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    明黨參根皮中異歐前胡素的體內(nèi)抗腫瘤活性研究

    2017-01-11 09:21:44王萌
    價值工程 2016年36期

    王萌

    摘要:目的:研究明黨參根皮中異歐前胡素的體內(nèi)抗腫瘤作用。方法:異歐前胡素設三個劑量組,低劑量組(0.2mg·kg-1)、中劑量組(0.4mg·kg-1)、高劑量組(0.8mg·kg-1),陽性藥物組(環(huán)磷酰胺30mg·kg-1),采用移植性腫瘤模型的方法,觀察實體瘤生長情況,并計算各組抑瘤率。結果:異歐前胡素低、中、高劑量組的抑瘤率分別為28.67%、59.29%、66.38%,陽性藥物組的抑瘤率為66.93%,但對小鼠免疫器官有損傷。結論:異歐前胡素對小鼠肝癌移植瘤有明顯的抗腫瘤作用,并對機體免疫器官有保護作用。

    Abstract: Objective: To study anti-tumor activity of isoimperatorin in the root bark of Changium smyrnioides Wolff in vivo. Methods: There are three dose groups of isoimperatorin, low dose group (0.2mg·kg-1), middle dose group (0.4mg·kg-1), high dose group (0.8mg·kg-1); Positive drug group (cyclophosphamide 30mg·kg-1). This research uses the method of transplanted tumor model, to observe the growth of solid tumor, and calculate the anti-tumor rate of each group. Results: The anti-tumor rates of isoimperatorin in low, middle, high dose group are 28.67%, 59.29%, 66.38%; anti-tumor rate of the positive drug group is 66.93%, but the immune organs of mice are damaged. Conclusion: Isoimperatorin has obvious anti-tumor effect on liver cancer transplanted tumor in mice, and has a protective effect on immune organs.

    關鍵詞:異歐前胡素;體內(nèi)抗腫瘤;免疫器官

    Key words: isoimperatorin;anti-tumor in vivo;immune organ

    中圖分類號:R284 文獻標識碼:A 文章編號:1006-4311(2016)36-0213-03

    0 引言

    明黨參Changium smyrnioides Wolff 是我國著名的特產(chǎn)藥用植物之一,其刮去外皮的根為名貴藥材,收載于《中國藥典》,具有補氣生津、潤肺化痰、平肝和胃、消腫解毒的功效[1]。由于其野生資源逐年減少,1984年被列為國家珍稀瀕危保護植物[2]。目前國內(nèi)外對明黨參根、莖葉、果實的研究已有文獻報道[3-5],但對其加工廢棄的根皮的研究尚未見報道。前期本課題組從明黨參根皮中分離得到五種呋喃香豆素類成分,并對其進行體外抗腫瘤活性研究,得出異歐前胡素的效果最顯著。為進一步探討異歐前胡素在體內(nèi)的抗腫瘤活性,本研究采用移植性腫瘤模型,通過抽取腹水瘤小鼠體內(nèi)腫瘤細胞接種至小鼠腋下的方式,連續(xù)腹腔注射給藥10d后處死小鼠,剝離腫瘤組織,觀察實體瘤生長情況,初步探索異歐前胡素的體內(nèi)抗腫瘤作用。

    1 材料、儀器與試劑

    1.1 實驗材料

    異歐前胡素由本實驗室從明黨參根皮中分離得到,它的結構通過1H-NMR,13C-NMR和MS確定,并且通過液相色譜分析其純度均大于98%。

    實驗動物:昆明種小鼠70只,雌雄各半,體重20±2g,由上海市實驗動物中心提供(動物合格證號:SCXK滬2007-0005)。

    腫瘤瘤株:小鼠移植性肝癌細胞株H22,為本校保存細胞株。

    陽性藥:環(huán)磷酰胺,天津金世制藥有限公司,國藥準字H12021006。

    1.2 主要儀器和試劑

    電子天平:YP601N,上海精密科學儀器有限公司;

    電子分析天平:AY220,SHIMADZU CORPORATION公司;

    臺式離心機:TGL-16B,上海安亭科學儀器廠;

    全自動生化儀:Dimension Xpand,美國杜邦公司;

    全自動血液分析儀:ADVIA 120,Bayer公司;

    無菌生理鹽水:安徽豐原藥業(yè)股份有限公司,批號110126M5;

    解剖剪、鑷子、無菌注射器、灌胃針及離心管等均為市售可得。

    2 實驗方法

    參照《抗腫瘤藥物藥效學指導原則》和《藥理實驗方法學》所述方法[6,7],進行以下設計。

    2.1 供試樣品的配制

    稱取異歐前胡素0.00811g溶于100ml無菌生理鹽水,得到高劑量組濃度為80μg·ml-1,分別依次2倍稀釋成中劑量組濃度為40μg·ml-1,低劑量組濃度為20μg·ml-1。

    陽性藥環(huán)磷酰胺適量溶于無菌生理鹽水,得到濃度為3mg·mL-1的溶液。

    2.2 接種

    無菌條件下,取生長7d的肝癌H22腹水型小鼠頸椎脫臼處死,置超凈工作臺,用無菌空針吸取乳白色腹水,用無菌生理鹽水稀釋,混合均勻制備瘤細胞懸液,調(diào)整腫瘤細胞濃度為1×107個/ml備用。取昆明種小鼠70只,右前肢腋窩下常規(guī)消毒,每只小鼠皮下注射瘤細胞懸液0.2ml。

    2.3 分組及給藥

    接種24h后將小鼠按體重隨機分為5組,每組14只,分別為:陰性對照組、異歐前胡素低、中、高三個劑量組和陽性藥物組。異歐前胡素三個劑量組給藥劑量分別為:0.2mg·kg-1、0.4mg·kg-1、0.8mg·kg-1,陽性藥物組給藥劑量為30mg·kg-1,陰性對照組給與同等體積的生理鹽水,以上各組均采取腹腔注射,給藥容積為0.1ml/10g,每天1次,連續(xù)給藥10d,并記錄小鼠每天體重。

    2.4 指標測定

    末次給藥后24h,頸椎脫臼處死小鼠,立即進行解剖,觀察主要臟器,剝離瘤體、脾臟、胸腺,用濾紙吸干組織液后,分別稱重,并計算各組抑瘤率和各器官指數(shù)。

    抑瘤率=(對照組平均瘤重-給藥組平均瘤重)/對照組平均瘤重×100%

    脾指數(shù)測定:脾臟切取后濾紙吸干表面水分后稱其濕重,計算脾指數(shù):脾指數(shù)(spleen index)=脾臟重量(g)/體重(g)×100%。

    胸腺指數(shù)測定:胸腺切取后濾紙吸干表面水分后稱其濕重,計算胸腺指數(shù):胸腺指數(shù)(thymus index)=胸腺重量(g)/體重(g)×100%。

    2.5 數(shù)據(jù)處理

    數(shù)據(jù)應用SPSS13.0軟件進行統(tǒng)計學處理,數(shù)據(jù)用均數(shù)±標準差(x±s)表示,各組率的比較采用t檢驗;P<0.05時,有統(tǒng)計學意義,差異顯著;P<0.01時,差異非常顯著。

    3 結果與討論

    3.1 給藥期間各實驗組對小鼠體重的影響

    給藥期間,陽性藥環(huán)磷酞胺組小鼠的體重于第五天開始出現(xiàn)下降趨勢,并于之后幾天持續(xù)明顯低于其它各組,說明30mg·kg-1環(huán)磷酞胺對小鼠的正常生理功能具有毒副作用,導致實驗小鼠體重明顯下降;異歐前胡素的各劑量組小鼠的體重逐日上升,表明異歐前胡素在給藥劑量范圍內(nèi)對機體的正常生長無明顯毒副作用。結果見表1和圖1。

    3.2 異歐前胡素對小鼠移植性肝癌(H22)的抑制作用

    實驗結果顯示,異歐前胡素低、中、高劑量組對移植性肝癌(H22)均有明顯的抑制作用,抑瘤率分別為28.67%、59.29%、66.38%,異歐前胡素低劑量組與陰性對照組比較有顯著性差異(P<0.05);異歐前胡素中、高劑量組與陰性對照組比較有極顯著性差異(P<0.01);陽性組抑瘤率為66.93%,與陰性對照組比較有極顯著性差異(P<0.01)。結果見表2、圖2和圖3。

    3.3 異歐前胡素對移植性H22肝瘤小鼠免疫器官的影響

    與陰性對照組比較,陽性藥環(huán)磷酞胺顯著降低了小鼠胸腺和脾臟的免疫器官指數(shù),且具有極顯著性差異(P<0.01),這表明該藥毒副作用非常強,對機體胸腺和脾臟造成了極大傷害。與環(huán)磷酞胺相比,異歐前胡素的各劑量組均顯著提高了胸腺指數(shù)和脾指數(shù),差異均達到極顯著性水平(P<0.01)。與陰性對照組比較,異歐前胡素的各劑量組的胸腺指數(shù)和脾指數(shù)相差不大,沒有統(tǒng)計學差異,表明異歐前胡素對小鼠免疫器官具有保護作用。結果見表3、圖4和圖5。

    4 小結

    近年來,隨著中藥現(xiàn)代化研究的不斷深入,從天然植物中尋找抗腫瘤藥物已經(jīng)成為新藥研究開發(fā)的一個新領域,呋喃香豆素類成分是其中一個方向。Kim YK等[8]在體外抗腫瘤實驗中發(fā)現(xiàn)異歐前胡素對人肺癌細胞A549、人卵巢癌細胞SK-OV-3等均具有不同程度的抑制作用,并呈劑量依賴性,但對其體內(nèi)抗腫瘤活性研究尚未見報道。

    本研究在前期體外實驗研究的基礎上,首次采用移植性腫瘤模型,初步探索了異歐前胡素在體內(nèi)抗腫瘤中的作用。實驗結果表明不同劑量小組異歐前胡素對小鼠肝癌H22實體瘤均表現(xiàn)出良好的抑制生長作用,并呈一定的劑量依賴性,低、中、高劑量組對H22的抑瘤率分別為28.67%、59.29%、66.38%。陽性藥環(huán)磷酰胺對小鼠胸腺和脾臟造成了極大傷害,異歐前胡素則對小鼠免疫器官有保護作用。本研究結果為充分利用明黨參加工廢棄的根皮提供了科學依據(jù)。此外,尚需從分子水平探索異歐前胡素的抗腫瘤作用機制,找出作用的靶分子,從而為充分開發(fā)利用這一重要的中藥資源奠定理論基礎。

    參考文獻:

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