潰瘍性結(jié)腸炎患者結(jié)腸黏膜中胸腺基質(zhì)淋巴細(xì)胞生成素的表達(dá)水平

劉 黎

潰瘍性結(jié)腸炎患者結(jié)腸黏膜中胸腺基質(zhì)淋巴細(xì)胞生成素的表達(dá)水平

劉 黎

目的研究潰瘍性結(jié)腸炎（UC）患者結(jié)腸黏膜中胸腺基質(zhì)淋巴細(xì)胞生成素的表達(dá)水平及其與病變范圍、病變程度間的關(guān)系，初步探討UC的發(fā)病機(jī)制。方法34例UC住院患者作為研究組，29例結(jié)腸息肉患者作為對(duì)照組，采用實(shí)時(shí)定量PCR法測(cè)定兩組結(jié)腸黏膜組織中TSLPmRNA表達(dá)水平，比較血清CRP及血沉的變化。結(jié)果研究組與對(duì)照組結(jié)腸黏膜TSLPmRNA表達(dá)水平及CRP、血沉存在顯著差異（P＜0.01）；UC患者中結(jié)腸黏膜TSLPmRNA表達(dá)水平、CRP以及血沉在不同病變程度及不同病變部位間存在顯著性差異（P＜0.01）；UC患者TSLPmRNA表達(dá)水平與CRP、血沉之間存在顯著正相關(guān)（P＜0.01），TSLPm RNA表達(dá)水平與病變程度間存在顯著正相關(guān)（P＜0.01）。結(jié)論與正常人比較，UC患者結(jié)腸黏膜中TSLP表達(dá)水平明顯升高，結(jié)腸黏膜TSLP表達(dá)水平與UC病變程度和范圍存在顯著相關(guān)性。

潰瘍性結(jié)腸炎；結(jié)腸黏膜；胸腺基質(zhì)淋巴細(xì)胞生成素；病變程度

潰瘍性結(jié)腸炎（ulcerative colitis,UC）是一種慢性非特異性腸病。近年來(lái)，其發(fā)病人群明顯擴(kuò)增，且以中青年人多見(jiàn)。目前UC發(fā)病機(jī)制尚不明確，遺傳、環(huán)境、免疫等因素共同作用導(dǎo)致此病發(fā)生[1]。免疫機(jī)制研究發(fā)現(xiàn)胸腺基質(zhì)淋巴細(xì)胞生成素（thym ic stromal lymphopoietin,TSLP）對(duì)于免疫性疾患體內(nèi)淋巴細(xì)胞，尤其是樹(shù)突狀細(xì)胞發(fā)育和分化起到調(diào)控作用[2]，然而與免疫反應(yīng)關(guān)系密切的UC患者結(jié)腸黏膜TSLP表達(dá)水平及其與病變程度、范圍的關(guān)系目前在國(guó)內(nèi)外研究較少[3]。本研究旨在探究UC患者結(jié)腸黏膜上皮中TSLP的表達(dá)水平，進(jìn)而初步探討TSLP與UC病變程度、范圍的關(guān)系。

資料與方法

一、臨床資料

研究對(duì)象為2012年1月到2014年3月來(lái)我院消化內(nèi)科住院治療的UC患者，計(jì)34例，完善相關(guān)臨床、實(shí)驗(yàn)室、影像、內(nèi)鏡及病理組織學(xué)檢查，其中男19例，女15例，平均年齡為（31.26±5.67）歲。應(yīng)用Mayo評(píng)分方法對(duì)UC組患者進(jìn)行病情活動(dòng)度分級(jí)：緩解期3例，輕度活動(dòng)期15例，中度活動(dòng)期10例，重度活動(dòng)期6例；病變范圍：直腸炎9例，左半結(jié)腸炎13例，廣泛結(jié)腸炎7例，全結(jié)腸炎5例。同時(shí)選取在同一時(shí)間的結(jié)腸息肉患者29例作為對(duì)照組，排除存在結(jié)腸炎、腫瘤及其他過(guò)敏性或炎癥性疾病。其中男16例，女13例，平均年齡為（30.56±6.04）歲。兩組間具有可比性（P＞0.05）。

二、入選標(biāo)準(zhǔn)

①臨床診斷符合2007年中華醫(yī)學(xué)會(huì)消化病學(xué)分會(huì)提出的《對(duì)我國(guó)炎癥性腸病診斷治療規(guī)范的共識(shí)意見(jiàn)》[4]；②排除存在心肝腎等器質(zhì)性病變，惡性腫瘤，免疫缺陷性疾??；③妊娠及哺乳婦女除外，精神障礙不能正常交流患者除外；④患者或家屬簽訂知情同意書(shū)，積極配合此次研究；⑤經(jīng)我院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)。

三、測(cè)量方法

均行結(jié)腸鏡檢查，取兩組患者病變嚴(yán)重結(jié)腸黏膜組織及對(duì)正常結(jié)腸黏膜組織各3塊，低溫冷凍條件下保存，采用實(shí)時(shí)定量PCR法測(cè)定結(jié)腸黏膜組織中TSLPmRNA表達(dá)水平。結(jié)腸黏膜組織完成RNA抽提純化及cDNA合成后，按照下列序列進(jìn)行。引物序列為：TSLP上游引物5′-CCCAGGCTATTCGGAAACTCAG-3′，下游引物5′-CGCCACAATCCTTGTAATTGTG-3′；GAPDH上游引物5′-TCCCTCAAGATTGT-CAGCAA-3′，下游引物5′-AGATCCACAAC-GGATACATT-3′；反應(yīng)體系：2× SYBR Premix Ex TaqTM1μL，模板cDNA 2μL，上下游引物分別為0.5μL，加水總量至20μL。擴(kuò)增條件：TSLP 94℃-4m in→（94℃-60 s→52℃-30 s→72℃-60 s）×35→72℃-10m in；GAPDH 94℃-5 m in→（94℃-30 s→55℃-30 s→72℃-30 s）×35→72℃-10m in，反應(yīng)結(jié)束后采用比較閾值法定量分析結(jié)果。在同一時(shí)間清晨空腹抽取靜脈血，測(cè)定CRP及血沉。

四、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

所有統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)均統(tǒng)一整理，采用SPSS 17.0軟件包處理，符合正態(tài)分布的計(jì)量資料采用x±s表示，兩組間TSLPmRNA表達(dá)水平及CRP、血沉對(duì)比采用t檢驗(yàn)，多組間TSLPmRNA表達(dá)水平及CRP、血沉水平對(duì)比采用單因素方差分析，采用LSD法；計(jì)數(shù)資料以%表示，采用χ2檢驗(yàn)，UC患者TSLP mRNA表達(dá)水平與CRP、血沉水平、病變程度間相關(guān)性采用Spearson相關(guān)分析。P＜0.05差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

一、兩組黏膜中TSLPmRNA表達(dá)水平及CRP、血沉水平對(duì)比

研究組與對(duì)照組黏膜中TSLPmRNA表達(dá)水平及CRP、血沉水平存在顯著差異（P＜0.01），見(jiàn)表1。

表1 兩組黏膜中TSLPm RNA表達(dá)水平及CRP、血沉對(duì)比

表1 兩組黏膜中TSLPm RNA表達(dá)水平及CRP、血沉對(duì)比

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二、不同病變程度間黏膜中TSLPmRNA表達(dá)水平及CRP、血沉對(duì)比

UC患者不同病變程度間黏膜中TSLPmRNA表達(dá)水平及CRP、血沉存在顯著差異（P＜0.01），在TSLPmRNA表達(dá)水平上，重度活動(dòng)期＞中度活動(dòng)期、輕度活動(dòng)期＞緩解期；CRP依次為：重度活動(dòng)期＞中度活動(dòng)期＞輕度活動(dòng)期、緩解期；血沉依次為：重度活動(dòng)期＞中度活動(dòng)期＞輕度活動(dòng)期＞緩解期，見(jiàn)表2。

表2 不同病變程度間黏膜中TSLPmRNA表達(dá)水平及CRP、血沉對(duì)比

表2 不同病變程度間黏膜中TSLPmRNA表達(dá)水平及CRP、血沉對(duì)比

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三、不同病變部位間黏膜中TSLPmRNA表達(dá)水平及CRP、血沉水平對(duì)比

UC患者不同病變部位間黏膜中TSLPmRNA表達(dá)水平及CRP、血沉水平存在顯著差異（P＜0.01），在TSLPmRNA表達(dá)水平上，全結(jié)腸炎＞廣泛結(jié)腸炎＞左半結(jié)腸炎＞直腸炎；CRP依次為：全結(jié)腸炎＞廣泛結(jié)腸炎、左半結(jié)腸炎＞直腸炎；ESR依次為：全結(jié)腸炎＞廣泛結(jié)腸炎＞左半結(jié)腸炎＞直腸炎，見(jiàn)表3。

表3 不同病變部位間黏膜中TSLPm RNA表達(dá)水平及CRP、血沉對(duì)比

表3 不同病變部位間黏膜中TSLPm RNA表達(dá)水平及CRP、血沉對(duì)比

組別n TSLPmRNA表達(dá)水平血清CRP（mg/L）ESR（mm/h）直腸炎左半結(jié)腸炎24.13±3.14 28.37±3.26廣泛結(jié)腸炎全結(jié)腸炎9 13 49.27±3.56 52.64±3.97 5.84±1.17 9.28±1.34 7 5 56.75±4.13 60.23±3.82 10.09±1.44 12.37±1.51 35.73±3.60 38.94±3.21 F值-15.59 14.78 18.81 P值-0.00 0.00 0.00

四、TSLPmRNA表達(dá)水平、CRP、血沉與病變程度的關(guān)系

UC患者TSLPmRNA表達(dá)水平與CRP、血沉存在顯著正相關(guān)（P＜0.01），TSLPmRNA表達(dá)水平與病變程度間存在顯著正相關(guān)（P＜0.01），見(jiàn)表4。

表4 TSLPmRNA表達(dá)水平與與CRP、血沉、病變程度的關(guān)系

討 論

UC發(fā)病與免疫異常密切相關(guān)，其具體機(jī)制現(xiàn)在仍不完全清楚[5]。目前臨床研究共識(shí)是輔助性T細(xì)胞（Th細(xì)胞）在UC免疫及病情進(jìn)展過(guò)程中起關(guān)鍵作用，并且UC發(fā)病高危因素與Th2細(xì)胞免疫反應(yīng)關(guān)系密切。研究表明結(jié)腸黏膜上皮細(xì)胞具有廣泛的生物學(xué)功能，不僅組成黏膜免疫屏障，參與防御保護(hù)及自身修復(fù)，還可通過(guò)信號(hào)傳遞來(lái)維持內(nèi)環(huán)境平衡[6]。TSLP是一種新發(fā)現(xiàn)的細(xì)胞因子，對(duì)于淋巴細(xì)胞增殖，尤其是樹(shù)突狀細(xì)胞（dentritic cells,DC）的發(fā)育和分化起著重要的調(diào)控作用，是DC最特異及最強(qiáng)的活化因子，通過(guò)促進(jìn)淋巴細(xì)胞生成，并誘導(dǎo)DC形成Th2型微環(huán)境，從而促進(jìn)腸道免疫耐受，維持腸道內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)。近年來(lái)，TSLP已成為慢性免疫炎癥疾患的研究重點(diǎn)。在慢性免疫性疾病患者的心、肝、腸黏膜中發(fā)現(xiàn)高水平表達(dá)的TSLP基因[7]，因此推斷TSLP在某些炎性免疫性疾病中發(fā)揮重要作用。而UC作為一種與免疫反應(yīng)密切相關(guān)的炎癥性疾病，有學(xué)者將小鼠TSLP基因敲除來(lái)建立炎性腸病動(dòng)物模型，發(fā)現(xiàn)腸道炎癥反應(yīng)更嚴(yán)重[8-9]，提示TSLP可能參與腸道炎癥的發(fā)生。然而，現(xiàn)階段UC患者與TSLP之間的聯(lián)系在國(guó)內(nèi)外研究不多，動(dòng)物模型不具太大說(shuō)服力，其結(jié)論也不確切。本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用免疫熒光和免疫印跡法定性及半定量確定了二者之間存在的聯(lián)系。

本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)UC患者結(jié)腸黏膜中TSLP的表達(dá)顯著高于健康對(duì)照組，提示TSLP在炎癥腸道黏膜中存在異常表達(dá)，UC患者不同病變程度、部位間黏膜中TSLPmRNA表達(dá)水平及CRP、血沉存在顯著差異（P均＜0.01）；說(shuō)明TSLP水平變化在不同病變程度、范圍內(nèi)存在顯著差異。TSLP的高表達(dá)與CRP、血沉及疾病活動(dòng)度呈正相關(guān)，提示TSLP參與了UC的發(fā)生與發(fā)展，而且與既往炎癥反應(yīng)指標(biāo)（CRP、血沉）關(guān)系密切。所以深入研究TSLP在UC發(fā)病中的作用，可能為UC提供新的治療靶點(diǎn)[10]。

綜上所述，UC患者腸上皮黏膜中TSLP表達(dá)水平明顯升高，結(jié)果證實(shí)TSLP表達(dá)與UC病變程度、病變范圍存在顯著相關(guān)性。然而對(duì)于TSLP水平高表達(dá)的原因及其作用機(jī)制尚需進(jìn)一步探索，TSLP可能成為UC患者細(xì)胞因子治療的新靶標(biāo)。

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Exp ression of thym ic stromalcells in colonicmucosa ofpatientswith ulcerative colitis

LIU Li.Department ofGastroenterology,Guang′an Peop le′s Hospital,Guang′an,Sichuan 638500

ObjectiveTo explore the expression level of thym ic stromal lymphopoietin(TSLP)in colonicmucosa and its relationship with theextentand degreeof the lesions in patientsw ith ulcerative colitis.M ethodsA total of 34 patientsw ith ulcerative colitis were selected as the research group,29 patientsw ith colonic polypswere selected as the controlgroup.Real-time quantitative PCRwasused for the determ ination of TSLPmRNA expression levelof colonmucosa.The differentdegreeofC reactive protein(CRP)and the change of erythrocyte sedimentation rate(ESR)w ere com pared.The correlation of TSLPm RNA expression level,CRPand ESR in patientsw ith ulcerative colitiswas analyzed.ResultsThe TSLPmRNA expression levelof colonicmucosa,CRP,and ESR betw een the research group and controlgroup had significantdifference(P<0.01).In UC patients,TSLPmRNA expression levelof colonicmucosa,CRPand ESR among different lesion degree and lesion distribution had significantdifference(P<0.01).TSLPmRNA expression levelof colonicmucosa,CRPand ESR in UC patientshad significantpositive correlation(P<0.01).TSLPmRNA expression levels and the extentof lesions had a significant positive correlation(P<0.01).ConclusionsComparedwith normalpersons,theexpression of TSLPof colonmucosa in UC patientswassignificantly increased, and theexpression levelof TSLPwassignificantly correlatedwith the lesion degreeand lesion distribution.

Ulcerative colitis;Colonicmucosa;Thymic stromal cells;Lesionextent

2016-03-16）

（本文編輯：熊婧）

10.3969/j.issn.1672-2159.2016.05.002

638500廣安市人民醫(yī)院消化內(nèi)科