葛根素對(duì)免疫抑制模型小鼠細(xì)胞免疫功能的影響

高 青 馬記平

鄭州澍青醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校 河南省鄭州市 450064

葛根素對(duì)免疫抑制模型小鼠細(xì)胞免疫功能的影響

高 青 馬記平

鄭州澍青醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校 河南省鄭州市 450064

目的：觀察葛根素對(duì)免疫抑制模型小鼠細(xì)胞免疫功能的影響，初步研究其作用機(jī)制。方法：通過(guò)小鼠體重、臟器指數(shù)以及IFN-γ/IL-4比值等，檢測(cè)葛根素對(duì)免疫抑制模型小鼠細(xì)胞免疫功能的影響。結(jié)果：免疫抑制模型小鼠體重、臟器指數(shù)以及IFN-γ/IL-4比值都顯著下降。葛根素Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組小鼠體重、臟器指數(shù)以及IFN-γ/IL-4比值都顯著升高。結(jié)論：葛根素提高小鼠的細(xì)胞免疫功能，其機(jī)制可能和促進(jìn)脾臟T淋巴細(xì)胞增值，糾正T淋巴細(xì)胞亞群Th1/Th2比例紊亂有關(guān)。

葛根素；細(xì)胞免疫；Th1/Th2近年來(lái)，由于環(huán)境污染、精神壓力等多種因素刺激，免疫紊亂性疾病逐年升高，該類疾病發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，遷延難愈。有研究發(fā)現(xiàn)[1]葛根素能夠增加免疫器官的重量，

對(duì)T淋巴細(xì)胞的增值分化有一定的促進(jìn)作用，葛根素在治療免疫紊亂疾病上有獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)，引起廣泛的重視。本研究用環(huán)磷酰胺誘導(dǎo)免疫抑制模型小鼠[2]，在造模的基礎(chǔ)上給予不同濃度的葛根素片，研究葛根素對(duì)免疫抑制模型小鼠細(xì)胞免疫功能的影響，并初步研究其可能的作用機(jī)制。

1 實(shí)驗(yàn)的材料

1.1 試劑與儀器

RPMI1640細(xì)胞培養(yǎng)液（焦作路非凡生物科技有限公司，批號(hào)30021）；四甲基偶氮唑鹽（MTT，新鄉(xiāng)智寶生物科技有限公司，批號(hào)：M2126）；葛根素片（鄭州荔諾生物科技有限公司，批號(hào)：120523）；小鼠IL-4、IFN-γ的ELISA檢測(cè)試劑盒（鄭州唯爾生物科技）。

1.2 動(dòng)物與分組

KM種雄性小鼠（18～22g）120只，由山東魯抗醫(yī)藥股份有限公司提供，生產(chǎn)許可證號(hào)SCXK（魯）2013-0001。將動(dòng)物置于清潔級(jí)動(dòng)物房?jī)?nèi)，自由攝食1周后實(shí)驗(yàn)。按隨機(jī)區(qū)組分組法將小鼠分組，每組10只。試驗(yàn)前3d，正常組腹腔注射0.1mL/10g的生理鹽水，其余各組小鼠腹腔注射環(huán)磷酰胺100mg/kg，連續(xù)三天造免疫抑制模型[3]。試驗(yàn)第4d起，正常組灌胃生理鹽水，陽(yáng)性對(duì)照組灌胃香菇多糖（100mg/ kg），葛根素各組分別灌胃50、150、300mg/kg的葛根素溶液，各組0.1mL/10g BW連續(xù)灌胃給藥2周。

2 方法

2.1 葛根素對(duì)小鼠體重、臟器指數(shù)的影響

摘取小鼠的胸腺和脾臟，稱重記錄，按照下列公式計(jì)算臟器指數(shù)。脾臟指數(shù)=（脾臟重量mg/小鼠體重g）×10；胸腺指數(shù)=（胸腺重量mg/小鼠體重g）×10

2.2 血清中IFN-γ、IL-4的含量測(cè)定

沒(méi)有加抗凝劑的血液，在室溫放置2h后3500r?min-1離心10min，取上清，即得血清。按照ELISA試劑盒說(shuō)明書(shū)操作步驟進(jìn)行操作，最后酶標(biāo)儀在450nm下讀取吸光度。

3 數(shù)據(jù)處理

本實(shí)驗(yàn)采用SPSS17.0版的統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行了方差分析，實(shí)驗(yàn)結(jié)果用表示，實(shí)驗(yàn)的組間比較使用單因素方差分析，實(shí)驗(yàn)結(jié)果以P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)的意義。

4 結(jié)果

4.1 葛根素對(duì)小鼠體重、臟器指數(shù)的影響

根據(jù)最后一次各組小鼠體重相比發(fā)現(xiàn)，模型組小鼠體重、脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù)顯著低于正常組（P<0.01或P<0.05），葛根素組小鼠體重、脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù)顯著高于模型組小鼠（P<0.01或P<0.05）。見(jiàn)表1。

表1：葛根素對(duì)各組小鼠臟器指數(shù)、體重的影響（n=10）

表1：葛根素對(duì)各組小鼠臟器指數(shù)、體重的影響（n=10）

注：與正常組相比▲▲P<0.01，▲P<0.05；與模型組相比★P<0.05，★★P<0.01

組別體重（g）脾臟指數(shù)胸腺指數(shù)正常組32.14±0.6548.84±9.4320.35±4.29模型組27.35±0.64▲32.68±8.07▲▲10.72±1.82▲▲陽(yáng)性藥組32.25±0.56★53.41±10.28★★20.28±5.46★葛根素Ⅰ組29.50±1.4346.87±12.63★16.28±5.46葛根素Ⅱ組30.58±0.81★50.88±12.04★★18.65±5.06★葛根素Ⅲ組31.73±0.49★★47.25±11.69★20.59±6.17★

4.2 葛根素對(duì)小鼠血清中IFN-r和IL-4含量的影響

模型組和正常組相比，血清中IFN-r含量顯著降低（P<0.01），IL-4的含量升高（P<0.05），IFN-r/IL-4比值顯著升高（P<0.01），葛根素組小鼠與模型組小鼠相比，血清中IFN-r含量顯著升高（P<0.01，P<0.05），IL-4的含量明顯升高（P<0.05），IFN-r/IL-4比值顯著升高（P<0.01，P<0.05）。見(jiàn)表2。

表2：葛根素對(duì)血清中IL-4和IFN-r含量的影響

5 討論

脾臟、胸腺是重要的免疫器官，其重量及功能在一定程度上影響機(jī)體的免疫功能，其中脾臟淋巴細(xì)胞增殖能力是機(jī)體細(xì)胞免疫能力的主要指標(biāo)之一[5]。T淋巴細(xì)胞是相當(dāng)復(fù)雜的不均一體，在體內(nèi)不同細(xì)胞因子刺激下可分化為T(mén)h2型、Th1型細(xì)胞。Th1型細(xì)胞分泌IFN-γ、IL-2[6]等，主要介導(dǎo)了細(xì)胞免疫應(yīng)答。但是Th2型細(xì)胞主要分泌IL-4、IL-5等，主要介導(dǎo)體液免疫應(yīng)答，輔助抗體生成[7]。正常情況下，Th1/Th2處于一種相對(duì)穩(wěn)定的狀態(tài)，維持機(jī)體免疫穩(wěn)態(tài)，但是當(dāng)機(jī)體免疫抑制等癥狀時(shí)，出現(xiàn)Th1/Th2比例的失衡。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)葛根素能夠上調(diào)血清中IFN-γ含量，降低血清中IL-4含量，升高IFN-γ/IL-4比值，改善Th1/Th2比例，進(jìn)而影響小鼠的細(xì)胞免疫功能。葛根素可能通過(guò)促進(jìn)脾臟T淋巴細(xì)胞增值，刺激Th1型細(xì)胞分化增生，糾正T淋巴細(xì)胞亞群Th1/Th2細(xì)胞比例紊亂，提高免疫抑制小鼠的免疫功能。

[1]程麗彩.葛根素對(duì)機(jī)體免疫系統(tǒng)影響研究進(jìn)展[J].實(shí)用中醫(yī)藥雜志,2010,26(06):440-441.

[2]包匯慧,耿雪,賈旭東,等.環(huán)磷酰胺對(duì)大鼠脾細(xì)胞抑制作用的研究[J].毒理學(xué)雜志,2014,28(03):189-194.

[3]陳健明,陳殿慧,余秀雪,等.玉屏風(fēng)藥液對(duì)環(huán)磷酰胺抑制的C57BL/6小鼠免疫功能的影響[J].現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志,2014,23(23):2509-2612.

[4]曾光,梁清華,吳漢軍,等.熊果酸對(duì)刀豆蛋白A誘導(dǎo)小鼠T細(xì)胞增殖與激活的影響[J].湖南中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),2008(02):16-18.

[5]于曉紅,李書(shū)丹,闞洪敏,等.紅樹(shù)莓原液對(duì)免疫抑制小鼠臟器指數(shù)及血清IFN-γ、IL-4水平的影響[J].天津中醫(yī)藥,2015,32(03):173-175.

[6]翟志敏.IL-2對(duì)免疫激活和免疫耐受的雙向調(diào)節(jié)作用[J].中國(guó)藥理學(xué)通報(bào),2013(03):319-322.

[7]李春光,王月飛,趙紅曄,等.化濕湯結(jié)合潤(rùn)膚止癢膏對(duì)濕疹小鼠血清IL-4和IFN-γ水平影響[J].中國(guó)中醫(yī)藥科技,2015,22(01):31-32.

高青（1987-），女，河南省鄭州市經(jīng)濟(jì)技術(shù)開(kāi)發(fā)區(qū)人。碩士學(xué)位?，F(xiàn)為鄭州澍青醫(yī)學(xué)高等專科學(xué)校助教，從事藥理學(xué)教學(xué)工作。