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    不同相對(duì)分子質(zhì)量PEG-CHMC修飾乳劑對(duì)二次注射PE2000誘導(dǎo)產(chǎn)生ABC現(xiàn)象的研究

    2017-01-05 01:20:58郭立剛黃振君鄧意輝
    關(guān)鍵詞:藥動(dòng)學(xué)乳劑現(xiàn)象

    焦 姣,孫 晶,范 迪,郭立剛,黃振君,鄧意輝*

    (沈陽(yáng)藥科大學(xué) 藥學(xué)院,遼寧 沈陽(yáng) 110016)

    不同相對(duì)分子質(zhì)量PEG-CHMC修飾乳劑對(duì)二次注射PE2000誘導(dǎo)產(chǎn)生ABC現(xiàn)象的研究

    焦 姣,孫 晶,范 迪,郭立剛,黃振君,鄧意輝*

    (沈陽(yáng)藥科大學(xué) 藥學(xué)院,遼寧 沈陽(yáng) 110016)

    目的研究比較不同相對(duì)分子質(zhì)量PEG-CHMC修飾乳劑(PEG-CHMC coating emulsion,CHMCE)在大鼠體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)行為及其對(duì)二次注射PEG2000-DSPE修飾乳劑(PEG2000-DSPE coating emulsion,PE2000)誘導(dǎo)的ABC現(xiàn)象,探究PEG相對(duì)分子質(zhì)量對(duì)乳劑藥動(dòng)學(xué)行為及ABC現(xiàn)象的影響。方法以摩爾分?jǐn)?shù)10% PEG修飾密度制備載藥乳劑CHMCE和PE,以磷脂劑量5 μmol·kg-1進(jìn)行大鼠尾靜脈注射,分別于不同時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行靜脈取血,處死大鼠后分離肝、脾組織,血漿和組織樣品經(jīng)處理后通過(guò) HPLC分析藥物含量。結(jié)果通過(guò)比較藥動(dòng)學(xué)參數(shù)AUC(0-240 min)、tMRT(0-240 min)可知,高相對(duì)分子質(zhì)量CHMCE(1 000、2 000、5 000)的循環(huán)時(shí)間較低相對(duì)分子質(zhì)量 CHMCE(400、600、800)有所延長(zhǎng),但延長(zhǎng)程度不高;CHMCE誘導(dǎo)PE2000產(chǎn)生ABC現(xiàn)象的結(jié)果顯示,低相對(duì)分子質(zhì)量CHMCE無(wú)ABC現(xiàn)象,而高相對(duì)分子質(zhì)量CHMCE誘導(dǎo)了一定強(qiáng)度的ABC現(xiàn)象(CHMCE1000、CHMCE2000和CHMCE5000的ABC index(0-60 min)分別為0.64、0.59和0.53)。結(jié)論P(yáng)EG相對(duì)分子質(zhì)量在CHMCE的藥動(dòng)學(xué)行為及ABC現(xiàn)象的產(chǎn)生中具有重要影響,研究結(jié)果對(duì)PEG相對(duì)分子質(zhì)量在ABC現(xiàn)象中的影響規(guī)律進(jìn)行了補(bǔ)充,為PEG化制劑相對(duì)分子質(zhì)量的選擇提供了一定借鑒。

    藥劑學(xué);PEG相對(duì)分子質(zhì)量;加速血液清除現(xiàn)象;聚乙二醇-膽固醇碳酸酯;循環(huán)時(shí)間;ABC index

    近些年,使用聚乙二醇(polyethylene glycol,PEG)對(duì)納米載藥體系進(jìn)行修飾,即 PEG化(pegylation)技術(shù),極大地解決了載體易與血漿中調(diào)理素結(jié)合而被單核巨噬細(xì)胞系統(tǒng)(mononuclear phagocytic system,MPS)攝取這一應(yīng)用障礙,延長(zhǎng)載體在血液中的循環(huán)時(shí)間、提高載體的靶向性和降低載體的免疫原性,從而推進(jìn)了納米載藥體系的應(yīng)用與發(fā)展[1]。但是,Dams等[2]研究指出,PEG化脂質(zhì)體間隔幾天重復(fù)注射于同一動(dòng)物體內(nèi)時(shí),二次注射制劑的血藥濃度迅速降至較低水平 ,即產(chǎn)生了加速血液清除(accelerated blood clearance,ABC)現(xiàn)象。這一現(xiàn)象不僅削弱了PEG化制劑的長(zhǎng)循環(huán)優(yōu)勢(shì),也對(duì)臨床應(yīng)用造成了極大限制,引起了研究者們的廣泛關(guān)注。

    一般而言,PEG-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(N-(carbonyl-methoxy polyethyleneglycol)-1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phos-phoethanolamine,PEG-DSPE)是制備PEG化載體的常用材料,其PEG與脂質(zhì)間的連接鍵為酰胺鍵,此化學(xué)鍵在體內(nèi)具有較高的穩(wěn)定性、不易降解,使它作為T(mén)I-2型抗原持久地刺激脾臟邊緣區(qū)B細(xì)胞,進(jìn)而產(chǎn)生大量的抗-PEG IgM,加快了MPS對(duì)二次注射PEG化制劑的識(shí)別攝取[3-5],即誘導(dǎo)了ABC現(xiàn)象。針對(duì)此問(wèn)題,Xu等[6]分別以羧酸酯鍵和碳酸酯鍵將脂質(zhì)部分與 PEG連接起來(lái),形成可斷裂 PEG-脂質(zhì)衍生物 PEG-CHEMS(methoxy poly(ethylene glycol) 2000-cholesteryl methylcarbonate,PEG-CHEMS)和聚乙二醇-膽固醇碳酸酯(methoxypoly(ethylene glycol)-cholesteryl methyl carbonate,PEG-CHMC),在體內(nèi)酯酶的作用下,酯鍵逐漸斷裂致使PEG脫落,降低了 PEG化制劑對(duì)脾臟的刺激作用從而減弱 ABC現(xiàn)象。遺憾的是,此研究并未考察PEG-CHMCES和PEG-CHMC對(duì)免疫系統(tǒng)的影響,也未進(jìn)行其他PEG相對(duì)分子質(zhì)量衍生物引發(fā)ABC現(xiàn)象的相關(guān)研究。早期有文章報(bào)道指出,PEG5000-DSPE 修飾脂質(zhì)體誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生 ABC現(xiàn)象的程度遠(yuǎn)低于PEG2000-DSPE修飾脂質(zhì)體所誘導(dǎo)ABC現(xiàn)象的程度[4],但未研究PEG相對(duì)分子質(zhì)量小于1 000時(shí)對(duì) ABC現(xiàn)象的影響。因此,本文作者制備了不同相對(duì)分子質(zhì)量 PEG-CHMC修飾乳劑(PEG-CHMC coating emulsion,CHMCE),并對(duì)此乳劑在大鼠體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)行為及其誘導(dǎo)二次注射PEG2000-DSPE修飾乳劑(PEG2000-DSPE coating emulsion,PE2000)產(chǎn)生的ABC現(xiàn)象進(jìn)行研究,以期探究不同相對(duì)分子質(zhì)量(PEG)對(duì)CHMCE體內(nèi)行為的影響,同時(shí)為解決ABC現(xiàn)象提供一個(gè)新思路。

    1 儀器與材料

    BS124s電子分析天平(德國(guó)Sartorius公司),JY92-2D超聲波細(xì)胞粉碎機(jī)(寧波新芝科器研究所),DF-101S集熱式恒溫加熱磁力攪拌器(鞏義英峪予華儀器廠),Anke TDL80-2B離心機(jī)(上海安亭科學(xué)儀器廠),Type 37600 mixer(美國(guó)Thermolyne公司),P230高壓恒流泵和HW-2000色譜數(shù)據(jù)處理工作站(大連依利特分析儀器有限公司),AT-130柱溫箱(天津金洲科學(xué)儀器有限公司),高精度全自動(dòng)交流穩(wěn)壓器(中川電氣科技有限公司),Nicomp-380 激光粒度測(cè)定儀(美國(guó)PSS公司),EDTA-K2 抗凝真空采血管(湖南瀏陽(yáng)醫(yī)用儀具廠),SHB-3循環(huán)水多用真空泵(鄭州杜甫儀器廠),KQ5200B聲波清洗器(昆山超聲儀器有限公司)。

    維生素E煙酸酯(tocopheryl nicotinate,TN,東北制藥集團(tuán)股份有限公司),蛋黃卵磷脂 E80 (E80,美國(guó) LIPOID GmbH公司,注射級(jí)),聚乙二醇-膽固醇碳酸酯(methoxypoly(ethylene glycol)-cholesteryl methyl carbonate,PEG-CHMC,自行合成),聚乙二醇2000-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺 ( N-(carbonyl-methoxy polyethyleneglycol-2000)-1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phos-phoethanolamine, PEG2000-DSPE,美國(guó)Genzyme公司),中鏈油(MCT,遼寧鐵嶺北亞藥用油有限公司),葡萄糖注射液(昆明南疆制藥有限公司),滅菌注射用水(石家莊四藥有限公司)。

    Wistar 大鼠,雄性,體質(zhì)量180~210 g,沈陽(yáng)藥科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供,許可證號(hào)SCXK(遼)2014-0001。

    2 方法與結(jié)果

    2.1 PEG化乳劑的制備和質(zhì)量評(píng)價(jià)

    2.1.1 乳劑的處方及工藝

    以摩爾分?jǐn)?shù)10%PEG2000-DSPE和PEG-CHMC修飾密度的乳劑制備如下。按處方量稱取MCT 1.50 g、E80 0.35 g及TN 0.30 g,再分別稱取PEG2000-DSPE 0.14 g或PEG400-CHMC 40 mg、PEG600-CHMC 50 mg、PEG800-CHMC 66 mg、PEG1000-CHMC 70 mg、PEG2000-CHMC 120 mg及PEG5000-CHMC 270 mg,分別于55 ℃水浴中溶解作為油相,攪拌條件下注入加熱至相同溫度的滅菌注射用水至100 mL,使最終總磷脂濃度為5 mmol·L-1。繼續(xù)于55 ℃水浴中攪拌孵育10 min后即得初乳。初乳經(jīng)200 W超聲處理2 min后,400 W超聲分散6 min(工作1 s,間歇1 s),0.22 μm的微孔濾膜過(guò)濾后即得載藥乳劑。

    2.1.2 乳劑的粒徑、變異系數(shù)及zeta電位的測(cè)定

    平均粒徑(mean diameter,d)和變異系數(shù)(Coeff. of Var’n, C.V.)是乳劑的重要評(píng)價(jià)指標(biāo),它們的大小決定了微粒分散體系的物理穩(wěn)定性。具體方法如下:將乳劑用蒸餾水稀釋至適宜濃度后,用激光散射粒徑測(cè)定儀測(cè)定該乳劑的、C.V.值及zeta電位,檢測(cè)波長(zhǎng)為632.8 nm,測(cè)定角為90°。不同相對(duì)分子質(zhì)量CHMCE和PE的粒徑和zeta電位見(jiàn)表1。

    Table 1 The characterization of CHMCEn and PE2000表 1 CHMCEn和PE2000的表征

    2.2 藥動(dòng)學(xué)實(shí)驗(yàn)樣品的處理及分析

    2.2.1 HPLC分析

    色譜柱:Hypersil BDS C18柱(200 mm×4.6 mm,5 μm);流動(dòng)相:甲醇-異丙醇(體積比80∶20);柱溫:35 ℃;流速:1.0 mL·min-1;檢測(cè)波長(zhǎng):264 nm;進(jìn)樣量:20 μL;內(nèi)標(biāo):維生素E醋酸酯。

    2.2.2 血漿樣品處理方法

    精密移取血漿樣品100 μL置于1.5 mL離心管中,加入100 mg·L-1維生素E醋酸酯(內(nèi)標(biāo))的甲醇溶液100 μL、甲醇100 μL及正己烷600 μL。渦旋混合提取5 min后,于1×104r·min-1離心10 min。移取正己烷層500 μL,氮?dú)鈸]干。揮干的物質(zhì)以流動(dòng)相100 μL復(fù)溶,渦旋1 min混勻,于1×104r·min-1離心10 min,精密量取上清液20 μL進(jìn)樣分析。

    2.2.3 組織樣品處理方法

    取組織0.5 g,于10 mL玻璃管中,加入生理鹽水1 mL,于1.4×104r·min-1高速分散勻漿,精密移取組織勻漿液200 μL,置于5 mL離心管中,加入內(nèi)標(biāo)(維生素E醋酸酯)甲醇溶液100 μL、甲醇300 μL及正己烷1 200 μL,渦旋混合5 min后于1×104r·min-1離心10 min。移取正己烷層1 mL,40 ℃條件氮?dú)鈸]干。揮干后物質(zhì)以流動(dòng)相100 μL復(fù)溶,渦旋1 min混勻,于1×104r·min-1離心10 min,取上清液20 μL進(jìn)行HPLC分析。

    2.3 不同相對(duì)分子質(zhì)量CHMCE大鼠體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)行為及ABC現(xiàn)象研究

    2.3.1 實(shí)驗(yàn)方案及實(shí)驗(yàn)方法

    取雄性Wistar大鼠,體質(zhì)量180~210 g,隨機(jī)分成14組,按表2方案進(jìn)行尾靜脈注射給藥。對(duì)照組首次注射質(zhì)量分?jǐn)?shù)5%葡萄糖溶液,實(shí)驗(yàn)組首次按磷脂劑量5 μmol·kg-1注射PEG化乳劑。首次注射7 d后,對(duì)照組按磷脂計(jì)量5 μmol·kg-1靜脈注射不同相對(duì)分子質(zhì)量CHMCE,試驗(yàn)組注射PE2000,并分別于二次給藥后的5、15、30、60、120、240 min經(jīng)眼眶靜脈叢取血,4 000 r·min-1離心10 min分離血漿。240 min時(shí)間點(diǎn)血樣采集完畢后將大鼠脫頸處死,取出肝、脾,用生理鹽水洗去殘留血液后以濾紙吸干水分。按處理血漿及組織樣品方法處理后,HPLC法檢測(cè)藥物濃度。

    Table 2 The injection protocols for 10% PEG-CHMC emulsions in rats表 2 10%PEG-CHMCE修飾乳劑在大鼠體內(nèi)的注射方案

    2.3.2 不同相對(duì)分子質(zhì)量PEG對(duì)CHMCE大鼠體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)行為的影響

    2.3.2.1 首次注射不同相對(duì)分子質(zhì)量CHMCE的藥動(dòng)學(xué)行為和組織分布

    以上述制備的PE2000和CHMCEn對(duì)大鼠進(jìn)行尾靜脈注射給藥,研究乳劑在大鼠體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)行為和組織分布,結(jié)果見(jiàn)圖1。

    Fig. 1 The blood clearance profile of emulsions modified with PEG-CHMC of different PEG molecular weights in Wistar rats (±s, n=3)圖 1 不同相對(duì)分子質(zhì)量的PEG-CHMCE修飾乳劑在大鼠體內(nèi)的清除現(xiàn)象(± s, n=3)

    圖1顯示,不同相對(duì)分子質(zhì)量CHMCE的循環(huán)時(shí)間基本一致,且明顯低于PE2000。通過(guò)DAS 2.1.1軟件對(duì)所有PEG化乳劑的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì),結(jié)果見(jiàn)表3。CHMCE從低相對(duì)分子質(zhì)量到高相對(duì)分子質(zhì)量的藥時(shí)曲線下面積(AUC)分別為(242.20±10.25)、(211.25±12.32)、(156.75±30.32)、(655.83±8.54)、(662.35±10.82)和(737.48±5.20) mg·min·L-1,平均滯留時(shí)間(tMRT)分別為(0.21±0.02)、(0.26±0.04)、(0.18±2.45)、(0.84±0.08)、(1.01±0.04)和(1.10±0.04)h。PE2000的AUC和tMRT分別為(3673.0±7.82)mg·min·L-1和(4.65±1.71)h,明顯高于CHMCE,同時(shí)高相對(duì)分子質(zhì)量CHMCE(1 000、2000、5 000)的AUC是低相對(duì)分子質(zhì)量(400、600、800)的3、4倍。隨PEG相對(duì)分子質(zhì)量的增加,肝臟中的聚集量呈下降趨勢(shì),而脾臟的聚集量先增高后降低。總體來(lái)看,循環(huán)時(shí)間相對(duì)長(zhǎng)的CHMCE1000、2000、5000的肝脾聚集量較低。

    Table 3 Pharmacokinetic parameters of CHMCE and PE2000 estimated in rats(n=3)表 3 CHMCE和PE2000在大鼠體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)

    2.3.2.2 不同相對(duì)分子質(zhì)量CHMCE對(duì)誘導(dǎo)二次注射PE2000產(chǎn)生ABC現(xiàn)象的影響

    首次注射不同乳劑時(shí),會(huì)對(duì)大鼠機(jī)體產(chǎn)生不同程度的刺激,從而對(duì)二次注射的乳劑造成加速血液清除現(xiàn)象。因此,為了比較不同相對(duì)分子質(zhì)量CHMCE對(duì)加速血液清除現(xiàn)象的影響,作者將二次注射的乳劑設(shè)定為PE2000,而研究比較首次注射不同乳劑對(duì)加速血液清除現(xiàn)象的影響,結(jié)果見(jiàn)圖2。

    Fig. 2 Influence of PEG molecular weights on the subsequent injected PE2000 after initial administration of CHMCE(± s, n=3)圖 2 不同相對(duì)分子質(zhì)量PEG對(duì)二次注射PE2000的影響(±s, n=3)

    由圖2可知,首次注射CHMCE1000、2000、5000均引起二次注射PE2000藥動(dòng)學(xué)行為的改變,但ABC現(xiàn)象較PE2000明顯減弱。而CHMCE400、600、800卻未誘導(dǎo)二次注射PE2000的快速清除,二次注射的PE2000與單次注射無(wú)顯著性差異,說(shuō)明無(wú)ABC現(xiàn)象的產(chǎn)生。肝脾聚集量通過(guò)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示各組無(wú)顯著性差異。

    2.4 ABC index的選擇

    為了量化的比較ABC現(xiàn)象發(fā)生的強(qiáng)烈程度,作者引用二次注射與首次注射制劑AUC比值作為衡量這種程度的標(biāo)準(zhǔn),記為ABC index,其計(jì)算公式為ABC index = 二次注射的AUC(0-t)/首次注射的AUC(0-t)[5]。ABC index值越大,表明重復(fù)給藥引起二次注射乳劑藥動(dòng)學(xué)行為的改變?cè)叫?,即發(fā)生的ABC現(xiàn)象越弱。連續(xù)注射不同PEG化乳劑時(shí),首次與二次注射0~240 min后不同時(shí)間段內(nèi)的AUC比值見(jiàn)圖3。結(jié)果顯示AUC比值在注射后0~60 min內(nèi)波動(dòng)性較大,60 min后開(kāi)始趨于平衡,因此,60 min之后的時(shí)間段均可選擇,但考慮到ABC現(xiàn)象為一免疫反應(yīng),短時(shí)間內(nèi)的變化情況更具代表性,所以選擇0~60 min內(nèi)的AUC比值作為衡量ABC現(xiàn)象強(qiáng)弱的指標(biāo)。

    Fig. 3 The ratio of AUC(0-t)for the second injection to that of the first dose of PEGylated emulsions.圖 3 二次注射PEG化乳劑與首次注射PEG化乳劑AUC(0-t)的比

    2.5 ABC index(0-60 min)的比較

    首次注射不同相對(duì)分子質(zhì)量的CHMCE,二次注射PE2000時(shí),首次與二次注射0~60 min內(nèi)的AUC比值見(jiàn)表4。

    Table 4 The ABC index of the phenomenon induced by CHMCE with different PEG molecular weights表 4 不同相對(duì)分子質(zhì)量的CHMCE引起的加速血液清除現(xiàn)象的ABC index。

    將二次注射PE2000的AUC與首次注射PE2000的AUC比值作為ABC index(0-60 min)進(jìn)行比較,結(jié)果見(jiàn)表4。CHMCE相對(duì)于PE2000來(lái)說(shuō),ABC現(xiàn)象的強(qiáng)度均有所降低(ABC index(0-60 min)大于 0.5)。不同相對(duì)分子質(zhì)量 CHMCE誘導(dǎo)二次注射 PE2000的 AUC比值由小到大依次為CHMCE5000≈CHMCE2000≈CHMCE1000<CHMCE400≈CHMCE600≈CHMC800,即誘導(dǎo)的ABC現(xiàn)象逐漸減弱。

    3 討論

    a. 從表2數(shù)據(jù)可以發(fā)現(xiàn),CHMCE組不同相對(duì)分子質(zhì)量乳劑的平均粒徑均大于PE2000。這其中的原因是2種PEG-脂質(zhì)衍生物的結(jié)構(gòu)差異而使乳化作用不同,PEG-DSPE具有較長(zhǎng)的親酯雙鏈,而本實(shí)驗(yàn)室合成的PEG-CHMC的親脂鏈僅為較短的單鏈,所以前者的親脂鏈在乳劑的油相中插入的更多;PEG-DSPE親脂端與乳劑的油相MCT均具有烷基鏈,融合性較好,而PEG-CHMC親脂端則為膽固醇結(jié)構(gòu),與 MCT的融合作用不如 PEG-DSPE。上述原因使 PEG-DSPE的乳化作用強(qiáng)于PEG-CHMC,結(jié)果制得PE的粒徑相對(duì)較小。有文獻(xiàn)指出,首次注射PEG化脂質(zhì)體的粒徑對(duì)誘導(dǎo)產(chǎn)生ABC現(xiàn)象的作用不大[2,7],因此不考慮粒徑在本試驗(yàn)ABC現(xiàn)象中的影響。

    b. PEG相對(duì)分子質(zhì)量對(duì)CHMCE的循環(huán)時(shí)間存在一定影響。PEG是一個(gè)中性的聚合物,在水和有機(jī)溶劑中易溶,化學(xué)通式為HOCH2(CH2OCH2)nCH2OH。PEG的水溶性大多被認(rèn)為是由于其親水性的結(jié)構(gòu),水分子與PEG鏈醚鍵中的氧形成氫鍵,水分子定向與PEG結(jié)合,形成水化層包裹在PEG鏈表面,提高其表面親水性和空間位阻,減小MPS識(shí)別概率以延長(zhǎng)體內(nèi)循環(huán)時(shí)間。Mori等[3]認(rèn)為載體表面PEG所產(chǎn)生的水化層厚度隨PEG相對(duì)分子質(zhì)量的增大而增加,致密的水化層則是載體避免MPS識(shí)別攝取從而延長(zhǎng)體內(nèi)循環(huán)時(shí)間的主要原因。本試驗(yàn)將不同相對(duì)分子質(zhì)量?PEG-CHMC修飾于乳劑表面,未觀察到CHMCE循環(huán)時(shí)間隨PEG相對(duì)分子質(zhì)量的增加而顯著延長(zhǎng),僅在高相對(duì)分子質(zhì)量(1 000、2 000、5 000)和低相對(duì)分子質(zhì)量(400、600、800)CHMCE間產(chǎn)生了一定差異,其原因是可斷裂PEG-脂質(zhì)衍生物親水性部分與親脂性部分間的連接鍵為可斷裂的碳酸酯鍵,易被哺乳動(dòng)物體內(nèi)廣泛存在的酯酶所水解[8],致使CHMCE進(jìn)入大鼠體內(nèi)后表面PEG分子逐漸斷裂,乳劑失去了PEG水化層的保護(hù)而被快速清除,主要聚集在肝組織。PEG-CHMC在同等斷裂條件下,長(zhǎng)鏈的PEG分子從最初的“毛刷狀”轉(zhuǎn)變成“蘑菇狀”對(duì)乳劑表面的覆蓋程度更大[9],保護(hù)作用更強(qiáng),因此我們能夠觀察到CHMCE1000、2000、5000在循環(huán)時(shí)間上具有一定優(yōu)勢(shì)。

    c. Laverman等[10]研究指出,二次注射制劑的性質(zhì)會(huì)影響ABC現(xiàn)象的強(qiáng)度,因此,本試驗(yàn)以具有明顯長(zhǎng)循環(huán)特性的PE2000作為二次注射制劑,更能有效表征首次注射制劑對(duì)ABC現(xiàn)象的影響。研究認(rèn)為T(mén)I-2型抗原因具有較大的相對(duì)分子質(zhì)量、整齊的表面排列以及較長(zhǎng)的循環(huán)時(shí)間,這些特點(diǎn)能夠保證其以相對(duì)長(zhǎng)的時(shí)間與B細(xì)胞表面受體相互作用,產(chǎn)生持續(xù)的B細(xì)胞信號(hào)刺激,從而在不需要輔助T細(xì)胞的條件下刺激機(jī)體產(chǎn)生抗體[11]。表5的結(jié)果顯示PE2000重復(fù)注射誘導(dǎo)了極為強(qiáng)烈的ABC現(xiàn)象(ABC index(0-60 min)為0.12),其主要原因之一是PEG2000-DSPE能夠穩(wěn)定存在于乳劑表面,保證了乳劑較長(zhǎng)的循環(huán)時(shí)間從而增強(qiáng)了PE2000對(duì)脾臟B細(xì)胞的持久刺激作用。相較之,CHMCE則因可斷裂PEG-CHMC的特性誘導(dǎo)了較弱的ABC現(xiàn)象。從本試驗(yàn)結(jié)果來(lái)看,CHMCE1000、2000、5000的循環(huán)時(shí)間比PE2000大大縮短,卻依舊誘導(dǎo)了ABC現(xiàn)象的產(chǎn)生(ABC index(0-60 min)分別為0.64、0.59、0.53)。這一結(jié)果提示,高相對(duì)分子質(zhì)量CHMCE誘導(dǎo)的ABC現(xiàn)象可能存在其他的影響因素。Kaminskas等[12]研究指出,首次以5 mg·kg-1尾靜脈給予大鼠不同比例的PE-PC膠束(7 μmol·kg-1phospholipids),間隔7 d后再次注射相同磷脂劑量的PEG化脂質(zhì)體,結(jié)果顯示首次注射的膠束均誘導(dǎo)二次注射PEG化脂質(zhì)體產(chǎn)生了強(qiáng)烈的ABC現(xiàn)象。本實(shí)驗(yàn)室所合成PEG-CHMC疏水端的膽固醇鏈長(zhǎng)較短,而親水端PEG鏈長(zhǎng)相對(duì)較長(zhǎng),且隨PEG相對(duì)分子質(zhì)量的增加PEG-CHMC的親水性逐漸增強(qiáng)。通過(guò)非離子表面活性劑親水親油能力(hydrophile-lipophile balance,HLB)值計(jì)算公式得到PEG-CHMC的HLB值隨PEG相對(duì)分子質(zhì)量由低到高依次為10.32、12.20、13.47、14.38、16.70和18.52[13],高相對(duì)分子質(zhì)量PEG-CHMC親水性強(qiáng),更易于從乳劑表面脫落進(jìn)而形成膠束。另外,Wang等[14]研究指出,PEG分子的-(CH2CH2O)n-重復(fù)片段可能是脾臟邊緣區(qū)B細(xì)胞識(shí)別并產(chǎn)生相應(yīng)抗體的關(guān)鍵,因此,重復(fù)片段較少、不能有效激活免疫細(xì)胞可能是小相對(duì)分子質(zhì)量 CHMCE未誘導(dǎo)二次PE2000產(chǎn)生ABC現(xiàn)象的原因。所以,高相對(duì)分子質(zhì)量CHMCE所誘導(dǎo)的ABC現(xiàn)象可能受多種因素影響,尚需進(jìn)一步試驗(yàn)予以證實(shí)。

    綜上,本實(shí)驗(yàn)中CHMCE的藥動(dòng)學(xué)行為可因高相對(duì)分子質(zhì)量PEG-CHMC(1 000、2 000、5 000)的修飾得到一定延長(zhǎng);對(duì)PE2000誘導(dǎo)產(chǎn)生ABC現(xiàn)象的結(jié)果顯示,首次注射低相對(duì)分子質(zhì)量CHMCE不誘導(dǎo)ABC現(xiàn)象產(chǎn)生,而當(dāng)PEG相對(duì)分子質(zhì)量達(dá)到1 000以上時(shí),CHMCE因PEG-CHMC自身特性增加了對(duì)免疫細(xì)胞的刺激作用從而誘導(dǎo)了ABC現(xiàn)象,此試驗(yàn)條件下得到PEG相對(duì)分子質(zhì)量對(duì)ABC現(xiàn)象的不同影響為解決ABC現(xiàn)象提供了一定參考。

    [1] HARRIS J M, CHESS R B. Effect of pegylation on pharmaceuticals[J]. Nature Reviews Drug Discovery, 2003, 2(3): 214-221.

    [2] DAMS E T, LAVERMAN P, OYEN W J, et al. Accelerated blood clearance and altered biodistribution of repeated injections of sterically stabilized liposomes[J]. Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics, 2000, 292(3):1071-1079.

    [3] MORI A, KLIBANOV A L, TORCHILIN V P, et al. Influence of the steric barrier activity of amphipathic poly (ethyleneglycol) and ganglioside GM〈 sub〉 1〈/sub〉 on the circulation time of liposomes and on the target binding of immunoliposomes in vivo[J]. FEBS letters, 1991, 284(2): 263-266.

    [4] ISHIDA T, ICHIKAWA T, ICHIHARA M, et al. Effect of the physicochemical properties of initially injected liposomes on the clearance of subsequently injected PEGylated liposomes in mice[J]. Journal of Controlled Release, 2004, 95(3): 403-412.

    [5] ZHAO Y, WANG C, WANG L, et al. A frustrating problem: Accelerated blood clearance of PEGylated solid lipid nanoparticles following subcutaneous injection in rats[J]. European Journal of Pharmaceutics and Biopharmaceutics, 2012, 81(3): 506-513.

    [6] XU H, WANG K Q, DENG Y H, et al. Effects of cleavable PEG-cholesterol derivatives on the accelerated blood clearance of PEGylated liposomes[J]. Biomaterials, 2010, 31(17): 4757-4763.

    [7] KOIDE H, ASAI T, HATANAKA K, et al. Particle size-dependent triggering of accelerated blood clearance phenomenon[J]. International Journal of Pharmaceutics, 2008, 362(1): 197-200.

    [8] SLEPUSHKIN V A, SIM ES S, DAZIN P, et al. Sterically Stabilized pH-sensitive liposomes intracellular delivery of aqueous contents and prolonged circulation in vivo[J]. Journal of Biological Chemistry, 1997, 272(4): 2382-2388.

    [9] DE GENNES P. Conformations of polymers attached to an interface[J]. Macromolecules, 1980, 13(5): 1069-1075.

    [10] LAVERMAN P, CARSTENS M G, BOERMAN O C, et al. Factors affecting the accelerated blood clearance of polyethylene glycol-liposomes upon repeated injection[J]. Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics, 2001, 298(2): 607-612.

    [11] MOND J J, LEES A, SNAPPER C M. T cell-independent antigens type 2[J]. Annual Aeview of Immunology, 1995, 13(1): 655-692.

    [12] KAMINSKAS L M, MCLEOD V M, PORTER H, et al. Differences in colloidal structure of PEGylated nanomaterials dictate the likelihood of accelerated blood clearance[J]. Journal of Pharmaceutical Sciences, 2011, 100(11): 5069-5077.

    [13] 丁佩章. 表面活性劑及其HLB值[J]. 濱州師專學(xué)報(bào), 1994(2): 3.

    [14] WANG X, ISHIDA T, KIWADA H. Anti-PEG IgM elicited by injection of liposomes is involved in the enhanced blood clearance of a subsequent dose of PEGylated liposomes[J]. Journal of Controlled Release, 2007, 119(2): 236-244.

    The exploration about ABC phenomenon induced by emulsions modified with PEG-CHMC of different molecular weight

    JIAO Jiao, SUN Jing, FAN Di, GUO Ligang, HUANG Zhenjun, DENG Yihui*
    (School of Pharmacy, Shenyang Pharmaceutical University, Shenyang 110016, China)

    ObjectiveTo prepare PEG-CHMC emulsions(PEG-CHMC coating emulsion,CHMCE) withdifferent molecular weights and study theirs pharmacokinetic behavior and ABC phenomenon of PEG2000-DSPE emulsions (PEG2000-DSPE coating emulsion,PE2000). That is to explore the contribution of PEG weight in pharmacokinetic behavior and ABC phenomenon. Method With 10 % PEG modification density to prepare drug-loaded emulsions. The rats were administered PEG-modified emulsions by the intravenous (via the tail vein) injection of 5 μmol·kg-1phospholipids. At 5, 15, 30, 60, 240 min after the injection, the blood samples were collected. After withdrawing the last blood sample at 240 min, the rats were sacrificed and livers, spleens were excised. Then the drug concentration was determined through HPLC.Results The circulation time of high molecular weight CHMCE1000, 2000, 5000 was longer than low molecular weight CHMCE400, 600, 800 through comparing AUC(0-240 min)and MRT(0-240 min). The results of CHMCE induced ABC phenomenon to PE2000 illustrated that low molecular weight CHMCE didn’t induce ABC phenomenon. But high molecular weights CHMCE could induce ABC phenomenon, the ABC index(0-60 min)of CHMCE1000, CHMCE2000, CHMCE5000 were 0.64, 0.59, 0.53, respectively.ConclusionThe molecular weight of PEG that modified on the surface of CHMCE has an important influence on pharmacokinetic behavior and ABC phenomenon. These outcomes would supplement the affection law of PEG molecular weights to ABC phenomenon and provide a certain reference to select PEG molecular weights of PEGylated formulation.

    Pharmaceutics; PEG molecular weight; accelerated blood clearance phenomenon; PEG-CHMC; circulation time; ABC index

    R94

    : A

    (2016)06–0213–11

    10.14146/j.cnki.cjp.2016.06.004

    (本篇責(zé)任編輯:趙桂芝)

    2015–05–08

    國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(81072602)

    焦姣(1989-), 女(漢族),山西運(yùn)城人, 碩士研究生,E-mailjiaojiao_723@126.com;*通訊作者:鄧意輝(1964-), 男(漢族), 湖南花垣人, 教授, 博士, 博士生導(dǎo)師, 主要從事藥物靶向新劑型的研究,Tel.024-23986316,E-maildds-666@163.com。

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