卵黃抗體在豬病防治上的應(yīng)用

李天芝，于新友，張 穎，沈志強(qiáng)，

（1.山東綠都生物科技有限公司，山東 濱州 256600；2.山東省濱州畜牧獸醫(yī)研究院，山東 濱州 256600）

卵黃抗體在豬病防治上的應(yīng)用

李天芝1，于新友1，張 穎2，沈志強(qiáng)1，2

（1.山東綠都生物科技有限公司，山東 濱州 256600；2.山東省濱州畜牧獸醫(yī)研究院，山東 濱州 256600）

卵黃抗體是禽類經(jīng)特異性抗原刺激由B淋巴細(xì)胞產(chǎn)生并移行至卵黃中的特異性抗體。卵黃抗體具有制作簡單方便、性質(zhì)穩(wěn)定、產(chǎn)量高、成本低等多種優(yōu)點，在動物的疾病診斷、治療、預(yù)防等方面有著廣泛的應(yīng)用。文章就卵黃抗體在豬病防治中的應(yīng)用情況進(jìn)行綜述。

卵黃抗體；豬?。环乐?；應(yīng)用

卵黃抗體（IgY）又稱卵黃免疫球蛋白，是禽類經(jīng)特異性抗原刺激由B淋巴細(xì)胞產(chǎn)生并移行至卵黃中的特異性抗體[1]。1893年，Klemperer首次報道了雞卵黃中富含抗體，1969年，Leslie和Clem將這種抗體命名為IgY，此后，各國學(xué)者就卵黃抗體不斷進(jìn)行深入研究，卵黃中IgY的濃度很高，而其它免疫球蛋白在卵黃里的含量很少，可以忽略不計。IgY具有強(qiáng)大的免疫功能，并具有穩(wěn)定性強(qiáng)、耐酸性、耐高溫、特異性強(qiáng)、制備簡單、成本低、適宜規(guī)?；a(chǎn)等優(yōu)點。目前卵黃抗體已被廣泛應(yīng)用于畜禽疾病的防治中，符合目前我國大陸地區(qū)的畜禽養(yǎng)殖條件與實際狀況，具有非常廣闊的應(yīng)用前景。本文綜述了IgY的特性及在豬病防治中的應(yīng)用研究情況。

1 卵黃抗體的結(jié)構(gòu)特點

IgY分子量為180 kD，其結(jié)構(gòu)與免疫球蛋白E（IgE）類似，同樣由兩條重鏈（H鏈）與兩條輕鏈（L鏈）組成，重鏈由1個可變區(qū)（V）與4個恒定區(qū)（Cυ1～Cυ4）組成，分子量為67～70 kD，輕鏈分子量為22～30 kD。IgY與免疫球蛋白G（IgG）相比沒有鉸鏈結(jié)構(gòu)，結(jié)構(gòu)更為穩(wěn)定，與IgG相比IgY疏水性更強(qiáng)，這與IgY存在于脂類含量較高卵黃內(nèi)的環(huán)境中是相對應(yīng)的。IgY等電點在pH 5.7～7.6之間。

2 卵黃抗體的優(yōu)勢

2.1 產(chǎn)量高、成本低、便于規(guī)?；a(chǎn)

卵黃抗體是從雞蛋中提取的，一枚蛋可獲得50～100 mg IgY，其中2%～10%為特異性抗體，平均1只雞每年可得到22 500 mg抗體，產(chǎn)量比較高。1只蛋雞每周的抗體產(chǎn)量相當(dāng)于9～10只兔子的抗體產(chǎn)量。而且飼養(yǎng)母雞也比較方便，其所產(chǎn)的蛋具有均一性好、收集方便快捷，以及價格便宜等優(yōu)點[2]。卵黃中沒有其它的免疫球蛋白，純度相對較高，提取抗體的技術(shù)已經(jīng)成熟，可以進(jìn)行大規(guī)模生產(chǎn)、提純方便，并在制備卵黃抗體時，不需要采集動物血液，不會對動物造成任何損傷，符合動物保護(hù)原則的要求。

2.2 理化性質(zhì)穩(wěn)定

穩(wěn)定性好、耐酸堿，4℃條件下，甚至可保存5～10年，其抗體活性無顯著損失，在室溫條件下，可保持抗體活性半年不變，37℃條件下，也可保持活性1個月。65℃時可以保持24 h以上，在70℃時，當(dāng)加熱90 min后，卵黃抗體的活性才會發(fā)生明顯下降。在pH 4～11時IgY能保持穩(wěn)定，活性幾乎不變[3]，低于pH 3.0時活性迅速下降。IgY耐高滲、耐高壓，60%濃度的蔗糖溶液中仍有活性，4 000 kg/cm2高壓下，仍可保持活性。IgY還有耐反復(fù)凍融的特性。卵黃抗體對胃蛋白酶抵抗力較強(qiáng)，能抵抗幼齡動物腸道中胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶的消化。這些特性使IgY的生產(chǎn)、加工、貯存、攝取及消化過程中維持其結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定和發(fā)揮生物學(xué)作用具有重要意義。

2.3 治療效果好，無副作用

用卵黃抗體治療畜禽疾病時起作用快，效果好，對病原的特異性強(qiáng)，病原不會產(chǎn)生耐藥性，不會產(chǎn)生繼發(fā)感染的現(xiàn)象[4]。有可能替代抗生素用于畜禽疾病的治療，安全可靠，無毒副作用和不良反應(yīng)，當(dāng)IgY與病原發(fā)生作用后，殘留部分會被機(jī)體視為營養(yǎng)物質(zhì)分解掉。IgY作為一種優(yōu)質(zhì)蛋白源，對畜禽還有一定的促生長作用。

3 卵黃抗體的作用機(jī)理

IgY抗菌的機(jī)理主要是IgY能黏附于細(xì)菌的細(xì)胞壁，破壞細(xì)菌的完整性，從而抑制細(xì)菌的生長繁殖，也可以直接黏附于菌毛上和鞭毛上，使其不能黏附于腸上皮細(xì)胞，阻礙細(xì)菌擴(kuò)散、運(yùn)動[5]。IgY還能與細(xì)菌毒素發(fā)生中和反應(yīng)，減輕細(xì)菌毒素對動物機(jī)體的損傷。IgY抗病毒的機(jī)理主要是IgY與病毒顆粒表面多個受體結(jié)合時會破壞病毒的結(jié)構(gòu)，影響病毒膜與細(xì)胞表面的融合，抑制病毒核酸在細(xì)胞內(nèi)的復(fù)制。IgY也可以黏附于病毒衣殼上，抑制病毒的生長繁殖。此外，部分IgY在腸道消化酶作用下，降解為容易被腸道吸收的可變小肽，這些小肽都含有抗體末端，易被腸道吸收，進(jìn)入血液后能與特定的病原黏附因子結(jié)合，使病原失去致病性，保護(hù)易感細(xì)胞免受病原的黏附和破壞。

4 卵黃抗體在豬病防治上的應(yīng)用

4.1 卵黃抗體在防治豬病毒病上的應(yīng)用

4.1.1 卵黃抗體在防治豬流行性腹瀉上的應(yīng)用 豬流行性腹瀉臨床表現(xiàn)為豬嘔吐、脫水和水樣腹瀉，是一種高度接觸性腸道傳染病。各日齡的豬均可感染豬流行性腹瀉病毒（PEDV）發(fā)病，其中哺乳仔豬受到的危害最嚴(yán)重[6]。Kweon等[7]用致弱的豬流行性腹瀉病毒免疫產(chǎn)蛋雞，提純卵黃抗體，進(jìn)行動物感染試驗。待仔豬感染豬流行性腹瀉病毒出現(xiàn)腹瀉癥狀后，日服卵黃抗體，觀察14 d，試驗組仔豬治愈率達(dá)73.7%，對照組僅為41.2%。宋維平等[8]將豬流行性腹瀉病毒免疫產(chǎn)蛋雞，收集高效價卵黃，經(jīng)提純制備抗體，對仔豬攻毒。待仔豬剛出現(xiàn)腹瀉癥狀時，對治療組飼喂卵黃抗體液，腹瀉癥狀明顯減輕，5 d后多數(shù)仔豬恢復(fù)，治愈率達(dá)83.3%。而對照組呈水樣腹瀉，全部脫水死亡，死亡率達(dá)到100%，兩者差異極顯著。李冰等[9]用PEDV SC株免疫產(chǎn)蛋雞，收集高免卵黃，采用水稀釋法和水稀釋-鹽析法獲得雞源抗PEDV卵黃抗體，采用已建立的ELISA方法對卵黃抗體效價進(jìn)行測定。以3日齡無母源抗體的易感仔豬為試驗動物，對抗PEDV卵黃抗體的治療效果及安全性進(jìn)行測定，并進(jìn)一步利用自然發(fā)病豬場的治療效果進(jìn)行驗證。結(jié)果表明，經(jīng)PEDV SC株細(xì)胞毒免疫的雞可在2次加強(qiáng)免疫后15 d產(chǎn)生高水平的特異性抗體。在實驗室治療試驗中，攻毒治療組仔豬的存活率達(dá)60%，攻毒對照組存活率為20%，用于自然發(fā)病豬場時，飼喂抗PEDV卵黃抗體飼料的仔豬存活率亦為60%，而自然發(fā)病對照組的存活率為10%。潘孝成等[10]用豬PEDV SD株免疫產(chǎn)蛋雞，收集卵黃制備出特異性PEDV抗體。人工感染后治療結(jié)果顯示，1次抗體治療組可減少死亡率50.0%，2次抗體治療組可減少死亡率83.3%，3家自然發(fā)病豬場的臨床應(yīng)用表明，相較于對照組，抗體治療組可減少仔豬死亡率分別為67.7個百分點、57.0個百分點和77.5個百分點。崔煥忠等[11]以豬傳染性胃腸炎和豬流行性腹瀉二聯(lián)滅活苗免疫產(chǎn)蛋雞，瓊脂擴(kuò)散方法檢測抗體效價達(dá)到1∶64時，收集卵黃，采用氯仿抽提和硫酸銨鹽析法純化卵黃抗體，進(jìn)行微生物學(xué)檢測、安全性試驗，通過人工感染治療試驗和臨床應(yīng)用，觀察其治療效果。結(jié)果人工感染治愈率為100%，臨床應(yīng)用治愈率為88.0%。

4.1.2 卵黃抗體在防治豬瘟上的應(yīng)用 豬瘟是豬的一種急性、熱性、高度接觸性傳染病，在世界范圍內(nèi)廣泛流行，其發(fā)病率和死亡率均高，對養(yǎng)豬業(yè)危害十分嚴(yán)重[12]。李建鑫[13]通過對病豬注射豬瘟高免卵黃抗體可明顯遏制患豬病情惡化，注射豬瘟高免卵黃抗體后3 d，試驗豬抗體水平明顯提高，連續(xù)觀察15 d，受試豬精神狀態(tài)良好，未見不適癥狀或死亡，保護(hù)率達(dá)100%。

4.1.3 卵黃抗體在防治豬圓環(huán)病毒病上的應(yīng)用 豬圓環(huán)病毒病臨床可表現(xiàn)為仔豬斷奶后多系統(tǒng)衰竭綜合征、豬呼吸道病綜合征、豬皮炎與腎炎綜合征等，是豬的免疫抑制性疾病。索江華等[14]自制豬圓環(huán)病毒2型滅活苗，免疫無特定病原體（SPF）產(chǎn)蛋雞，收集高免蛋，制備豬圓環(huán)病毒2型高免卵黃抗體，對高免卵黃抗體進(jìn)行無菌檢驗、活體動物安全性檢測，用瓊脂擴(kuò)散方法進(jìn)行效價檢驗和人工感染保育豬治療試驗，并將其應(yīng)用于臨床實踐，觀察其治療效果。結(jié)果抗體效價達(dá)到1∶64，人工感染治療試驗治愈率達(dá)100%，臨床試驗治愈率為96%，應(yīng)用效果良好。高嶺等[15]用豬圓環(huán)病毒2型滅活疫苗免疫健康雞群，收集高免蛋，用水稀釋法和飽和硫酸銨鹽法提純卵黃抗體，酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）抗體檢測試劑盒檢測血清抗體和卵黃抗體效價。結(jié)果顯示，卵黃抗體的產(chǎn)生滯后于血清抗體，且卵黃抗體效價變化幅度小于血清抗體，卵黃抗體穩(wěn)定性好，血清抗體最高效價可達(dá)5 000，提純的抗體濃度最高為9 200 μg/mL。

4.1.4 卵黃抗體在防治豬藍(lán)耳病上的應(yīng)用 豬藍(lán)耳病臨床表現(xiàn)主要為母豬繁殖障礙、仔豬呼吸道病癥狀等，具有高度接觸傳染性，既能垂直傳播又能水平傳播。高睿等[16]采用高致病性豬藍(lán)耳病滅活疫苗免疫產(chǎn)蛋雞，收集高免蛋，通過水稀釋提取法制備豬藍(lán)耳?。≒RRS）高免卵黃抗體，對其進(jìn)行無菌檢驗、安全性檢測、效力檢驗及動物保護(hù)性試驗，并將其應(yīng)用于臨床實踐，觀察其治療效果。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，該方法制備的PRRS高免卵黃抗體瓊脂擴(kuò)散效價達(dá)到1∶32，保護(hù)率達(dá)100%，臨床試驗治愈率為84.5%。崔煥忠等[17]以豬藍(lán)耳病滅活苗免疫產(chǎn)蛋雞，采用ELISA方法檢測卵黃抗體效價，收集高效價卵黃，采用氯仿抽提和硫酸銨鹽析法純化卵黃抗體。ELISA方法測定收集抗體效價為1∶8 000，測定純化的抗體濃度為7.85 mg/mL，微生物學(xué)檢驗及安全性試驗表明制備的卵黃抗體安全可靠，人工感染治愈率和臨床應(yīng)用治愈率分別為100%和89.1%。

4.1.5 卵黃抗體在防治非洲豬瘟上的應(yīng)用 高又文等[18]為研究非洲豬瘟病毒p54抗原蛋白及其相應(yīng)卵黃抗體的生物學(xué)特性，制備p54蛋白及相應(yīng)雞卵黃抗體。可溶性表達(dá)制備高純度p54抗原蛋白，并制定合理的免疫程序，免疫產(chǎn)蛋母雞，定時采血并收集雞蛋。卵黃液經(jīng)粗提取后二次鹽析，制備特異性卵黃抗體。ELISA結(jié)果顯示，在首次免疫7 d后的血清中即可檢測出相應(yīng)抗體，14 d后在卵黃中提取到相應(yīng)抗體，35 d后IgY效價達(dá)到峰值。經(jīng)SDS-PAGE檢測，制備所得純度達(dá)到90%，得率在8.8 g/L以上。Western-blot檢測結(jié)果顯示，純化的IgY具有高度特異性。

4.2 卵黃抗體在防治豬細(xì)菌病上的應(yīng)用

4.2.1 卵黃抗體在防治豬大腸桿菌病上的應(yīng)用 豬大腸桿菌病是由病原性大腸桿菌引起的仔豬一類腸道傳染性疾病。常見的有仔豬黃痢、仔豬白痢和仔豬水腫病3種，以發(fā)生腸炎、腸毒血癥為特征。Yokoyama等[19]將提純的產(chǎn)腸毒素性大腸桿菌（ETEC）的K88、K99、987P制成單價菌毛蛋白苗，免疫蛋雞獲得卵黃抗體粉末，ELISA檢測結(jié)果表明，抗K88、K99、987P的卵黃抗體能夠特異性地與相應(yīng)的菌毛抗原作用。用卵黃抗體對不同ETEC菌株攻毒的新生仔豬進(jìn)行口服治療，治療組仔豬全部存活，而對照組仔豬死亡率超過80%。高云英等[20]用ETEC的K88、K99、987P標(biāo)準(zhǔn)菌株和地方分離菌株制成多價菌體卵黃抗體經(jīng)預(yù)防、攻毒試驗及臨床治療效果觀察，對新生仔豬免疫保護(hù)率可達(dá)90%以上，3日齡仔豬攻毒保護(hù)率達(dá)98%以上，3～11日齡仔豬臨床治愈率達(dá)95%以上。李心海等[21]用豬大腸桿菌滅活疫苗免疫產(chǎn)蛋母雞，收集高免卵黃，制備雞抗豬大腸桿菌特異性高免卵黃抗體，并進(jìn)行動物試驗，結(jié)果表明該制劑安全性好，當(dāng)口服劑量達(dá)到4 mL時，試驗組仔豬保護(hù)率可達(dá)100%，而未經(jīng)口服免疫的仔豬發(fā)病率達(dá)30.8%～37.5%。趙姝靜等[22]為了研究用不耐熱腸毒素B亞基（LTB）和耐熱腸毒素（STa）的融合蛋白制備雞卵黃抗體的方法及其中和作用，試驗將LTB和STa的編碼基因串聯(lián)并在大腸桿菌中表達(dá)獲得了重組蛋白，以重組蛋白為免疫原免疫8月齡海蘭蛋雞制備了卵黃抗體，分別用兔腸段結(jié)扎試驗和乳鼠灌胃試驗進(jìn)行了卵黃抗體對不耐熱腸毒素（LT）和STa的體內(nèi)中和試驗。結(jié)果表明：用LTB和STa融合蛋白免疫產(chǎn)蛋雞可誘導(dǎo)產(chǎn)生抗LTB和STa的卵黃抗體，其中抗LTB效價最高可達(dá)1∶8 647，抗STa效價最高可達(dá)1∶768，卵黃抗體對LT和STa均有中和作用。說明用融合蛋白作為免疫原制備的卵黃抗體具有抗LT和STa的生物學(xué)活性，對仔豬大腸桿菌性腹瀉的臨床治療有潛在的應(yīng)用價值。

4.2.2 卵黃抗體在防治豬鏈球菌病上的應(yīng)用 豬鏈球菌病是豬的常發(fā)病，各年齡段豬均可感染發(fā)病，斷奶仔豬所受危害最嚴(yán)重，臨床表現(xiàn)為豬腦膜炎、關(guān)節(jié)炎、心內(nèi)膜炎、敗血癥、肺炎和突然死亡。靖寧等[23]先用豬鏈球菌活疫苗（ST171）免疫蛋雞，10 d后，用豬鏈球菌活疫苗（ST171）和豬鏈球菌2型滅活疫苗進(jìn)行第2次免疫，10 d后，再用豬鏈球菌2型滅活疫苗加強(qiáng)免疫1次，15 d后，收集雞蛋，抽檢卵黃，抗體效價達(dá)1∶1 024，制備了豬鏈球菌高免卵黃液。小鼠與豬免疫試驗表明安全性良好。對病豬注射豬鏈球菌高免卵黃液，可明顯遏止病情惡化，注射后3 d，試驗豬抗體水平明顯提高，連續(xù)觀察15 d，受試豬精神狀態(tài)良好，未見不適癥狀或死亡，預(yù)防保護(hù)率達(dá)100%。

5 小結(jié)與展望

卵黃抗體在防治動物疾病方面有很多優(yōu)點，如價廉、速效、生產(chǎn)工藝簡便、無污染、無抗藥性、無殘留、安全等。將來在防治某些畜禽疾病方面很可能替代抗生素和化學(xué)合成藥物，同時還具有促生長作用[24]。在畜禽疾病防治方面有著廣闊的應(yīng)用前景。但在卵黃抗體的開發(fā)和臨床應(yīng)用方面也存在一些問題，首先，卵黃抗體是高蛋白物質(zhì)、營養(yǎng)豐富、生產(chǎn)制備過程中很容易受到細(xì)菌的污染。其次，卵黃抗體對疾病初期、臨床表現(xiàn)輕微時治療效果較好，當(dāng)病情發(fā)展到一定程度時，效果不佳。再次，半衰期短，不能持久發(fā)揮作用，一般用于疾病的預(yù)防和緊急治療，今后需要開發(fā)成一些長效制劑，以達(dá)到最佳效果。最后，卵黃抗體還含有大量磷蛋白和脂肪，注入肌肉難以吸收而造成局部腫脹、壞死和過敏反應(yīng)。目前禽類卵黃抗體研究較為成熟和完善，有著成熟的生產(chǎn)工藝，而對豬的卵黃抗體研究相對較少，大部分處于試驗室階段，希望可以借助禽卵黃抗體的豐富經(jīng)驗加快豬用卵黃抗體的研發(fā)進(jìn)度，在抗原制備（敏感性、免疫方法、高免蛋的生產(chǎn)抗體滴度）、抗體提取與純化（精制、包被）及使用方法（注射、口服）、技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)化等方面取得一定的發(fā)展。今后卵黃抗體在豬病防治方面必將發(fā)揮更大的作用。

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（編輯：郭玉翠）

抗生素耐藥性年致死或千萬人

【英國《每日快報》網(wǎng)站3月19日報道】美國哈佛大學(xué)的一個研究小組制作了一段駭人的視頻，清晰展示了僅僅30年后抗生素耐藥性就可能每年造成1 000萬人死亡。

抗生素耐藥性一直是令醫(yī)療專家恐懼的問題，他們急于找到某種方法應(yīng)對這個致命的問題。

哈佛大學(xué)醫(yī)學(xué)院制作的一段視頻展示了這個世界末日現(xiàn)象的駭人規(guī)模，即到2050年每年可能有1 000萬人死于抗生素耐藥性。

據(jù)《抗菌素耐藥性評估》報告說，估計目前歐洲和美國每年有大約5萬人死于無法醫(yī)治的感染。僅在英國，每年就至少有1.2萬人死于對抗生素有耐藥性的超級細(xì)菌感染，這個數(shù)字超過死于乳腺癌的人數(shù)。

哈佛大學(xué)的視頻首次讓我們一窺大規(guī)模的致命細(xì)菌如何適應(yīng)高劑量抗生素并幸存下來。

研究小組研究了大腸桿菌如何在培養(yǎng)皿中適應(yīng)逐步提高劑量的抗生素。經(jīng)過了兩個星期的觀察，科學(xué)家發(fā)現(xiàn)一小群細(xì)菌對越來越高劑量的抗生素變得具有耐藥性。這些耐藥細(xì)菌隨后產(chǎn)生了更多的耐藥菌株。

研究報告作者之一羅伊·基肖尼說：“這有力地展示了細(xì)菌對抗生素產(chǎn)生耐藥性有多么容易?！?/p>

如果抗生素耐藥性這一發(fā)展趨勢不停止，那么到本世紀(jì)中期每年可能造成多達(dá)1 000萬人死亡。

僅僅30年后，抗生素耐藥性就可能變得比癌癥和心臟病更致命。

最近的英國國民保健制度（NHS）統(tǒng)計數(shù)字顯示，抗生素使用量不斷增加，而如此有害的藥物只應(yīng)該用作最后的手段。

科學(xué)家用“徹底的瘋狂”來形容這一趨勢，并警告說這可能意味著作為“最后希望”的藥物，抗生素在10年后就可能變得對人類無效。

感染性疾病顧問邁克爾·魏因布倫博士說：“耐藥性意味著我們正被迫使用有嚴(yán)重副作用的藥物，對某些患者來說，你不再有別的選擇?！?/p>

去年，英格蘭首席醫(yī)療官員薩莉·戴維斯把日益嚴(yán)重的藥物耐藥性描述為一場“抗生素導(dǎo)致的大災(zāi)難”，并把世界各地抗生素?zé)o效的嚴(yán)重程度與恐怖主義的嚴(yán)重性相提并論。

戴維斯在2016年的評論中說：“抗生素的黃金時代—在50多年里被全世界授權(quán)濫用—結(jié)束了，一種非?？赡艿那樾问?，近來的死亡率下降時代將被死亡率多年上升所取代?！?/p>

她提到，這可能意味著一個簡單的傷口就會證明是致命的，過去很容易治愈的感染（比如結(jié)核病和淋病）已再度成為嚴(yán)重的健康威脅。

由于嚴(yán)重的抗生素耐藥性，就連那些接受器官移植的患者可能也不得不依靠自身免疫系統(tǒng)來防止身體對捐獻(xiàn)器官產(chǎn)生排異反應(yīng)。

（轉(zhuǎn)自參考消息[N]，2017-03-22）

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山東省現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系生豬產(chǎn)業(yè)創(chuàng)新團(tuán)隊項目（SDAIT-08-17）；山東省自然科學(xué)基金青年基金項目（ZR2014CQ010）；濱州市科技發(fā)展計劃項目（2013GG0304）

李天芝（1985-），女，山東菏澤人，助理研究員，碩士，主要從事動物傳染病診斷與防控研究工作.E-mail：517493935@qq.com