液相色譜法檢測(cè)飼料中醋酸氯地黃體酮的方法研究

尹原妍

(江蘇省畜產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)測(cè)試中心，江蘇南京 210036)

液相色譜法檢測(cè)飼料中醋酸氯地黃體酮的方法研究

尹原妍

(江蘇省畜產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)測(cè)試中心，江蘇南京 210036)

醋酸氯地黃體酮具有廣泛的用途，尤其是在促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)發(fā)育方面運(yùn)用較為普遍，但過(guò)度使用容易引發(fā)負(fù)面影響。采用液相色譜法檢測(cè)動(dòng)物飼料中的醋酸氯地黃體酮具的含量是確保動(dòng)物飼料安全性的基礎(chǔ)，本文基于實(shí)驗(yàn)分析以探究該方法的檢測(cè)效果。

液相色譜法 動(dòng)物飼料 醋酸氯地黃體酮

1 醋酸氯地黃體酮概述

醋酸氯地黃體酮是一種白色或類(lèi)白色結(jié)晶性的粉末，結(jié)構(gòu)式C23H29ClO4，一般較易溶于甲醇而不溶于水。醋酸氯地黃體酮用處較為廣泛，對(duì)于人體主要用于避孕之用；對(duì)于牲畜，主要用于催長(zhǎng)劑之用，但是長(zhǎng)期使用會(huì)導(dǎo)致負(fù)面影響，危害健康。根據(jù)我國(guó)《動(dòng)物性食品中獸藥最高殘留限量》文件中的相關(guān)規(guī)定，在動(dòng)物的飲食品種嚴(yán)禁添加醋酸甲黃體酮而且最高殘留不得高于1μg/ kg。同時(shí)，由于醋酸氯地黃體酮溶性強(qiáng)且一般用量較小，增加了檢測(cè)的難度。如果檢測(cè)方法選用不當(dāng)，則難以有效的檢測(cè)出動(dòng)物飲食品中的醋酸氯地黃體酮?dú)埩?，進(jìn)而會(huì)危害到動(dòng)物的健康生長(zhǎng)，也正是由此決定了針對(duì)醋酸氯地黃體酮的檢測(cè)必須要選用靈敏度高的檢測(cè)方法。目前，用于檢測(cè)醋酸氯地黃體酮的方法主要有ELISA法與氣相色譜，兩者各局。ELISA法具有操作難度與高靈敏度的優(yōu)勢(shì)但是因交叉反應(yīng)的不足，使之僅僅用于樣品的初次檢測(cè)之用；氣相色譜——質(zhì)譜法存在靈敏度低而主要針對(duì)樣品的衍生檢測(cè)所用；高效液相色譜法則兼?zhèn)渖鲜鰴z測(cè)方法的優(yōu)勢(shì)，使之在動(dòng)物食品檢測(cè)中得以廣泛的運(yùn)用。由于醋酸氯地黃體酮具有極強(qiáng)的溶性與紫外吸收性能，更為適宜采用高效液相色譜法檢測(cè)法。

2 醋酸氯地黃體酮的檢測(cè)方法分析

2.1 試驗(yàn)試劑

所采用的試劑為分析純?cè)噭厥鈽?biāo)明者除外；實(shí)驗(yàn)用水均為GB/T6682標(biāo)準(zhǔn)的一級(jí)水。甲醇：色譜純；復(fù)溶液：40%乙腈水溶液；淋洗液：40%甲醇水溶液；醋酸氯地黃體酮對(duì)照品：純度大于98.5%；醋酸氯地黃體酮標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：1 mg/ml的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液；HLB固相萃取柱：200mg/6 ml（或相當(dāng)規(guī)格）；微孔濾頭：0.45 μm。

2.2 儀器與設(shè)備

實(shí)驗(yàn)過(guò)程中需要用到以下儀器與設(shè)備：高效液相色譜、離心機(jī)、天平、渦旋振蕩器、固相萃取裝置。

2.3 試驗(yàn)方法

根據(jù)GB /T 14699.1的規(guī)定進(jìn)行取樣，再采用四分法進(jìn)行縮減，控制為200g左右；根據(jù)GB/T20195的規(guī)定進(jìn)行樣品的制備，先將樣品粉碎再采用分析篩（0.45mm孔徑）篩出，裝瓶以備使用。

2.3.1 提取

稱(chēng)取2.0g配合飼料（精確到0.05 g），至50ml塑料離心管中，加入10ml乙腈，渦旋震蕩10min8000 r/min離心5min，取上清液。殘留物用10 ml乙腈重復(fù)提取1次，合并上清液，50℃下氮?dú)獯蹈芍良s2ml，加入4ml水充分溶解作為備用液。

2.3.2 凈化

HLB固相萃取小柱依次用甲醇和水各5mL活化，取全部備用液過(guò)柱，依次用水和淋洗液各5mL淋洗，抽干，用6ml乙腈洗脫，洗脫液50℃下氮?dú)獯蹈?，殘余物? ml流動(dòng)相溶解，渦旋溶解，過(guò)0.45μm濾膜，供高效液相色譜儀測(cè)定。

2.3.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

精密量取適量醋酸氯地黃體酮儲(chǔ)備液，流動(dòng)相稀釋成0.2，1，5，20，50和100μg/ml的各系列對(duì)照溶液，供測(cè)定，以色譜峰面積為縱坐標(biāo)，對(duì)照溶液質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

2.3.4 色譜參考條件

色譜柱：ASB-C18柱（250 mm×4.6 mm，粒徑5μm）；柱溫：室溫；進(jìn)樣量：20μl；流動(dòng)相：乙月奮水=53：47；流速：1.0 mL/min；紫外檢測(cè)器：檢測(cè)波長(zhǎng)285nm。

2.3.5 測(cè)定方法

檢測(cè)儀器設(shè)備，使之在各項(xiàng)性能處于最佳的狀態(tài)下運(yùn)行，進(jìn)而將對(duì)照品與樣品相互交替進(jìn)樣?？v坐標(biāo)的值采用與測(cè)試樣品質(zhì)量濃度接近的單點(diǎn)標(biāo)準(zhǔn)溶液外標(biāo)法定量或以標(biāo)準(zhǔn)溶液中被測(cè)組分峰面積與樣品溶液中被測(cè)組分峰面積的比值，橫坐標(biāo)的值為相應(yīng)被測(cè)組分質(zhì)量濃度，進(jìn)而根據(jù)縱橫坐標(biāo)的值繪制出工作曲線以進(jìn)一步對(duì)樣品加以定量。

3 結(jié)果與分析

3.1 試用范圍及檢測(cè)限

結(jié)合以往工作經(jīng)驗(yàn)，在各類(lèi)動(dòng)物飼料中醋酸氯地黃體酮的監(jiān)測(cè)適宜采用液相色譜法。具體檢測(cè)方法的執(zhí)行需要注意以下幾點(diǎn)：其一，適用于檢測(cè)含量為1 mg/kg，定量限為0.2 mg/kg的樣品；其二，可采用GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法；GB/T14699.1飼料采樣；GB/T20195動(dòng)物飼料試樣的制備；其三，該方法的運(yùn)用是在嚴(yán)格遵循國(guó)家相關(guān)文件的規(guī)定下編寫(xiě)的，主要參照了《GB/T 1.1-2009標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第一部分》、GB/T20001.4-2001《標(biāo)準(zhǔn)編寫(xiě)規(guī)則第4部分：化學(xué)分析方法》等文件。在整個(gè)檢測(cè)方法的運(yùn)用過(guò)程中，盡力做到引用技術(shù)科學(xué)規(guī)范、方法編寫(xiě)的用詞準(zhǔn)確，無(wú)歧義或錯(cuò)誤，同時(shí)用詞要簡(jiǎn)單易懂、內(nèi)容編寫(xiě)要符合相關(guān)規(guī)范等。

3.2 液相色譜法在檢測(cè)飼料中醋酸氯地黃體酮的方法設(shè)計(jì)分析

在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中查閱了國(guó)內(nèi)外相關(guān)著作文獻(xiàn)，綜合文獻(xiàn)的研究可以得知其主要的研究方向在于醋酸氯地黃體酮的在獸藥制作過(guò)程中的使用量以及可供檢測(cè)的方法，其中檢測(cè)方法是多樣化的，如常見(jiàn)額RIA法、ELISA法、液相色譜法等，但是采用液相色譜法以檢測(cè)動(dòng)物飼料中醋酸氯地黃體酮含量的較少。本文基于研究醋酸氯地黃體酮相關(guān)科學(xué)知識(shí)以及綜合國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)研究的基礎(chǔ)之上，運(yùn)用現(xiàn)有的儀器設(shè)備等條件，采用了采用液相色譜法以檢測(cè)動(dòng)物飼料中醋酸氯地黃體酮含量以探究該方法在動(dòng)物飼料醋酸氯地黃體酮含量檢測(cè)中的效用。根據(jù)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，采用該方法進(jìn)行檢測(cè)不進(jìn)操作簡(jiǎn)易而且靈敏度與精確度均較高，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)較為客觀，適合用于動(dòng)物飼料中醋酸氯地黃體酮含量的監(jiān)測(cè)。

[1] 賈濤.應(yīng)用高效液相色譜技術(shù)檢測(cè)飼料中的醋酸氯地黃體酮[J].飼料廣角，2014，（11）：32-35.

[2] 劉紅菊，閆沖.反相高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定飼料中的10種性激素[J].中國(guó)飼料，2010，（18）：34-36.

尹原妍（1983-），江蘇句容人，研究方向：飼料檢測(cè)。