大烏泡藥材的薄層色譜鑒別實驗*

劉 瑤, 陳 瑞， 蔡 進， 劉珈伲， 劉麗娜， 黃 靜

(貴州醫(yī)科大學(xué) 藥學(xué)院， 貴州 貴陽 550025)

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大烏泡藥材的薄層色譜鑒別實驗*

劉 瑤**, 陳 瑞， 蔡 進， 劉珈伲， 劉麗娜， 黃 靜***

(貴州醫(yī)科大學(xué) 藥學(xué)院， 貴州 貴陽 550025)

目的： 建立大烏泡藥材的薄層色譜鑒別方法。方法: 以槲皮素和山柰酚為對照品，甲苯-乙酸乙酯-甲酸(5∶4∶1，V/V/V)為展開劑，定量吸取對照品溶液、供試品溶液，分別點于同一塊硅膠G薄層板上，1% AlCl3及乙醇溶液顯色后，置于紫光燈下365 nm處檢視。結(jié)果: 27批大烏泡藥材薄層色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)位置上顯相同顏色的熒光斑點。 結(jié)論： 薄層色譜方法可用于大烏泡藥材的質(zhì)量控制。

中草藥； 色譜法，薄層； 大烏泡； 山柰酚； 槲皮素

大烏泡為薔薇科懸鉤子屬大烏泡(RubusmultibracteatusLevi & Vant)的干燥葉，味微苦，性涼，具清熱解毒、祛風(fēng)除濕、涼血、止血、接骨的功效，民間多用于治痢疾、腹瀉、風(fēng)濕痹痛、咳血、婦女倒經(jīng)、骨折等，主要分布于四川、云南、貴州等[1]。大烏泡載于《中國苗族藥物彩色圖集》、《全國中草藥匯編》、《中藥大辭典》、《中華本草》及地方本草著作《云南中草藥》、《貴州省中藥材、民族藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》，作為民間常用苗藥，其質(zhì)量控制研究較為薄弱，缺少以藥材專屬性成分為對照品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究。本實驗室前期通過對大烏泡藥材化學(xué)成分的研究，從乙酸乙酯部位分離得到化合物槲皮素和山柰酚[2]，本文將以二者作為對照品，研究大烏泡藥材的薄層色譜鑒別方法，為大烏泡藥材的質(zhì)量控制提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 藥品、儀器與試劑

槲皮素對照品(批號100081-201408，純度99.1%)、山柰酚對照品(批號110861-201310，純度93.2%)均購自中國藥品生物制品鑒定所；27批大烏泡樣品均采購于貴州凱里，經(jīng)貴州醫(yī)科大學(xué)龍慶德鑒定為薔薇科懸鉤子屬植物大烏泡(RubusmultibracteatusLevl&Vant)的干燥葉,樣品信息見表1。儀器為手提式高速中藥粉碎機(溫嶺市大德中藥機械有限公司)，EL204電子天平(梅特勒托利多儀器有限公司)，HH-2數(shù)顯恒溫水浴鍋(常州澳華儀器有限公司)，HS-10260D超聲波清洗

表1 大烏泡藥材樣本采收時間Tab.1 The sample information of Rubusmultibracteatus Levl & Vant

器(天津恒高科技發(fā)展有限公司)，CAMAG Linomat薄層色譜點樣器(瑞士卡瑪公司)ZF-2型三用紫外儀(上海市安亭電子儀器廠)，硅膠G、硅膠GF254、聚酰胺薄膜(青島海洋化工廠分廠)，點樣毛細(xì)管(上海欣鵬玻璃儀器有限公司)，雙槽展開缸，所用試劑均為分析純。

1.2 對照品溶液的制備

取槲皮素和山柰酚適量，分別用甲醇溶解，制成0.5 g/L的對照品溶液。

1.3 供試品溶液的制備

取大烏泡藥材適量，粉碎，精密稱取大烏泡藥材粗粉1 g，加入50 mL甲醇，超聲提取1 h，濾過，濾液中再加入12.5 mL鹽酸，70 ℃水浴水解1 h，迅速冷卻，水浴濃縮至干，殘渣加2 mL甲醇使之完全溶解，濾過，取濾液作為供試品溶液。

1.4 薄層色譜鑒別

參照《中國藥典》2010版一部附錄VI B薄層色譜法[3]，分別吸取對照品溶液2 μL、供試品溶液16 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(5∶4∶1，V/V/V)為展開劑，預(yù)飽和15 min，展開、取出、晾干，噴1% AlCl3乙醇溶液，適當(dāng)加熱后，置紫光燈下365 nm波長下檢視。

2 結(jié)果

結(jié)果顯示，27批供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置顯示相同顏色的熒光斑點。見圖1。

注：1～27為27批大烏泡供試品，a為山柰酚，b為槲皮素圖1 27批大烏泡的薄層色譜Fig.1 TLC chromatograms of 27 batches of Rubus multibracteatus Levl & Vant

3 討論

實驗對甲醇和乙醇兩種溶劑進行了考察，乙醇提取液的樣品斑點顯色不明顯，甲醇提取液的樣品斑點清晰，圓而集中，因此提取溶劑選用甲醇。曾分別對70 ℃水浴回流提取1 h、超聲提取1 h和索式提取3 h進行了考察，比較3種提取方式的提取效果。結(jié)果顯示回流提取的樣品斑點較明顯，但不規(guī)整，分離效果差；超聲提取的樣品斑點清晰圓整，分離度高；索式提取的樣品斑點熒光較弱，無法鑒別，因此提取方式選用超聲提取1 h。

為得到最佳展開效果，本實驗結(jié)合文獻(xiàn)[4-9]報道，試驗了多種展開系統(tǒng)：甲苯-乙酸乙酯-甲酸(5∶2∶1，V/V/V)、甲苯-乙酸乙酯-甲酸(5∶4∶1，V/V/V)、甲苯-乙酸乙酯-甲酸(10∶8∶1，V/V/V)、環(huán)己烷-乙酸乙酯-甲酸(10∶10∶1，V/V/V)、石油醚-乙酸乙酯-甲酸(10∶9∶1，V/V/V)等，比較實驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在展開系統(tǒng)為甲苯-乙酸乙酯-甲酸(5∶4∶1，V/V/V)時，得到的薄層色譜分離度好，斑點規(guī)整清晰，Rf值重復(fù)性好。

本實驗曾使用硅膠G薄層板、硅膠GF254薄層板、聚酰胺薄膜等，其中硅膠G薄層板樣品分離效果最佳，硅膠GF254薄層板未能使樣品斑點達(dá)到良好的分離效果，聚酰胺薄膜中樣品斑點嚴(yán)重拖尾，因此薄層板選用硅膠G薄層板。根據(jù)黃酮類成分可與部分金屬鹽類反應(yīng)，生成有色金屬絡(luò)合物的特點，對1% AlCl3乙醇溶液[10-12]進行了考察，并考察了通用顯色劑2%香草醛硫酸溶液和10%硫酸乙醇溶液對薄層鑒別的影響。結(jié)果顯示，1% AlCl3乙醇溶液在365 nm紫外光下熒光明顯且斑點清晰，2%香草醛硫酸溶液和10%硫酸乙醇溶液熒光較弱且易減退，因此選擇1%AlCl3乙醇溶液作為顯色劑。實驗中用薄層色譜點樣儀分別對供試品和對照品的點樣量進行了考察，并最終確定當(dāng)槲皮素、山柰酚對照品點樣量為2 μL，供試品溶液點樣量為16 μL時，色譜斑點豐富，明顯且清晰。

實驗對27批同產(chǎn)地不同采收期的大烏泡藥材進行了薄層鑒別，結(jié)果顯示，在27批大烏泡藥材樣品色譜圖中，與槲皮素、山柰酚對照品色譜圖的相應(yīng)位置上，具有相同顏色的熒光斑點，且斑點圓整、清晰，分離效果好，Rf值適中。苗藥大烏泡作為一種民間常用藥，其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)現(xiàn)僅在《貴州省中藥材、民族藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》中收錄，該質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)簡單，并未有相關(guān)薄層鑒別，本實驗在大烏泡藥材質(zhì)量控制研究稀少的背景下，首次以槲皮素和山柰酚為對照品，建立了大烏泡藥材的薄層鑒別方法，該方法簡便且重復(fù)性好，可用于其質(zhì)量控制。

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(2016-10-05收稿，2016-11-26修回)

中文編輯： 劉 平； 英文編輯： 劉 華

Experimental Research on TLC Identification ofRubusmultibracteatusLevl&Vant

LIU Yao， CHEN Rui， CAI Jin， LIU Jiani， LIU Lina, HUANG Jing

(CollegeofPharmacy,GuizhouMedicalUniversity,Guiyang550025,Guizhou,China)

Objective: To establish the TLC identification method ofRubusmultibracteatusLevl&Vant. Methods： Quercetin and kaempferol was used as the reference substance.The spread solvent was made of toluene-ethyl acetate-formic acid(5:4:1,V/V/V). The quantitative reference substance solution and test solution were drawn onto the same silica gel G. Drawing quantitative reference substance solution and test solution on a silica gel G. Color display was made by spraying 1% aluminum chloride acid ethanol. The fluorescence chromatogram was detected at 365nm in the UV lamp. Result: The spots in the chromatogram of the 27 batches ofRubusMultibracteatusLevl&Vanthad the same color as quercetin and kaempferol in corresponding position. Conclusion: Thin layer chromatography method can be used for the quality control ofRubusmultibracteatusLevl&Vant.

drug,Chinese herbal; chromatography,thin layer;RubusmultibracteatusLevl&Vant; kaempferol; quercetin

貴州省科技廳中藥攻關(guān)項目[黔科合ZY(2011)3005]

時間：2016-12-15

http://www.cnki.net/kcms/detail/52.1164.R.20161215.1534.003.html

R285.1

A

1000-2707(2016)12-1408-03

10.19367/j.cnki.1000-2707.2016.12.009

**貴州醫(yī)科大學(xué)2014級碩士研究生

***通信作者 E-mail:huangjgy@sohu.com