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    化學(xué)

    2017-01-27 12:00:48
    關(guān)鍵詞:水相化學(xué)發(fā)光分析方法

    汪晨,吳潔,宗晨,等

    化學(xué)

    化學(xué)發(fā)光免疫分析方法與應(yīng)用進(jìn)展

    汪晨,吳潔,宗晨,等

    化學(xué)發(fā)光免疫分析是將化學(xué)發(fā)光檢測(cè)系統(tǒng)與免疫反應(yīng)相結(jié)合,用化學(xué)發(fā)光相關(guān)的物質(zhì)標(biāo)記抗體或抗原,與待測(cè)的抗原或抗體反應(yīng)后,經(jīng)過分離游離態(tài)的化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物,加入化學(xué)發(fā)光體系中的其它相關(guān)反應(yīng)產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光,進(jìn)行抗原或抗體的定量或定性檢測(cè)?;瘜W(xué)發(fā)光免疫分析方法具有選擇性好、靈敏度高、分析速度快、設(shè)備簡(jiǎn)單、線性范圍較寬等優(yōu)點(diǎn),在環(huán)境、臨床、食品、藥物檢測(cè)等領(lǐng)域得到了廣泛應(yīng)用,日益受到人們的青睞。在實(shí)際應(yīng)用中,常常需要對(duì)大量復(fù)雜樣品或低豐度分析物樣品進(jìn)行測(cè)定。而經(jīng)典商品化的免疫分析方法所需時(shí)間長(zhǎng)、樣品消耗多、成本高,不能滿足這些要求。因而建立快速、高通量、高靈敏和低成本的免疫檢測(cè)方法已成為化學(xué)發(fā)光免疫分析方法的研究熱點(diǎn)和發(fā)展趨勢(shì)。本文總結(jié)了近幾年化學(xué)發(fā)光免疫分析方法學(xué)研究與應(yīng)用進(jìn)展。包括:(1)減少溫育時(shí)間。通過外場(chǎng)驅(qū)動(dòng)或?qū)θ芤哼M(jìn)行有效混合策略加快抗原、抗體等生物大分子的傳質(zhì)速率,或提高反應(yīng)體系的溫度來加速免疫反應(yīng)的動(dòng)力學(xué),從而實(shí)現(xiàn)快速免疫檢測(cè);(2)多組分檢測(cè)。多組分免疫分析模式主要有多組分同時(shí)檢測(cè)模式和順序檢測(cè)模式兩種。同時(shí)檢測(cè)模式常結(jié)合空間分辨技術(shù)與陣列檢測(cè)器實(shí)現(xiàn)對(duì)多個(gè)待測(cè)物進(jìn)行同時(shí)檢測(cè);順序檢測(cè)則是在一段時(shí)間內(nèi)對(duì)多個(gè)組分逐個(gè)進(jìn)行檢測(cè);(3)信號(hào)放大技術(shù)。納米技術(shù)的發(fā)展為高靈敏化學(xué)發(fā)光免疫分析方法的發(fā)展提供了契機(jī),使得納米粒子在生物標(biāo)記分析得到了廣泛應(yīng)用。已有多種基于金納米粒子信號(hào)放大方法用于高靈敏免疫分析。利用DNA標(biāo)記抗體,通過免疫反應(yīng)后的分子生物學(xué)信號(hào)放大,也是實(shí)現(xiàn)高靈敏化學(xué)發(fā)光免疫分析的有效途徑。這些例子證明化學(xué)發(fā)光免疫分析法具有廣泛的應(yīng)用前景和可操作性,論文進(jìn)一步指出了未來的發(fā)展方向及研究重點(diǎn),包括:(1)化學(xué)發(fā)光成像技術(shù)、化學(xué)發(fā)光免疫分析與分離技術(shù)的聯(lián)用,可以使免疫分析的選擇性、靈敏度和檢測(cè)速度、檢測(cè)通量得到進(jìn)一步提高;(2)為了更好地適應(yīng)臨床、環(huán)境等領(lǐng)域的實(shí)際應(yīng)用,需要大力發(fā)展微型化、集成化和自動(dòng)化的化學(xué)發(fā)光免疫分析儀器;(3)隨著分子生物學(xué)及納米與傳感技術(shù)的進(jìn)步,新的化學(xué)發(fā)光免疫分析原理與高靈敏的免疫分析方法將得到不斷發(fā)展,發(fā)展新型標(biāo)記技術(shù)用于信號(hào)放大,建立化學(xué)發(fā)光免疫分析新方法。

    來源出版物:分析化學(xué), 2012, 40(1): 3-10

    入選年份:2015

    超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定柑橘及柑橘精油中4種農(nóng)藥殘留

    孔志強(qiáng),董豐收,劉新剛,等

    摘要:我國(guó)柑橘種植面積和產(chǎn)量均位列世界第一。柑橘除用于鮮食外,也可加工成柑橘精油等副產(chǎn)品。柑橘精油被廣泛用于食品工業(yè)和日化工業(yè),具有美容保健、鎮(zhèn)靜止痛等作用。為了保證柑橘的產(chǎn)量,吡蟲啉、多菌靈、咪鮮胺和高效氯氰菊酯等作為柑橘上常用的殺蟲殺菌劑應(yīng)用十分廣泛,難免導(dǎo)致柑橘及其制品中存在農(nóng)藥殘留,給人體健康帶來潛在威脅。精油作為柑橘果皮中的一種化學(xué)成分,主要通過水蒸汽蒸餾法、壓榨法、和溶劑浸提法提取獲得,由于加工過程中水分丟失,很可能增加農(nóng)藥殘留的濃度。目前已報(bào)道的柑橘中農(nóng)藥的殘留檢測(cè)方法主要采用高效液相色譜、氣相色譜、液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用及酶聯(lián)免疫法等。采用氣相或液相色譜法易受雜質(zhì)干擾,且靈敏度低;酶聯(lián)免疫方法操作過程繁瑣,且條件要求苛刻;而液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用方法溶劑消耗量大、耗時(shí)長(zhǎng)。本研究針對(duì)樣品前處理過程和超高效液相色譜-電噴霧串聯(lián)質(zhì)譜方法(UPLC-MS/MS)分離條件進(jìn)行了優(yōu)化。QuEChERS(Quick,Easy,Cheap,Effective,Rugged和Safe)方法因其快速、簡(jiǎn)易、價(jià)廉等特點(diǎn),在農(nóng)殘分析領(lǐng)域被廣泛應(yīng)用。該方法中樣品量和提取劑的體積比多采用1︰1,但在本實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)回收率較低,用體積相當(dāng)于2倍樣品量的提取劑提取,回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差均能得到滿意的結(jié)果。由于柑橘精油中含水量較少,在提取過程中加入了10 mL水,保證了柑橘精油較好的回收率。進(jìn)一步考察了C18、Shield RP18、HILIC、Phenyl等4種不同固定相的色譜柱對(duì)4種目標(biāo)農(nóng)藥的分離效果。結(jié)果表明,采用C18色譜柱可獲得最理想的分離效果。分別從選擇性,靈敏度和分離效果的角度考察了不同流動(dòng)相對(duì)4種農(nóng)藥的色譜行為和離子化程度的影響。結(jié)果表明,當(dāng)流動(dòng)相為甲醇-水體系時(shí),儀器響應(yīng)值高于乙腈-水為流動(dòng)相時(shí)的響應(yīng)值。此外,在比較了甲醇-水體系中分別加入2%乙酸和2 mmol/L乙酸銨后,發(fā)現(xiàn)以甲醇-2 mmol/L乙酸銨水溶液作為流動(dòng)相時(shí),可獲得最優(yōu)的色譜分離效果和質(zhì)譜信號(hào)響應(yīng)。最終建立了柑橘及柑橘精油中吡蟲啉、多菌靈、咪鮮胺和高效氯氰菊酯4種農(nóng)藥的多殘留分析方法。采用乙腈作提取劑、N-丙基乙二胺(PSA)為分散凈化劑的QuEChERS方法,利用UPLC-MS/MS在多反應(yīng)離子監(jiān)測(cè)模式下進(jìn)行檢測(cè),外標(biāo)法定量。在0.01~1 mg/kg添加水平范圍內(nèi),平均回收率為73.5%~113.3%,相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.9%~19.6%。方法:檢出限(LOD)在0.02~0.6 μg/kg范圍內(nèi),定量限(LOQ)在0.06~2 μg/kg范圍內(nèi)。建立了快速、簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、靈敏和高效的分析方法。

    來源出版物:分析化學(xué), 2012, 40(3): 474-477

    入選年份:2015

    基于輕質(zhì)萃取劑的溶劑去乳化分散液-液微萃取-氣相色譜法測(cè)定水樣中多環(huán)芳烴

    祝本瓊,陳浩,李勝清

    摘要:目的:分散液-液微萃取技術(shù)(DLLME)具有操作簡(jiǎn)單、快速、高效等優(yōu)點(diǎn),已成為一種極具潛力的分離富集技術(shù)。傳統(tǒng)DLLME以密度大于水的有機(jī)溶劑為萃取劑,需通過離心將有機(jī)相與水相分離,離心成為實(shí)驗(yàn)過程中最耗時(shí)的環(huán)節(jié),且受限于離心設(shè)備。本文提出以密度小于水的輕質(zhì)溶劑為萃取劑,建立了無需離心步驟的溶劑去乳化分散液-液微萃取-氣相色譜(SD-DLLME-GC)測(cè)定水樣中多環(huán)芳烴的新方法。方法:基于輕質(zhì)溶劑的溶劑去乳化分散液-液微萃?。⊿DDLLME)技術(shù),將輕質(zhì)萃取劑和分散劑的混合液快速注入水相,形成霧化體系,加入一定量去乳化劑,破壞霧化體系,實(shí)現(xiàn)有機(jī)相與水相的分離。比較了分散劑、去乳化劑的種類及體積;溶劑輔助分散和超聲波輔助分散兩種制備霧化體系方式的影響,將基于輕質(zhì)溶劑的SD-DLLME-氣相色譜(GC)用于環(huán)境水樣中多環(huán)芳烴的測(cè)定。結(jié)果:(1)比較了超聲波輔助與溶劑輔助分散兩種模式的萃取效果,結(jié)果表明溶劑輔助分散對(duì)分析物有更高的萃取率,超聲波可能增加了有機(jī)物的揮發(fā)性損失,且在水相中注入甲苯時(shí)霧化效果不好。(2)萃取劑選擇40 μL的甲苯時(shí),萃取效果最好。甲苯與多環(huán)芳烴有相似的結(jié)構(gòu)有利于萃取。(3)分散劑選擇500 μL的丙酮時(shí),萃取效率最高。(4)去乳化劑選擇800 μL的乙腈時(shí),萃取率最高。20℃時(shí),乙腈的表面張力大于丙酮、甲醇,破壞乳化體系的能力較強(qiáng)。(5)萃取時(shí)間在0~5 min范圍內(nèi)對(duì)萃取率沒有明顯影響。由于溶劑輔助分散的效果較好,萃取劑與水相的接觸面積非常大,分析物從水相到萃取相的萃取平衡在數(shù)秒內(nèi)即已完成。(6)鹽的加入水平在0~250 g/L范圍內(nèi)對(duì)萃取率沒有明顯影響??赡苁怯捎诙喹h(huán)芳烴分析物在甲苯中的溶解度較大,其萃取過程受水相中離子強(qiáng)度的影響較小。(7)以40 μL甲苯為萃取劑,500 μL丙酮為分散劑,800 μL乙腈為去乳化劑,方法在20~500 μg/L范圍內(nèi)呈現(xiàn)出良好的線性(r2=0.9942~0.9999),多環(huán)芳烴的檢出限(S/N=3)為0.52~5.11 μg/L。用所建立的方法平行測(cè)定5份質(zhì)量濃度為40 μg/L的多環(huán)芳烴標(biāo)準(zhǔn)水樣,其含量的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.2%~13.6%。本法已成功用于實(shí)際水樣中多環(huán)芳烴的分析,并測(cè)得其加標(biāo)回收率為80.2%~115.1%。結(jié)論:建立了基于輕質(zhì)溶劑的溶劑去乳化分散液-液微萃取-氣相色譜測(cè)定水樣中多環(huán)芳烴的新方法。與傳統(tǒng)DLLME相比,SD-DLLME可采用輕質(zhì)有機(jī)溶劑為萃取劑,有效拓寬了可用于DLLME技術(shù)的萃取劑范圍,有利于擴(kuò)大其應(yīng)用;并且,通過溶劑去乳化作用實(shí)現(xiàn)分相,避免離心步驟,使其操作更為簡(jiǎn)單、快速。利用這一特點(diǎn),有可能采取SD-DLLME對(duì)野外環(huán)境水樣進(jìn)行原地樣品前處理,提高分析效率。

    來源出版物:色譜, 2012, 30(2): 201-206

    入選年份:2015

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