(rèn)為是一種抑癌基因〔8,9〕。TSG101的結(jié)構(gòu)中含有泛素結(jié)合酶E2結(jié)構(gòu)域、脯氨酸富含區(qū)及亮氨酸拉鏈結(jié)構(gòu)等功能結(jié)構(gòu)域，能實現(xiàn)復(fù)雜的生物學(xué)功能，如細(xì)胞內(nèi)泛素化、蛋白轉(zhuǎn)運(yùn)、轉(zhuǎn)錄調(diào)控及細(xì)胞增殖等生物學(xué)過程〔10,11〕。也有研究認(rèn)為TSG101可以通過干擾泛素連接酶小鼠雙微體(MDM)2催化區(qū)以維持MDM2蛋白不被降解〔12〕，進(jìn)而對P53/MDM2反饋抑制環(huán)進(jìn)行有效的調(diào)節(jié)〔13,14〕。也有觀點(diǎn)認(rèn)為TSG101可能調(diào)控P21的表達(dá)，促進(jìn)腫瘤的惡性進(jìn)展〔15〕。TSG101在不同腫瘤中的表達(dá)可能不完全相同。蔡存?zhèn)サ取?6〕觀察TSG101在肺癌組織和細(xì)胞系中的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)TSG101在肺鱗癌和肺腺癌中的表達(dá)水平低于相應(yīng)正常肺組織，認(rèn)為TSG101是一種候選的腫瘤抑制因子，但是普遍存在的TSG101異常轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物可能和肺癌類型相關(guān)。閆曦等〔17〕觀察TSG101在胰腺癌中的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)TSG101在腫瘤中高表達(dá)，認(rèn)為TSG101在腫瘤中的表達(dá)與分化程度和轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)性。TSG101在不同腫瘤或同一腫瘤不同類型中的表達(dá)可能不同，其對腫瘤調(diào)控的作用也不盡相同。

本實驗結(jié)果提示TSG101在腫瘤中表達(dá)下降，顯示TSG10作為腫瘤抑制基因起作用。TSG101可能作為一種顯性負(fù)調(diào)節(jié)因子參與泛素系統(tǒng)對細(xì)胞周期的調(diào)節(jié)，可能通過泛素靶蛋白或泛素系統(tǒng)中復(fù)合物來實現(xiàn)對腫瘤生長的調(diào)控作用〔18,19〕。本研究結(jié)果提示TSG101低表達(dá)、PCNA高表達(dá)可以促進(jìn)腫瘤脈管侵犯，這使腫瘤侵襲性及轉(zhuǎn)移能力增強(qiáng)，腫瘤細(xì)胞惡性程度增加。結(jié)果提示二者異常表達(dá)可以促進(jìn)腫瘤的生長及局部周圍組織的破壞，使腫瘤的侵襲能力增強(qiáng)。提示TSG101低表達(dá)在一定程度上可以促進(jìn)腫瘤的淋巴道播散。PCNA高表達(dá)與腫瘤的侵襲性相關(guān)，尤其對周圍組織的破壞能力。胃低分化腺癌是高增殖性的腫瘤，即以PCNA標(biāo)記的增殖指數(shù)明顯升高，此時腫瘤表現(xiàn)出極強(qiáng)侵襲性的生物學(xué)行為，尤其是對胃壁及胃壁以外組織，腫瘤細(xì)胞小、散、黏附力差，腫瘤細(xì)胞的遷移能力強(qiáng)，對局部破壞能力強(qiáng)，臨床手術(shù)不易切凈。TSG101在正常組織中高表達(dá)時可以有抑癌作用，其作用機(jī)制可能與對細(xì)胞增殖的抑制作用有關(guān)。當(dāng)TSG101表達(dá)下降或丟失時，其對腫瘤細(xì)胞增殖的抑制作用減弱，對腫瘤的形成和進(jìn)展起促進(jìn)作用。

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〔2015-03-19修回〕

(編輯 苑云杰)

于鵬杰(1980-)，男，碩士，主治醫(yī)師，主要從事胃腸腫瘤研究。

R735.2

A

1005-9202(2017)01-0121-03；

10.3969/j.issn.1005-9202.2017.01.053

1 青海大學(xué)附屬醫(yī)院腫瘤內(nèi)科一病區(qū)