培養(yǎng)基中添加物濃度對(duì)西葫蘆單倍體誘導(dǎo)的影響

李紅娟　孫松松

摘要：以2種基因型的西葫蘆一代雜交品種為試材，進(jìn)行未受精子房切片和胚珠的誘導(dǎo)培養(yǎng)，以期建立西葫蘆單倍體誘導(dǎo)體系。研究結(jié)果表明：添加物的濃度對(duì)胚狀體誘導(dǎo)率存在顯著影響，并找到最適的濃度。

關(guān)鍵詞：西葫蘆；未受精子房；胚珠；單倍體

1材料與方法

1.1材料

試驗(yàn)于2015年5月～2015年12月在河北省永清縣新苑陽(yáng)光農(nóng)業(yè)有限公司進(jìn)行。所用西葫蘆材料為雜交一代F₁，材料碧爽和碧巖分別編號(hào)為XH-1和XH-2，均購(gòu)于山西晉黎來(lái)種業(yè)有限公司。材料于2014年8月育苗，9月初定植在日光溫室，常規(guī)管理。

1.2方法

1.2.1培養(yǎng)基的配制。胚狀體誘導(dǎo)培養(yǎng)基：根據(jù)徐靜的研究，在保證出胚的情況下選用改良后的MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基MSO。MSO為：MS+4mg/L 2，4-D+1mg/LNAA+0.5mg/L 6-BA。本試驗(yàn)設(shè)計(jì)11種處理，每個(gè)處理的培養(yǎng)基成分見(jiàn)表1，每個(gè)處理接種3個(gè)子房，每個(gè)子房接種在1個(gè)培養(yǎng)皿中，每個(gè)處理重復(fù)3次。

1.2.2培養(yǎng)基中添加物濃度對(duì)單倍體誘導(dǎo)的影響。本試驗(yàn)在培養(yǎng)基Y，和Y2上進(jìn)行。取開(kāi)花當(dāng)天的編號(hào)為XH-1和XH-2兩個(gè)基因型的雜一代品種的未受精子房接種到Y(jié)₁和Y₂共計(jì)11個(gè)處理培養(yǎng)基上，每個(gè)處理重復(fù)3次。在進(jìn)入培養(yǎng)室培養(yǎng)前，調(diào)查膨大胚珠數(shù)；以膨大胚珠上形成再生芽作為再生植株統(tǒng)計(jì)標(biāo)準(zhǔn)；待發(fā)育成再生植株后，統(tǒng)計(jì)其倍性情況，并計(jì)算單倍體誘導(dǎo)率，即：?jiǎn)伪扼w誘導(dǎo)率=再生植株單倍體數(shù)/再生植株數(shù)×100%

2結(jié)果與分析

在Y₁的6組濃度培養(yǎng)基上接種XH一1和XH一2兩種基因型材料，從表2中可以看出，誘導(dǎo)率最高的處理為Y₁-2，XH-1材料為1.7%，XH-2材料為2.0%。其他處理的誘導(dǎo)率幾乎接近于0。隨著添加物濃度的增加誘導(dǎo)率隨之升高，濃度達(dá)到100mg/L時(shí)誘導(dǎo)率最高，之后隨著濃度的升高誘導(dǎo)率反而降低，由此得到添加物的最適濃度為100mg/L。

兩種基因型材料，從表3中可以看出，誘導(dǎo)率最高的處理為Y₂-2，XH-1材料為0.8%，XH-2材料為1.2%。其他變化趨勢(shì)與Y₁培養(yǎng)基的結(jié)果一致。

綜合表2和表3的信息，添加物濃度不同誘導(dǎo)效果明顯不同。在Y₁-2和Y₂-2培養(yǎng)基上誘導(dǎo)率均是最高，但是Y₁-2的誘導(dǎo)率要高于Y₂-2，說(shuō)明低濃度能促進(jìn)單倍體誘導(dǎo)，高濃度抑制單倍體誘導(dǎo)。這與蘇敏的研究相一致。

3討論

前人的研究認(rèn)為，過(guò)高的激素也利于胚狀體的誘導(dǎo)，以至于影響單倍體誘導(dǎo)，所以本試驗(yàn)未設(shè)計(jì)過(guò)高的添加物濃度，只是針對(duì)2種材料找到了最佳濃度值，所以還有待于進(jìn)一步研究，以尋求找到材料的最適濃度，實(shí)現(xiàn)提高單倍體誘導(dǎo)率的目的。