黃花遠(yuǎn)志根和葉提取物對(duì)急性肝損傷小鼠的保護(hù)作用

謝偉容，高斐雄，林燕燕，陳素慧，郭獻(xiàn)忠

(1. 漳州衛(wèi)生職業(yè)學(xué)院，漳州 363000； 2. 泉州市德化縣世豪農(nóng)業(yè)黃花遠(yuǎn)志種植基地，泉州 362500)

黃花遠(yuǎn)志根和葉提取物對(duì)急性肝損傷小鼠的保護(hù)作用

謝偉容1，高斐雄1，林燕燕1，陳素慧1，郭獻(xiàn)忠2

(1. 漳州衛(wèi)生職業(yè)學(xué)院，漳州 363000； 2. 泉州市德化縣世豪農(nóng)業(yè)黃花遠(yuǎn)志種植基地，泉州 362500)

目的: 研究黃花遠(yuǎn)志根和葉提取物對(duì)四氯化碳(CCl4)所致急性肝損傷小鼠的保護(hù)作用。方法: 采用CCl4誘導(dǎo)化學(xué)性急性肝損傷模型，測(cè)定小鼠肝臟指數(shù)、血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)和天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)，觀察小鼠肝臟病理學(xué)變化。結(jié)果:黃花遠(yuǎn)志根(4 g、2 g生藥/kg)和葉(4 g、2 g生藥/kg)提取物能顯著降低CCl4致小鼠急性肝損傷ALT和AST的升高，明顯改善CCl4對(duì)肝組織的病理損傷。結(jié)論:黃花遠(yuǎn)志根和葉對(duì)CCl4致小鼠急性肝損傷具有保護(hù)作用。

黃花遠(yuǎn)志，四氯化碳，急性肝損傷

黃花遠(yuǎn)志(Polygala arillta Buch Ham)為遠(yuǎn)志科遠(yuǎn)志屬植物。黃花遠(yuǎn)志花為總狀或圓錐狀花序，葉片披針形、倒卵狀披針形或長(zhǎng)圓形，果實(shí)闊腎形。根皮具有清熱解毒、祛風(fēng)除濕、補(bǔ)虛消腫等功效[1]，民間廣泛應(yīng)用于治療月經(jīng)不調(diào)、肝炎、肺炎、風(fēng)濕疼痛、產(chǎn)后虛弱等[2]。

黃花遠(yuǎn)志民間以保肝作用用藥廣泛，多以根莖入藥，其葉作為保肝茶應(yīng)用。但有關(guān)黃花遠(yuǎn)志對(duì)肝損傷保護(hù)作用的藥效實(shí)驗(yàn)研究尚未見報(bào)道。本文通過黃花遠(yuǎn)志根和葉提取物對(duì)四氯化碳(CCl4)所致小鼠急性肝損傷動(dòng)物模型的影響，對(duì)其抗急性肝損傷的作用進(jìn)行研究。

1 材料

1.1 藥品與試劑 黃花遠(yuǎn)志由泉州市德化縣世豪農(nóng)業(yè)黃花遠(yuǎn)志種植基地提供。四氯化碳(分析純，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)，聯(lián)苯雙酯滴丸(批號(hào)A02140828，浙江萬邦藥業(yè)股份有限公司)，丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)試劑盒(上海榮盛生物技術(shù)有限公司)。

1.2 動(dòng)物 ICR小鼠(合格證號(hào)2015000504019)，清潔級(jí)，雌雄各半，體質(zhì)量18～20 g，上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限責(zé)任公司，許可證號(hào)：SCXK(滬)2012-0002。

1.3 儀器 T6新世紀(jì)紫外-可見分光光度計(jì)(北京普析通用儀器有限責(zé)任公司)；高速臺(tái)式冷凍離心機(jī)(湖南湘儀實(shí)驗(yàn)室開發(fā)有限公司)；電子分析天平(德國(guó)賽多利斯集團(tuán))。

2 方法

2.1 黃花遠(yuǎn)志提取物的制備 取黃花遠(yuǎn)志干燥根和葉，按照1∶8的料液比，用85%乙醇提取2次，合并2次濾液，濃縮至浸膏，備用。

2.2 模型的制備及給藥方法 取健康小鼠72只，隨機(jī)分為9組，即正常對(duì)照組、模型組、陽性對(duì)照組(聯(lián)苯雙酯，200 mg/kg)、黃花遠(yuǎn)志根高、中、低劑量組及黃花遠(yuǎn)志葉高、中、低劑量組，每組8只。陽性對(duì)照組、黃花遠(yuǎn)志根高、中、低劑量組(折合黃花遠(yuǎn)志干燥根分別為4、2和1 g/kg)和黃花遠(yuǎn)志葉高、中、低劑量組(折合黃花遠(yuǎn)志干燥葉分別為4、2和1 g/kg)灌胃給藥，正常對(duì)照組和模型組灌胃等體積生理鹽水，1次/d，連續(xù)10 d。末次給藥后，每只小鼠腹腔注射6 ml/kg花生油配制的5% CCl4溶液[3]。摘眼球取血后處死小鼠，迅速取出肝臟備檢。

2.3 生化指標(biāo)的測(cè)定 待小鼠血樣充分凝固后， 4 ℃ 3 500 r/min離心10 min，分離血清，取血清檢測(cè)ALT、AST的活性。

2.4 肝臟指數(shù)的測(cè)定 小鼠肝臟用4 ℃生理鹽水沖洗后，濾紙拭干，電子分析天平稱質(zhì)量并計(jì)算肝臟指數(shù)[肝臟指數(shù)=肝臟質(zhì)量(g)/體重(g)×100%]。

2.5 肝臟組織的病理切片觀察 取小鼠右葉相同位置肝組織，用4 ℃生理鹽水沖洗后，濾紙拭干，以10%中性福爾馬林溶液固定，石蠟包埋，HE染色，光鏡下觀察肝組織切片的病理變化[4]。

3 結(jié)果

3.1 黃花遠(yuǎn)志提取物對(duì)小鼠CCl4急性肝損傷模型肝臟指數(shù)的影響 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，模型組肝臟指數(shù)較正常對(duì)照組顯著增加(P<0.05)，表明CCl4引起小鼠肝臟明顯腫大。與模型組比較，陽性對(duì)照組、黃花遠(yuǎn)志根高、中、低劑量組和黃花遠(yuǎn)志葉高劑量組小鼠肝臟指數(shù)均顯著降低(P<0.05)。黃花遠(yuǎn)志根和葉各劑量組與陽性對(duì)照組比較，肝臟指數(shù)均無顯著性差異。結(jié)果見表1。

表1 黃花遠(yuǎn)志提取物對(duì)小鼠CCl4急性肝損傷模型肝臟系數(shù)的影響±s，n=8)

與模型組比較，*P<0.05

3.2 黃花遠(yuǎn)志提取物對(duì)小鼠CCl4急性肝損傷模型肝功能的影響 結(jié)果表明，模型組較正常對(duì)照組血清ALT和AST顯著升高(P<0.05)，說明CCl4致小鼠急性肝損傷造模成功。與模型組比較，陽性對(duì)照組、黃花遠(yuǎn)志根高、中劑量組和黃花遠(yuǎn)志葉高、中劑量組均能顯著降低CCl4所引起的ALT和AST 的升高(P<0.05或P<0.01)，黃花遠(yuǎn)志根低劑量組和葉低劑量組對(duì)CCl4所引起的ALT和AST 的升高無顯著影響。結(jié)果見表2。

表2 黃花遠(yuǎn)志提取物對(duì)小鼠CCl4急性肝損傷模型肝功能的影響±s，n=8)

與模型組比較，*P<0.05，**P<0.01

3.3 黃花遠(yuǎn)志提取物對(duì)小鼠CCl4急性肝損傷模型肝臟組織病理學(xué)的影響 顯微鏡下觀察正常對(duì)照組小鼠肝小葉結(jié)構(gòu)完整，肝索呈放射狀排列，清晰可辨，肝細(xì)胞結(jié)構(gòu)和形態(tài)正常，排列整齊，未見肝細(xì)胞壞死、變性等病理改變(圖1A)。模型組小鼠肝小葉結(jié)構(gòu)破壞，索狀排列紊亂，肝細(xì)胞呈不同程度腫脹壞死、變性，胞漿疏松透亮，部分細(xì)胞核固縮溶解，大量炎細(xì)胞浸潤(rùn)(圖1B)。陽性對(duì)照組肝細(xì)胞壞死減輕，細(xì)胞排列較為整齊(圖1C)。黃花遠(yuǎn)志根高、中劑量組肝小葉破壞程度和肝細(xì)胞水腫程度明顯減輕，肝細(xì)胞排列較整齊，損傷程度較輕(圖1E和圖1F)；黃花遠(yuǎn)志葉高、中劑量組對(duì)肝損傷的保護(hù)程度較黃花遠(yuǎn)志根高、中劑量組弱(圖1G和圖1H)；黃花遠(yuǎn)志根和葉低劑量組與模型組比較，肝細(xì)胞的損傷程度有輕度改善(圖1F和圖1I)。

A．正常對(duì)照組 B.模型組 C. 陽性對(duì)照組 D.根高劑量組 E.根中劑量組 F.根低劑量組 G.葉高劑量組 H.葉中劑量組 I.葉低劑量組圖1 黃花遠(yuǎn)志提取物對(duì)小鼠CCl4急性肝損傷模型肝臟組織病理學(xué)的影響(HE染色，×400)

4 討論

遠(yuǎn)志屬植物在我國(guó)有豐富的自然資源，含有多種生物活性的化學(xué)成分，如皂苷類、口山酮類、寡糖酯類化合物以及香豆素、木質(zhì)素、黃酮、生物堿、酚類配糖體等[5]。黃花遠(yuǎn)志是遠(yuǎn)志科遠(yuǎn)志屬藥材，民間食用具有較好的保肝抗肝炎作用。多以根莖入藥，其葉以保肝茶食用，以充分提高其利用價(jià)值。

目前，對(duì)于黃花遠(yuǎn)志的藥理作用和活性成分研究較薄弱，因此具有深入研究的潛力。本研究首次以CCl4致小鼠急性肝損傷動(dòng)物模型，對(duì)黃花遠(yuǎn)志根和葉提取物抗急性肝損傷的作用進(jìn)行研究。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，CCl4肝損傷模型組小鼠肝組織破壞嚴(yán)重，血清ALT、AST顯著升高；黃花遠(yuǎn)志根高劑量組(4 g生藥/kg)、根中劑量組(2 g生藥/kg)和葉高劑量組(4 g生藥/kg)、葉中劑量組(2 g生藥/kg)小鼠肝細(xì)胞受損程度明顯減少，血清ALT、AST顯著降低；根低劑量組(1 g生藥/kg)和葉低劑量組(1 g生藥/kg)小鼠肝細(xì)胞損傷程度有輕度改善，血清ALT、AST也有一定程度降低。表明黃花遠(yuǎn)志根和葉具有保護(hù)肝細(xì)胞、對(duì)抗肝損傷的作用，且呈濃度依賴性。但是，黃花遠(yuǎn)志根和葉的最大給藥劑量還需進(jìn)一步研究和探討。

綜上所述，黃花遠(yuǎn)志根和葉對(duì)CCl4所致急性肝損傷模型具有降低血清ALT、AST，保護(hù)肝損傷作用。為黃花遠(yuǎn)志抗急性肝損傷的研究提供了藥效學(xué)依據(jù)，并為對(duì)其進(jìn)一步研究和開發(fā)奠定基礎(chǔ)。

1 劉賢銘,王鐵僧,姚淦．江浙閩臺(tái)地區(qū)遠(yuǎn)志類藥用植物資源整理及鑒定[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥,2006,17(20):243

2 毛士龍,廖時(shí)萱,張燦坤.民間藥黃花遠(yuǎn)志化學(xué)成分研究[J].中國(guó)民族民間醫(yī)藥雜志,1994,(8):35-36

3 黃靜,李勝立,趙宏偉,等.霍山石斛多糖對(duì)四氯化碳致急性肝損傷小鼠的保護(hù)作用[J].中國(guó)中藥雜志,2013,38(4):528-532

4 許金鵬,張慧慧,李朝品,等.原卟啉鈉對(duì)四氯化碳致小鼠急性肝損傷的保護(hù)作用及其機(jī)制[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,2011,17(5):168-172

5 李萍,閆明,李平亞.遠(yuǎn)志屬植物化學(xué)成分及生物活性研究進(jìn)展[J].特產(chǎn)研究,2004,(3):56-61

藥品質(zhì)量與檢驗(yàn)

Protective effects of extraction of roots and leaves from polygala arillta on CCl4-induced acute hepatic injury in mice

Xie Weirong1,Gao Feixiong1,Lin Yanyan1,Chen Suhui1,Guo Xianzhong2

(1.Zhangzhou Health Vocational College , Zhangzhou 363000;2.Planting Base of Polygala arillta, Quanzhou 362500)

Objective： To study the protective effects of extraction of roots and leaves from Polygala arillta against CCl4-induced liver injury in mice. Methods： The models of acute liver injury were induced by CCl4in mice. The liver index, serum activities of alanine aminotransferase (ALT) and aspartate aminotransferase (AST) were determined, respectively. Liver tissue sections were examined under a light microscope. Results： In the model of acute liver injury induced by CCl4in mice, roots (4 g/g and 2 g/kg) and leaves (4 g/kg and 2 g /kg) from Polygala arillta markedly decreased the elevated serum levels of ALT and AST. The extraction of roots and leaves from Polygala arillta effectively improved the tissue lesion of liver. Conclusion： Polygala arillta has a significantly hepatoprotective effect on CCl4-induced acute liver injury in mice.

Polygala arillta, CCl4, acute liver injury

2016-11-24

福建省中青年教師教育科研項(xiàng)目(No.JA14438)

R967

A

1006-5687(2016)06-0015-03