醇溶性枸杞子提取物的提取工藝研究

張繼斌，陳志元，江丹，徐浪，丁苗，梅菊

（勁牌生物醫(yī)藥有限公司，中藥保健食品質(zhì)量與安全湖北省重點實驗室，湖北大冶435100）

醇溶性枸杞子提取物的提取工藝研究

張繼斌，陳志元，江丹，徐浪，丁苗，梅菊

（勁牌生物醫(yī)藥有限公司，中藥保健食品質(zhì)量與安全湖北省重點實驗室，湖北大冶435100）

研究醇溶性枸杞提取物的提取工藝條件，使提取物易溶于酒體中且枸杞多糖含量成分的損失最小。采用水提醇沉和直接醇提2種提取方式，每種提取方式分別采用脫脂、去小分子等不同的前處理方式進(jìn)行組合，分別得到不同條件下的枸杞提取物。將提取物溶于酒體中，采用活性炭處理后，計算枸杞多糖成分的損失率，并觀察酒體的穩(wěn)定性。結(jié)果表明，采用60%vol乙醇直接醇提得到的提取物，在酒體溶解過程及活性炭處理過程中的枸杞多糖成分損失最小，其枸杞多糖成分的提取率為1.85%。醇溶性枸杞提取物最佳提取工藝為采用60%vol乙醇直接提取濃縮干燥，溶于酒體中可有效減少成分的損失。

枸杞提取物；醇溶性；提取工藝；枸杞多糖；提取率

枸杞提取物通常的提取工藝為：枸杞子藥材經(jīng)石油醚（60～90℃）回流脫脂2次，再用80%乙醚回流提取2次，殘渣采用水提—濃縮—醇沉，使含醇量達(dá)到80%，沉淀物經(jīng)多次洗滌后真空干燥[1-8]，所得提取物易溶于水，微溶于醇溶液。研究表明，枸杞多糖具有免疫調(diào)節(jié)[9-10]、抗疲勞[11-12]、抗腫瘤[13]、抗氧化[14-16]和保肝[17]等藥理學(xué)作用。

本公司所產(chǎn)白酒中添加了枸杞子提取物等多種功能因子，具有輔助降血脂功能。白酒中枸杞提取物現(xiàn)有添加工藝為先采用60%vol醇溶液充分溶解，過濾，然后將濾液加入到42%vol酒體中，采用活性炭處理，過濾即得。由于枸杞提取物在醇溶液中溶解性偏低的特性，現(xiàn)有生產(chǎn)工藝在溶解、降度和活性炭處理過程中枸杞多糖成分均有大量的損失。為減少枸杞提取物在酒體中的成分損失，本實驗根據(jù)現(xiàn)有酒體調(diào)配生產(chǎn)工藝，分別采用水提醇沉和直接醇提2種提取方式，醇沉濃度、醇提濃度分別參考采用42%vol乙醇和60%vol乙醇，結(jié)合傳統(tǒng)的枸杞提取物脫脂、去小分子的提取工序，對醇溶性枸杞提取物的提取工藝進(jìn)行了研究，并將得到的提取物溶于酒體中進(jìn)行成分的跟蹤檢測和穩(wěn)定性觀察實驗，確定醇溶性枸杞提取物最佳提取工藝。

1 材料與方法

1.1 材料、試劑及儀器

材料與試劑：枸杞子藥材（公司提供）、葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品（中國食品藥品檢定研究院）、食用酒精、白酒酒體（酒精度42%vol和60%vol，勾兌車間提供）；硫酸、苯酚（分析純）。

儀器設(shè)備：T9型紫外分光光度計（北京普析通用儀器有限公司）、FA2004型電子天平（上海精密科學(xué)儀器有限公司）、SFG-2型電熱恒溫干燥箱（黃石恒豐醫(yī)療器械廠）、SK8200LHC型超聲提取器（上?？茖?dǎo)超聲儀器有限公司）。

1.2 實驗方法

1.2.1 固體樣品

取提取物適量，精密稱定，加入到50m L的容量瓶中，加入適量42%vol或60%vol乙醇，超聲溶解，放冷，定容。精密吸取適量的樣品溶液，水浴蒸干，加1m L水溶解，轉(zhuǎn)移至50m L離心管中，加入無水乙醇19m L，使含醇量達(dá)到95%。渦旋均勻，放入離心機(jī)中離心，轉(zhuǎn)速10000 r/m in，離心15m in，棄去上清液，殘渣加水溶解，定容至適量體積。取樣1m L，加水補(bǔ)至2.0m L，精密加入5%苯酚溶液1m L，搖勻，迅速精密加入硫酸5m L，搖勻，置沸水浴中煮沸15m in，取出冷卻至室溫，以相應(yīng)的試劑為空白，照紫外-可見分光光度法，在490 nm波長處測定。

1.2.2 液體樣品

精密吸取適量體積的供試品溶液，水浴蒸干，加1m L水溶解，轉(zhuǎn)移至50 m L離心管中，加入無水乙醇19m L，使含醇量達(dá)到95%。渦旋均勻，放入離心機(jī)中離心，轉(zhuǎn)速10000 r/m in，離心15m in，棄去上清液，殘渣加水溶解，定容至適量體積。取樣1m L，加水補(bǔ)至2.0m L，精密加入5%苯酚溶液1 m L，搖勻，迅速精密加入硫酸5m L，搖勻，置沸水浴中煮沸15m in，取出冷卻至室溫，以相應(yīng)的試劑為空白，照紫外-可見分光光度法，在490 nm波長處測定。

2 結(jié)果與分析

2.1 實驗研究——42%vol乙醇

2.1.1 提取工藝實驗

2.1.1.1 工藝參數(shù)

根據(jù)傳統(tǒng)枸杞提取物的提取工藝，分別選用95%vol乙醇替代石油醚（60～90℃）進(jìn)行脫脂，80%vol乙醇替代乙醚進(jìn)行去小分子，醇沉濃度和醇提濃度均為42%vol，每種工序的具體工藝參數(shù)見表1。

表1 工藝參數(shù)(42%vol乙醇)

2.1.1.2 工藝條件

根據(jù)上述工藝參數(shù)，選取不同的工序組合，分別采用水提醇沉和直接醇提2種方式進(jìn)行提取實驗，得到枸杞提取物，按1.2.1和1.2.2的測定方法測定提取物（液）中枸杞多糖的含量，并計算枸杞多糖的提取率，具體實驗結(jié)果見表2。

表2 提取工藝實驗結(jié)果（42%vol乙醇）

2.1.2 成分跟蹤實驗

分別精密稱取1號—9號樣品適量，加入到酒體（42%vol）中，超聲溶解，并定容至250m L。分別加入活性炭，攪拌均勻，靜置24 h后過濾。分別取活性炭處理前后的酒體，按1.2.2測定方法測定酒體中枸杞多糖的含量，并計算枸杞多糖成分的損失率，具體實驗結(jié)果見表3。

2.1.3 穩(wěn)定性實驗

將2.1.2過濾后的酒體，在-18℃條件下進(jìn)行穩(wěn)定性觀察，觀察周期7 d，同時選取不添加活性炭直接過濾酒體作為對照樣品，具體實驗結(jié)果見表4。

2.2 實驗研究——60%vol乙醇

2.2.1 提取工藝實驗

2.2.1.1 工藝參數(shù)

根據(jù)傳統(tǒng)枸杞提取物的提取工藝，分別選用95%vol乙醇替代石油醚（60～90℃）進(jìn)行脫脂，80%vol乙醇替代乙醚進(jìn)行去小分子，醇沉濃度和醇提濃度均為60%vol，每種工序的具體工藝參數(shù)見表5。

表3 成分跟蹤實驗結(jié)果(42%vol乙醇)

表4 穩(wěn)定性實驗結(jié)果(42%vol乙醇)

表5 工藝參數(shù)（60%vol乙醇）

2.2.1.2 工藝條件

根據(jù)上述工藝參數(shù)，選取不同的工序組合，分別采用水提醇沉和直接醇提的方式進(jìn)行提取實驗，得到枸杞提取物，按1.2.1的測定方法測定提取物中枸杞多糖的含量，并計算枸杞多糖的提取率，具體實驗結(jié)果見表6。

表6 提取工藝實驗結(jié)果(60%vol乙醇)

2.2.2 成分跟蹤實驗

2.2.2.1 直接添加方式

分別精密稱取1號—8號樣品適量，直接加入到酒體（42%vol）中，超聲溶解，并定容至500m L。分別加入活性炭，攪拌均勻，靜置24 h后過濾。分別取活性炭處理前后的酒體，按1.2.2測定方法測定酒體中枸杞多糖的含量，并計算枸杞多糖成分的損失率，具體實驗結(jié)果見表7。

表7 成分跟蹤實驗結(jié)果(60%vol乙醇)-直接添加

2.2.2.2 間接添加方式

分別精密稱取1號—8號樣品適量，先將提取物加入到25m L基酒（60%vol）中，超聲溶解，然后將溶液加入到475m L基酒（42%vol）中，混合均勻。分別加入活性炭，攪拌均勻，靜置24 h后過濾。分別取活性炭處理前后的酒體，按1.2.2的測定方法測定酒體中枸杞多糖的含量，并計算枸杞多糖成分的損失率，具體實驗結(jié)果見表8。

2.2.3 穩(wěn)定性實驗

將2.2.2過濾后的酒體，分別在-18℃條件下進(jìn)行穩(wěn)定性觀察，觀察周期7 d，具體實驗結(jié)果見表9。

2.3 提取條件對枸杞多糖提取率的影響

表8 成分跟蹤實驗結(jié)果(60%vol乙醇)-間接添加

表9 穩(wěn)定性實驗結(jié)果(60%vol乙醇)

綜合表2和表6的實驗結(jié)果，各種提取條件的提取物枸杞多糖提取率結(jié)果匯總見表10。

表10 枸杞多糖提取率結(jié)果(%)

脫脂條件的影響：從表10中對比1號和3號、2號和4號、5號和7號、6號和8號4組樣品的實驗結(jié)果，直接醇提方式中，兩者的提取率相差不大，表明脫脂條件對枸杞多糖提取率的影響較小。水提醇沉方式中，脫脂提取率稍低于未脫脂樣品，表明脫脂條件易降低枸杞多糖提取率。

去小分子條件的影響：從表10中對比1號和2號、3號和4號、5號和6號、7號和8號4組樣品的實驗結(jié)果，兩者的提取率相差較大，去小分子后樣品提取率低于未去小分子樣品，表明去小分子條件易降低樣品枸杞多糖的提取率。

提取方式的影響：從表10中對比1號和5號、2號和6號、3號和7號、4號和8號4組樣品的實驗結(jié)果，兩者的提取率相差較大，在42%vol乙醇提取中，水提醇沉方式提取率高于直接醇提方式。在60%vol乙醇提取中，直接醇提方式提取率高于水提醇沉方式。

乙醇濃度的影響：從表10中對比相同條件的樣品實驗結(jié)果，采用水提醇沉方式，42%vol乙醇提取率高于60%vol乙醇，即醇沉濃度越低，提取率越高。采用直接醇提方式，60%vol乙醇提取率高于42%vol乙醇，即提取溶劑濃度越高提取率越高。

綜上所述，如果采用水提醇沉的提取方式，宜先進(jìn)行脫脂處理，醇沉濃度選擇42%vol的低濃度。如果采用直接醇提的提取方式，宜先進(jìn)行脫脂處理，乙醇濃度選擇60%vol的高濃度。

2.4 結(jié)果分析

2.4.1 提取物成分在酒體的損失影響

乙醇提取濃度的影響：對比表3、表7和表8各提取物在酒體的損失率，實驗結(jié)果表明，采用42%vol乙醇提取得到的提取物損失率普遍高于60%vol乙醇。

添加方式的影響：對比表7和表8各提取物在酒體的損失率，實驗結(jié)果表明，間接添加方式的損失率普遍高于提取物直接添加方式。

綜上所述，采用60%vol乙醇提取的提取物直接添加到酒體中，提取物成分的損失率最小。

2.4.2 穩(wěn)定性實驗結(jié)果的影響

提取方式的影響：對比表4和表9的實驗結(jié)果，表明提取物的提取方式對最終酒體的穩(wěn)定性無影響。

乙醇濃度的影響：對比表4和表9的實驗結(jié)果，表明提取物提取的乙醇濃度對最終酒體的穩(wěn)定性無影響。

活性炭處理的影響：對比表4和表9的實驗結(jié)果，表明活性炭處理對最終酒體的穩(wěn)定性有直接的影響，添加提取物后的酒體需采用活性炭處理。

3 結(jié)論

綜合考慮提取物中枸杞多糖成分的提取率、提取物成分在酒體的損失率及酒體的穩(wěn)定性實驗觀察結(jié)果，醇溶性枸杞提取物提取工藝條件宜采用60%vol乙醇直接提取方式，提取物中枸杞多糖的提取率為1.85%。提取物采用直接添加到酒體中溶解，枸杞多糖成分的損失率在溶解過程中為9.33%，在活性炭處理過程中基本無損失，相比現(xiàn)有工藝，其損失率大大降低。

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Extraction of Alcohol-Soluble Extract from Wolfberry

ZHANG Jibin,CHEN Zhiyuan,JIANG Dan,XU Lang,DING Miao and MEI Ju
（Hubei Provincial Key Lab of Quality and Safety of Traditional Chinese Medicine, Jingpai Bio-medicine Co.Ltd.,Daye,Hubei435100,China）

In order to dissolve wolfberry extract in liquor and obtain the minimum loss of polysaccharide,the extraction conditions of alcoholsoluble wolfberry extract were investigated in this study.Two extraction methods including water extracting-alcohol precipitation and direct alcohol extraction were adopted.Different pretreatment methods such as defatting and small molecule-removing were applied for each extraction method.Then wolfberry extract under different conditions was obtained.The extract was dissolved in liquor,after the treatment of active carbon,the loss rate of polysaccharide was calculated and the stability of liquor was observed.The results suggested that,the extract obtained from 60%ethanol direct extraction had the least loss of polysaccharide in the process of dissolution and active carbon treatment(the extraction rate of polysaccharide was 1.85%).Accordingly,the best extraction method of alcohol-soluble wolfberry extract was the use of 60%ethanol for direct extraction,which could effectively reduce the loss of polysaccharide.

wolfberry extract;alcohol soluble;extraction technology;wolfberry polysaccharide;extraction rate

R286.1；TS262.91；TS261.4

A

1001-9286（2017）01-0048-04

10.13746/j.njkj.2016259

2016-08-25

張繼斌（1971-），男，黃石人，現(xiàn)任勁牌生物醫(yī)藥公司及中藥保健食品質(zhì)量與安全湖北省重點實驗室醫(yī)藥工程高級工程師，主要從事中藥提取工藝技術(shù)及食品安全等方面的研究工作。

優(yōu)先數(shù)字出版時間：2016-11-08；地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/52.1051.TS.20161108.1017.006.html。