豬鏈球菌的分離鑒定及藥敏試驗(yàn)

李 娟

(蓬萊市動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所,山東蓬萊 265600)

豬鏈球菌的分離鑒定及藥敏試驗(yàn)

李 娟

(蓬萊市動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所,山東蓬萊 265600)

豬鏈球菌病對(duì)生豬養(yǎng)殖危害嚴(yán)重，雖然致死率并不高，但是對(duì)生豬的生長(zhǎng)發(fā)育尤為不利。

1 檢測(cè)方法

1.1 涂片鏡檢

在無(wú)菌條件下采集病豬相關(guān)病料，制成觸片，然后對(duì)其進(jìn)行革蘭氏染色鏡檢。

1.2 細(xì)菌分離培養(yǎng)

在無(wú)菌條件下進(jìn)行病料的采集，之后分別進(jìn)行畫線，在37℃的條件下進(jìn)行培養(yǎng)24h之后，觀察其菌落的特征。然后選取特征性顯著的單個(gè)菌落進(jìn)行革蘭氏染色鏡檢，分別將其接種于三種培養(yǎng)基，即普通的瓊脂斜面培養(yǎng)基、血清肉湯培養(yǎng)基以及營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基，進(jìn)行24h的培養(yǎng)。獲取分離菌的純培養(yǎng)物并觀察其在三種不同培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)狀況。

1.3 培養(yǎng)特性

把純凈的培養(yǎng)物接種到鮮血瓊脂斜面培養(yǎng)基上，分別放在37℃的溫度條件、10℃的條件以及45℃的條件進(jìn)行培養(yǎng)，觀察它們的生長(zhǎng)狀況。

1.4 生化試驗(yàn)

將已經(jīng)分離的菌血清肉湯培養(yǎng)物分別進(jìn)行接種，接種的生化培養(yǎng)基是葡萄糖、甘露醇、蔗糖以及麥芽糖，在37℃的條件下進(jìn)行24h的培養(yǎng)后，觀察它們的生化反應(yīng)特性。

1.5 藥敏試驗(yàn)

用無(wú)菌的棉簽蘸取分離菌的肉湯培養(yǎng)物后，將其涂布到瓊脂平板。稍微干一些后，用不帶菌的鑷子分別夾取各種藥敏紙片，將其平貼到培養(yǎng)基的表面，培養(yǎng)24h以后，就抑菌環(huán)的大小進(jìn)行觀察和測(cè)定。具體的標(biāo)準(zhǔn)就是如果抑菌環(huán)的直徑超過(guò)了15mm，就是高度敏感；如果是在10mm到15mm的話，則是中度敏感；如果低于10mm的話，則是低度敏感；如果沒(méi)有抑菌環(huán)出現(xiàn)的話，就是不敏感。

1.6 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)將

試驗(yàn)用的10只健康的小白鼠，隨機(jī)分成2組，在試驗(yàn)組小白鼠的腹腔上進(jìn)行上述肉湯培養(yǎng)物的注射，注射的劑量為每只0.5ml；而對(duì)照組則是注射無(wú)菌的生理鹽水，觀察發(fā)病和死亡情況。

2 結(jié)果

2.1 涂片鏡檢

將病料涂片，經(jīng)革蘭氏染色后鏡檢能夠看到呈現(xiàn)成對(duì)排列或者短鏈狀排列的革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌。

2.2 分離培養(yǎng)

在37℃條件下進(jìn)行24h的培養(yǎng)之后，在鮮血瓊脂平板上有小菌落形成，呈現(xiàn)半透明狀，另外，需要注意的是，在外層有溶血環(huán)的出現(xiàn)，而且生長(zhǎng)狀況良好；在普通的瓊脂板上，菌落則相對(duì)貧瘠；而在血清肉湯中先是均勻，而后是渾濁，最后有沉淀物形成，但是并沒(méi)有菌膜的形成。

2.3 動(dòng)物試驗(yàn)

試驗(yàn)組的5只兔子在接種2～3d的時(shí)間后，呈現(xiàn)出了不同的癥狀變化，其中有兩只在接種2～3d之后先后死亡，而另外的三只則表現(xiàn)出了食欲的減退，精神萎靡不振，在下頜部位有淋巴結(jié)腫脹現(xiàn)象。如果進(jìn)行剖檢的話，會(huì)發(fā)現(xiàn)肝臟、脾臟以及腎臟都有腫大現(xiàn)象。如果將心血和胸腔內(nèi)的積液取出進(jìn)行涂片的話，進(jìn)行鏡檢，則會(huì)發(fā)現(xiàn)有革蘭氏陽(yáng)性球菌。但是，在對(duì)照組并沒(méi)有發(fā)現(xiàn)任何異?，F(xiàn)象。

3 藥敏試驗(yàn)

通過(guò)藥敏試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，鏈球菌依次敏感的藥物分別是頭孢菌素、青霉素、卡那霉素，敏感的程度差異并非十分顯著。但是，對(duì)于環(huán)丙沙星、鏈霉素、慶大霉素、多西環(huán)素以及阿莫西林和土霉素則具有抗藥性。

4 體會(huì)

結(jié)合臨床的診斷情況，以及實(shí)驗(yàn)的具體情況，可以確診為當(dāng)?shù)啬成i養(yǎng)殖場(chǎng)的患病豬的確是感染了豬鏈球病，而致病的病原就是鏈球菌。這種菌的顯著特點(diǎn)就是很容易產(chǎn)生抗藥性，因此在治療之前一定要首先進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，等到篩選出敏感的藥物之后，再開始進(jìn)行治療，才有可能達(dá)到預(yù)期的治療效果。另外，需要注意的是，通過(guò)藥敏試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，這種菌對(duì)頭孢菌素以及青霉素和卡那霉素及其敏感，而對(duì)于環(huán)丙沙星和阿莫西林等則有抗藥性。

目前，對(duì)于鏈球菌的分離方法主要有兩種，分別是血清學(xué)試驗(yàn)和生化試驗(yàn)，其中第一種檢測(cè)方法比較簡(jiǎn)單，但是不太容易獲取標(biāo)準(zhǔn)的陽(yáng)性血清；而第二種方法目前只能對(duì)菌群進(jìn)行鑒定，無(wú)法實(shí)現(xiàn)定型鑒定。此外，患病生豬和帶菌生豬是重要的傳染源。為此，豬場(chǎng)一定要有嚴(yán)格的防疫制度和消毒制度，一旦發(fā)現(xiàn)，就要果斷采取隔離；對(duì)于那些患病致死的生豬一定要進(jìn)行無(wú)害化的處理，有效防止病原的擴(kuò)散，同時(shí)對(duì)被污染的圈舍以及用具等進(jìn)行嚴(yán)格的消毒。總而言之，依托分離的菌株，進(jìn)行自家苗的制備，可以說(shuō)是對(duì)豬鏈球菌的預(yù)防能夠起到積極的效用，而且成本低，值得廣泛推廣。

豬鏈球菌病對(duì)生豬的生長(zhǎng)發(fā)育有著至關(guān)重要的影響，因此，在日常的飼養(yǎng)過(guò)程中，一定要注意觀察，一旦發(fā)現(xiàn)，果斷采取有效措施，將不良影響降低到最低。目前，疫苗接種可以說(shuō)對(duì)于這種疫病的預(yù)防具有積極的效果，因此筆者建議，一定要在技術(shù)人員的指導(dǎo)下，及時(shí)進(jìn)行接種，切實(shí)保證防疫的效果，全面實(shí)現(xiàn)生豬養(yǎng)殖的預(yù)期良好經(jīng)濟(jì)收益。

[1] 趙恒章，劉保國(guó)，姜金慶，等.致病性豬鏈球菌的分離鑒定及藥敏試驗(yàn)[J].湖南農(nóng)業(yè)科學(xué)，2007，（4）：173-175.

[2] 楊霞，盧中華，張紅英，等.豬鏈球菌病病原的生化分群鑒定和藥敏試驗(yàn)[J].中國(guó)畜牧獸醫(yī)，2004，31（4）：32-33.

[3] 尹爭(zhēng)艷.豬鏈球菌病病原流行病學(xué)研究及防治措施[D].華中農(nóng)業(yè)大學(xué)，2007.