丹參防治順鉑肝毒性的實(shí)驗(yàn)研究

曹思思，龔 雙，顏 苗，張畢奎

(中南大學(xué)1. 藥學(xué)院、2. 湘雅二醫(yī)院藥學(xué)部、3. 臨床藥學(xué)研究所，湖南 長(zhǎng)沙 410011)

◇研究簡(jiǎn)報(bào)◇

丹參防治順鉑肝毒性的實(shí)驗(yàn)研究

曹思思1,2,3，龔 雙1，顏 苗2, 3，張畢奎2, 3

(中南大學(xué)1. 藥學(xué)院、2. 湘雅二醫(yī)院藥學(xué)部、3. 臨床藥學(xué)研究所，湖南 長(zhǎng)沙 410011)

丹參；順鉑；肝毒性；小鼠；抗氧化；HO-1；

順鉑廣泛用于治療各種實(shí)體瘤，但由于其在肝臟蓄積，且肝臟對(duì)順鉑敏感性高[1]，高劑量給藥或低劑量重復(fù)給藥，患者肝毒性頻發(fā)。氧化應(yīng)激與順鉑所致肝臟病理?yè)p傷有密切關(guān)聯(lián)[2]。而丹參具有抗氧化，清除脂質(zhì)過氧化物的功效[3]。因此，本課題旨在研究丹參對(duì)順鉑給藥小鼠肝功能的影響，并探討其作用機(jī)制。

1 材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 SPF級(jí)♂ ICR小鼠，體質(zhì)量20 g～23 g，購(gòu)自湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司，許可證SCXK(湘)2011-0003。

1.2 藥物與試劑 丹參注射液(正大青春寶藥業(yè)有限公司)；順鉑(Sigma)；ALT、AST測(cè)定試劑盒(和光純藥工業(yè)株式會(huì)社)；SOD、GSH-Px、MDA檢測(cè)試劑盒(南京建成生物工程研究所)；一抗(Abcam)；二抗及β-actin (Proteintech)。

1.3 儀器 全自動(dòng)生化分析儀(日立公司)；電動(dòng)玻璃勻漿器(日本新芝)；酶標(biāo)儀(匯松公司)；低溫高速離心機(jī)(深圳黑馬)；電泳儀(BIO-RAD公司)；轉(zhuǎn)膜儀(北京六一生物科技有限公司)。

2 方法

2.1 分組 將小鼠隨機(jī)分為4組(n=9)：對(duì)照組(腹腔注射等體積生理鹽水)、丹參組(腹腔注射丹參3 g·kg-1)、順鉑組(單次腹腔注射順鉑20 mg·kg-1)、丹參+順鉑組(丹參連續(xù)給藥7 d，d 5腹腔注射順鉑)。實(shí)驗(yàn)d 8處死小鼠，取血和肝組織用作后續(xù)分析。

2.2 檢測(cè)指標(biāo) 全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定血清ALT、AST活性；肝臟HE染色，觀察病理變化；試劑盒測(cè)定肝勻漿SOD、GSH-Px活性和MDA含量；蛋白免疫印跡法檢測(cè)肝臟HO-1蛋白表達(dá)。

3 結(jié)果

3.1 肝功能 丹參保護(hù)組血清ALT、AST活性低于順鉑組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見Tab 1。

GroupALT/U·L-1AST/U·L-1Control36．80±6．17119．51±21．28Danshen36．22±5．12111．98±14．30Cisplatin65．82±5．71??293．90±43．60??Danshen+Cisplatin53．83±8．32##216．16±21．65##

**P<0.01vscontrol;##P<0.01vscisplatin.

3.2 肝臟病理切片 順鉑組小鼠出現(xiàn)輕微肝細(xì)胞水腫，炎性細(xì)胞浸潤(rùn)和壞死。丹參保護(hù)組肝組織形態(tài)結(jié)構(gòu)接近對(duì)照組，未見明顯病理改變。

3.3 SOD、GSH-Px活性及MDA含量 與順鉑組相比，丹參保護(hù)組SOD、GSH-Px活性增高，MDA含量降低，其中，GSH-Px和MDA組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見Tab 2。

GroupSOD/kU·g-1ProGSH?Px/kU·g-1ProMDA/μmol·g-1ProControl6．37±1．7656．99±20．803．71±1．64Danshen6．76±1．7054．84±20．163．23±1．27Cisplatin3．51±2．13?30．78±13．79?7．67±2．10??Danshen+Cisplatin5．89±2．8353．15±17．87#4．63±2．07##

*P<0.05,**P<0.01vscontrol;#P<0.05,##P<0.01vscisplatin

3.4 HO-1蛋白表達(dá) 丹參保護(hù)組HO-1蛋白含量高于順鉑組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。同時(shí)，與對(duì)照組相比，丹參組小鼠肝組織HO-1蛋白表達(dá)明顯上調(diào)(P<0.05)。

4 討論

本研究發(fā)現(xiàn)小鼠單次腹腔注射順鉑20 mg·kg-1引起血清轉(zhuǎn)氨酶升高，抗氧化物耗竭，脂質(zhì)過氧化物增加，與文獻(xiàn)報(bào)道一致[4]。首次證實(shí)丹參能拮抗順鉑所致肝臟氧化損傷，發(fā)揮防御作用。HO-1是血紅素代謝的限速酶，上調(diào)HO-1的表達(dá)能防治多種藥物所致肝組織病理?yè)p傷[5]。研究發(fā)現(xiàn)丹參能上調(diào)HO-1表達(dá)，發(fā)揮肝保護(hù)作用。由于丹參兼具抗腫瘤活性，因此，丹參與順鉑合并用藥可能發(fā)揮減毒增效的獨(dú)特優(yōu)勢(shì)。

(致謝：本實(shí)驗(yàn)在中南大學(xué)藥學(xué)院和湘雅市第二醫(yī)院藥學(xué)部實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行，在此對(duì)參與本試驗(yàn)研究和給予幫助的人員表示衷心感謝。)

[1] 廖英俊, 湯 浩,金亞平.抗癌藥順鉑對(duì)小鼠的耳、腎和肝毒性及其機(jī)制的研究[J].中國(guó)藥理學(xué)通報(bào),2004, 20(1):82-5.[1] Liao Y J,Tang H,Jin Y P.Study of toxic effects on hearing,kidney and liver of mice induced by anticancer agent of cisplatin and their mechanisms[J].ChinPharmacolBull,2004,20(1): 82-5.

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Preventive effects of Danshen on cisplatin-induced hepatotoxicity

CAO Si-si1,2,3, GONG Shuang1, Yan Miao2,3, ZHANG Bi-kui2,3

(1.SchoolofPharmaceuticalScience; 2.DeptofPharmacy,theSecondXiangyaHospital; 3.InstituteofClinicalPharmacy,CentralSouthUniversity,Changsha410011,China)

Danshen; cisplatin; hepatotoxicity; mice; antioxidant; HO-1

時(shí)間：2016-12-27 16:13

http://www.cnki.net/kcms/detail/34.1086.R.20161227.1613.050.html

2016-08-19,

2016-11-19

國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(No 81202985,81573686)

曹思思(1990-)，女，碩士，研究方向：臨床藥學(xué)，E-mail:1169233155@qq.com; 張華奎(1968-)，男，博士，教授，研究方向：臨床藥學(xué)，通訊作者，E-mail:zhbk68@163.com

10.3969/j.issn.1001-1978.2017.01.025

A

1001-1978(2017)01-0144-02

R-332；R282.71；R322.47；R575.1；R979.19