HCV核心抗原檢測在丙型肝炎感染早期診斷中的應用研究

江 靈， 李 晟， 王芝瑤， 燕德敏， 黃遠帥， 王雨涵

丙型肝炎(簡稱丙肝)是由丙型肝炎病毒(hepatitis C virus，HCV)導致的一種呈全球流行的病毒性肝炎，也是輸血傳播的感染性疾病之一。HCV屬黃病毒科黃病毒屬，為單股正鏈核糖核酸(ribonucleic acid,RNA)病毒，主要攻擊人體肝細胞，變異性極強，不同年齡、性別和種族人群均對HCV易感。據(jù)統(tǒng)計，全球有1.15億～1.85億人感染HCV，有39.9萬人死于HCV感染導致的肝硬化或原發(fā)性肝癌(hepatocellular carcinoma，HCC)[1]。在病毒性肝炎中，丙肝的發(fā)病率高，僅次于乙肝，我國HCV感染率年均增長14.4%，嚴重威脅人們的健康[2]。目前尚無有效的預防性丙肝疫苗可用[3]，且本病發(fā)病隱蔽，早期癥狀不明顯，不易被發(fā)覺[4-5]。臨床實驗室檢查是丙肝早期診斷的主要依據(jù)，在本病的早期診斷和治療中起著重要作用。本研究旨在探討丙肝病毒核心抗原(hepatitis C virus core antigen,HCV-cAg)與丙型肝炎病毒核酸(hepatitis C virus ribonucleic acid,HCV-RNA)及谷丙轉(zhuǎn)氨酶(glutamic-pyruvic transaminase,ALT)的關(guān)系及其在丙肝感染早期診斷中的應用價值。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇2020年1月至2021年7月西南醫(yī)科大學附屬醫(yī)院接治的血清HCV-cAg陽性患者90例，其中男48例，女42例，年齡33～77(48.68±14.25)歲；血清丙型肝炎抗體(hepatitis C virus antibody,HCV-Ab)陽性患者164例，其中男88例，女76例，年齡33～72(46.45±16.76)歲。兩組性別和年齡比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。排除有甲、乙、戊型肝炎患者；有血液透析史者；合并自身免疫性肝炎、脂肪肝、酒精性肝炎等其他類型非特異性免疫原性肝病患者；有肝臟腫瘤者；合并有人類免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV)感染并且未進行抗病毒治療者。

1.2研究方法 留取兩組研究對象的空腹外周靜脈血8 ml，3 000 r/min離心10 min后分離血清，進行相關(guān)實驗指標檢測。

1.2.1 HCV-cAg檢測 采用山東萊博生物科技有限公司生產(chǎn)的丙肝核心抗原檢測試劑盒，按照試劑說明書和實驗室操作規(guī)程進行實驗。應用化學發(fā)光法免疫分析儀測定光密度(optical density,OD)值，S/CO(sample′s optical density/cut-off)值[S/CO中的CO為cut-off，S/CO是樣本OD值與臨界質(zhì)控(陽性對照)OD值之比]>1判定為陽性。

1.2.2 HCV-Ab測定 采用安圖生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的丙型肝炎病毒IgG抗體檢測試劑盒，按照試劑說明書和實驗室操作規(guī)程進行實驗。應用全自動化學發(fā)光法測定儀測定OD值，S/CO值>1判定為陽性。

1.2.3 HCV-RNA檢測 嚴格按照羅氏丙型肝炎病毒核酸檢測試劑盒說明書操作，采用羅氏COBAS AmpliPrep對丙肝病毒進行提取，以COBAS Tasman進行核酸的擴增檢測。HCV-RNA含量>500 IU/ml為陽性。

1.2.4 ALT檢測 采用邁瑞B(yǎng)S-2000M生化分析儀檢測，ALT>40 IU/L判定為肝功能結(jié)果異常。

2 結(jié)果

2.1HCV-cAg、HCV-Ab與HCV-RNA、ALT的關(guān)聯(lián)性分析結(jié)果 90例HCV-cAg陽性患者中，HCV-RNA陽性76例(84.44%)，肝功能異常54例(60.00%)。164例HCV-Ab陽性患者中，HCV-RNA陽性114例(69.51%)，肝功能異常75例(45.73%)。HCV-cAg陽性組的HCV-RNA陽性率以及肝功能異常率均顯著高于HCV-Ab陽性組(P<0.05)。見表1。

表1 HCV-cAg、HCV-Ab與HCV-RNA、ALT的關(guān)聯(lián)性分析結(jié)果[n(%)]

2.2HCV-cAg檢測的S/CO值與HCV-RNA陽性及肝功能異常的關(guān)聯(lián)性分析結(jié)果 以HCV-cAg檢測的S/CO值不同分為1.01～5.00、5.01～10.00、10.01～15.00和>15.00四個組。結(jié)果顯示，HCV-cAg檢測的S/CO值與肝功能異常率存在關(guān)聯(lián)性(P<0.05)，與HCV-RNA陽性率關(guān)聯(lián)性不顯著(P>0.05)。見表2。

表2 HCV-cAg檢測的S/CO值與HCV-RNA陽性及肝功能異常的關(guān)聯(lián)性分析結(jié)果[n(%)]

3 討論

3.1丙肝是HCV感染所致的傳染病，主要經(jīng)由母嬰傳播、輸血或血制品傳播、性傳播[6]。丙肝感染初期一般都是急性丙肝期，這個時期是治療丙肝的最佳時期，經(jīng)過有效的抗病毒治療，HCV可以從體內(nèi)徹底清除，完全治愈。但是丙肝起病隱匿[7]，沒有明顯的臨床癥狀，最初患者并不知曉，因而錯失最佳治療時間，嚴重者發(fā)展為肝硬化和肝癌。目前，丙肝感染的發(fā)病機制仍不完全清楚，而且HCV的變異性較高，迄今沒有針對丙肝的預防性疫苗。因此，實驗室檢查對本病的早期診斷及控制有重要的意義。目前，實驗室用于丙肝的檢測方法主要是HCV-Ab檢測和HCV-RNA檢測。其中HCV-RNA可反映患者血清中HCV的病毒載量，是病毒分裂增殖的標志，也可間接反映患者病情的變化，是臨床進行抗病毒治療的指征。一般當患者感染HCV 7～14 d時，血清中即可檢測到HCV-RNA，并且特異度和靈敏度均較高，因此將HCV-RNA檢測結(jié)果作為金標準[8-9]。但HCV-RNA檢查對標本以及實驗室環(huán)境和設(shè)備的要求都比較高，如果實驗標本采集保存不當，會導致病毒核酸降解，導致假陰性。同時，病毒核酸檢測對實驗室的要求比較嚴苛，檢測價格昂貴，耗時較長，對檢測人員要求高，很難在基層醫(yī)院開展，不適于早期丙肝感染篩選[10-11]。

3.2HCV-Ab檢測是目前診斷丙肝的常規(guī)篩查方法，因為其操作簡便，靈敏度高，不易被污染，已經(jīng)廣泛應用在臨床檢驗中。但是，HCV-Ab不是中和性抗體，沒有保護機體的作用，僅能反映患者的既往感染或者現(xiàn)癥感染，有一定的窗口期，平均為70 d[12-13]，長的可至6～9個月或更長。對于個別因免疫缺陷或免疫系統(tǒng)發(fā)育不完全者，HCV-Ab可持續(xù)陰性，因此HCV-Ab檢測存在假陰性問題。另外，HCV抗體可終身攜帶，HCV-Ab陽性不代表體內(nèi)一定有HCV復制。本研究164例HCV-Ab陽性患者中，HCV-RNA陽性114例(69.51%)。HCV-Ab不能用于監(jiān)測抗病毒療效，不能區(qū)別既往感染，不能說明患者是否攜帶HCV，不能及時對病毒感染進行診斷[14]，不適于丙肝感染的早期診斷與治療。ALT水平是臨床常規(guī)檢測的指標，是肝臟的特異性酶，正常情況下ALT主要存在于肝細胞質(zhì)中，血清中的活性較低，而當肝細胞受到損害時，ALT會大量釋放入血液中，是肝細胞損傷或死亡的敏感指標[15-16]。在HCV感染中，病毒核心蛋白等刺激機體的免疫應答，造成肝細胞壞死及功能破壞，ALT水平明顯升高，是HCV感染患者癌變的一個有效預測因子，提示肝內(nèi)炎癥在疾病進展中起著關(guān)鍵作用，故而將ALT用于疾病輔助診斷[17-18]。本文90例HCV-cAg陽性患者中，肝功能異常54例(60.00%)；164例HCV-Ab陽性患者中，肝功能異常75例(45.73%)，并且，隨著HCV-cAg檢測的S/CO值的增高，肝功能異常率也在不斷升高。以上提示HCV-cAg陽性能更好反映肝功能狀態(tài)，對臨床診療效果評價有更重要的意義。

3.3目前，HCV-cAg檢測越來越受到研究者的青睞。研究發(fā)現(xiàn)HCV-cAg可在感染后2～3周內(nèi)檢測到，幾乎與HCV-RNA相同[19]，并與HCV-RNA檢測結(jié)果高度相關(guān)[20]，因此，Chang等[21]認為HCV-cAg是丙肝檢測的重要指標，這與本文的研究結(jié)果一致。本研究中，90例HCV-cAg與HCV-RNA檢測的符合率為84.44%，顯著高于HCV-Ab的符合率69.51%。HCV-cAg可以區(qū)分既往感染的HCV或現(xiàn)癥感染的HCV，可作為HCV感染的早期檢測指標。同時HCV-cAg還可用于監(jiān)測抗病毒療效和預測持續(xù)病毒學應答(continuous virological response，SVR)[22-23]。本文90例HCV-cAg陽性患者的肝功能異常率為60.00%，顯著高于HCV-Ab陽性組(45.73%)。

綜上所述，HCV-cAg檢測與核酸檢測的符合率高，并且方法簡單，價格便宜，對實驗環(huán)境和設(shè)備要求以及操作人員的資歷要求不高，適合各層次醫(yī)院開展普查，便于在基層醫(yī)院推廣，對丙肝的早期篩查和療效的評估具有重要意義。