菲律賓蛤仔對(duì)阿特拉津的富集與消除規(guī)律

王瑋云，劉麗娟，張華威，任利華，姜向陽(yáng)，姜芳，孫靈毅

(1.山東省海洋資源與環(huán)境研究院，山東 煙臺(tái) 264006；2.煙臺(tái)市水產(chǎn)研究所，山東 煙臺(tái) 264003)

菲律賓蛤仔對(duì)阿特拉津的富集與消除規(guī)律

王瑋云，劉麗娟1*，張華威1，任利華1，姜向陽(yáng)1，姜芳1，孫靈毅2

(1.山東省海洋資源與環(huán)境研究院，山東 煙臺(tái) 264006；2.煙臺(tái)市水產(chǎn)研究所，山東 煙臺(tái) 264003)

采用半靜態(tài)水質(zhì)接觸染毒法，研究了菲律賓蛤仔對(duì)養(yǎng)殖海水中阿特拉津的富集和消除規(guī)律。在水溫(20±1) ℃，阿特拉津暴露濃度分別為1.0、10.0和200 μg/L的養(yǎng)殖海水中，菲律賓蛤仔中阿特拉津含量隨暴露濃度的升高而逐步增加，二者之間呈顯著正相關(guān)關(guān)系。在3個(gè)暴露組中，菲律賓蛤仔對(duì)阿特拉津的富集表現(xiàn)為隨著時(shí)間的推移先增加后降低，而后維持在某一含量水平(分別為5.2、30.5 和420.1 μg/kg)，僅產(chǎn)生小幅波動(dòng)。3個(gè)暴露濃度下，菲律賓蛤仔中阿特拉津含量分別在第4天、第4天和第2天達(dá)到富集最大值，最大富集系數(shù)分別為15.4、6.15、3.56。在消除實(shí)驗(yàn)中，菲律賓蛤仔中阿特拉津含量迅速下降，3個(gè)實(shí)驗(yàn)濃度下降到低于檢出限的時(shí)間分別為1、4和8 d。結(jié)果表明，菲律賓蛤仔對(duì)阿特拉津具有快速富集和快速消除能力，本研究可為海水貝類食品安全和海洋環(huán)境保護(hù)提供理論依據(jù)。[中國(guó)漁業(yè)質(zhì)量與標(biāo)準(zhǔn)，2016,6(4):12-16]

阿特拉津；菲律賓蛤仔；富集；消除

菲律賓蛤仔(Ruditapesphilippinarum)是一種分布比較廣的灘涂貝類，在中國(guó)沿海均有分布，近年來(lái)已成為中國(guó)北方沿海重要的養(yǎng)殖貝類之一，具有很高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值。菲律賓蛤仔生活在潮間帶或近岸淺海，且生長(zhǎng)位置比較固定，受阿特拉津污染的風(fēng)險(xiǎn)較大。然而，目前關(guān)于阿特拉津在水生生物中的生物富集和消除規(guī)律研究較少[8]，有關(guān)阿特拉津在菲律賓蛤仔體內(nèi)富集效應(yīng)的研究在國(guó)內(nèi)外尚未見(jiàn)報(bào)道。本研究探討了阿特拉津在菲律賓蛤仔體內(nèi)的富集及消除規(guī)律，以期為深入研究阿特拉津?qū)λ锏奈：Τ潭群妥饔脵C(jī)理提供參考，為海水貝類食品安全和海洋環(huán)境保護(hù)提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)生物

實(shí)驗(yàn)用菲律賓蛤仔取自山東省牟平近海，殼長(zhǎng)2.5 ～3.0 cm。實(shí)驗(yàn)前將菲律賓蛤仔在實(shí)驗(yàn)條件下暫養(yǎng)3 d，每天換水1次，定時(shí)投喂硅藻(煙臺(tái)海益苗業(yè)有限公司培育，經(jīng)檢測(cè)未受阿特拉津污染)1次，連續(xù)充氧。經(jīng)檢測(cè)菲律賓蛤仔不含阿特拉津，馴養(yǎng)期間及時(shí)清除狀態(tài)不佳和死亡個(gè)體，選擇活動(dòng)性強(qiáng)的健康蛤仔進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

1.2 實(shí)驗(yàn)用水

富集、消除實(shí)驗(yàn)在山東省煙臺(tái)海益苗業(yè)有限公司完成。實(shí)驗(yàn)用海水為該公司育苗生產(chǎn)用水，取自蓬萊近海，經(jīng)沙濾、升溫后使用，水溫(20±1) ℃，pH7.8～8.0，鹽度30，經(jīng)檢測(cè)均不含阿特拉津。

1.3 主要儀器和試劑

氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀(6890N/5973N，Agilent，USA)；超聲波清洗器(KQ-600E，昆山市超聲儀器有限公司)，凝膠色譜儀(Accuprep Mps，J2 Scientific，USA)；全自動(dòng)固相萃取儀(ASPEC XL4+，Gilson，F(xiàn)rance)，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(Laborota 4001，Heidolph，Germany)。乙酸乙酯(色譜純，Merck)；環(huán)己烷(色譜純，Tedia)；丙酮(色譜純，Merck)；正己烷(色譜純，Merck)；石墨化碳柱(Carbon，500 mg/6 mL，Bong Elut)；氨基柱(NH2SPE Tubes，500 mg/3 mL，CNWBOND)。

阿特拉津(atrazine)標(biāo)準(zhǔn)品由Dr. Ehrenstorfer提供，純度>98.0%。實(shí)驗(yàn)用水為去離子水。標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制：準(zhǔn)確稱取一定量標(biāo)準(zhǔn)品，用甲醇溶解定容至100 mg/L，使用前用乙酸乙酯稀釋至所需濃度。

1.4 富集和消除實(shí)驗(yàn)

設(shè)置1.0、10.0和200 μg/L 3個(gè)實(shí)驗(yàn)組和1個(gè)空白對(duì)照組，每組設(shè)置2個(gè)平行。設(shè)置7個(gè)150 L水箱，每個(gè)實(shí)驗(yàn)水箱內(nèi)注入新鮮海水100 L，加入適量的阿特拉津儲(chǔ)備液，使水體中的阿特拉津的最終質(zhì)量濃度分別為0、1.0、10.0和200 μg/L，各放入經(jīng)暫養(yǎng)的健康菲律賓蛤仔100只。采用半靜態(tài)水質(zhì)接觸染毒法，每24小時(shí)換一半含相同質(zhì)量濃度阿特拉津的海水。分別在富集實(shí)驗(yàn)開(kāi)始后的第6、24、48、96、144、240、336、432和528小時(shí)取樣，每次從每個(gè)水箱內(nèi)隨機(jī)取菲律賓蛤仔5只，分別放入標(biāo)記清楚的自封口塑料袋中密封，-20 ℃冷凍保存。富集實(shí)驗(yàn)結(jié)束后進(jìn)行菲律賓蛤仔體內(nèi)阿特拉津的消除實(shí)驗(yàn)，把所有實(shí)驗(yàn)水箱換成清潔海水，分別在換水完畢后的第2、24、48、96、192和336小時(shí)進(jìn)行取樣，投喂、取樣方法與富集實(shí)驗(yàn)一致。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中及時(shí)撈出死亡的菲律賓蛤仔。

1.5 阿特拉津含量的測(cè)定

用濾紙將所取菲律賓蛤仔殼表面擦干，解剖，取所有可食部分，用均質(zhì)機(jī)制成勻漿，稱取勻漿后的

樣品5.00 g于50 mL塑料離心管中。樣品預(yù)處理和含量測(cè)定均按照張華威等[9]的方法進(jìn)行，該方法阿特拉津檢出限為1.0 μg/kg。

2 結(jié)果與討論

2.1 菲律賓蛤仔對(duì)不同濃度阿特拉津的富集規(guī)律

以阿特拉津暴露濃度為橫坐標(biāo)，菲律賓蛤仔中阿特拉津的含量為縱坐標(biāo)，分別對(duì)第6、24、48、96、144、240、336、432和528小時(shí)的暴露濃度-富集量關(guān)系做線性回歸分析，見(jiàn)表1。

表1 暴露濃度-富集量線性回歸

Tab.1 Linear regression of concentration- accumulation of atrazine

時(shí)間/hTime回歸方程Linearregression相關(guān)系數(shù) R26y=2．7129x+8．09710．999624y=2．8923x+9．02790．999648y=3．4867x+14．27300．999396y=2．3873x+24．99200．9979144y=2．8085x+14．29000．9988240y=2．0223x+6．55940．9997336y=2．0565x+9．04970．9993432y=2．1955x+9．99690．9993528y=2．113x+6．01510．9998

回歸方程經(jīng)t檢驗(yàn)，相關(guān)系數(shù)R2均達(dá)到極顯著水平(P<0.01)。在同一時(shí)間點(diǎn)，隨著海水暴露濃度的增加，菲律賓蛤仔中阿特拉津的含量逐漸增加，二者呈顯著正相關(guān)關(guān)系。

分別做不同暴露濃度下菲律賓蛤仔中阿特拉津含量隨時(shí)間變化的富集濃度-時(shí)間(C-t)圖(圖1)。由圖1可見(jiàn)，在22 d的實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，菲律賓蛤仔中阿特拉津含量表現(xiàn)為先迅速升至最高值后迅速降低，而后含量維持在某一水平(5.2、30.5和420.1 μg/kg)，僅產(chǎn)生小幅波動(dòng)的變化趨勢(shì)，振幅分別為暴露濃度的0.99倍、0.79倍和0.20倍。第22天富集實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，1.0、10.0和200 μg/L 3個(gè)實(shí)驗(yàn)組菲律賓蛤仔中阿特拉津的平均含量分別為4.9、30.6和428.5 μg/kg(n=2)，為暴露濃度的4.9倍、3.1倍和2.1倍；富集最高值分別為15.4、61.5和 711 μg/kg，分別為暴露濃度的15.4倍、6.15倍和3.56倍；富集達(dá)到最大值所需時(shí)間分別為4、4和2 d。

圖1 菲律賓蛤仔中阿特拉津含量-時(shí)間曲線Fig.1 C-t curve of atrazine at various exposed concentrations in Ruditapes philippinarum(n=2)

隨著養(yǎng)殖海水中阿特拉津濃度的升高，菲律賓蛤仔的富集效率逐步下降，即暴露濃度越低，富集效率越高，相對(duì)于暴露濃度的富集量波動(dòng)越大；暴露濃度越高，富集效率越低，相對(duì)于暴露濃度的富集量波動(dòng)越不明顯。

由圖2可見(jiàn)，在1.0、10.0和200 μg/L 3個(gè)暴露濃度下，菲律賓蛤仔對(duì)阿特拉津的富集系數(shù)總體變化趨勢(shì)相同，均表現(xiàn)為先升高后下降至某一水平上下波動(dòng)。在1.0 μg/L暴露濃度下，富集系數(shù)最高值為15.4(96 h)；在10.0 μg/L暴露濃度下，富集系數(shù)最高值6.1(96 h)；在高暴露濃度(200.0 μg/L)下，富集系數(shù)最高值3.6(48 h)。富集實(shí)驗(yàn)開(kāi)始后6 h，1.0、10.0和200 μg/L暴露組的阿特拉津富集系數(shù)分別為4.8、4.2、2.8，顯示菲律賓蛤仔對(duì)阿特拉津具有快速富集效應(yīng)。每個(gè)時(shí)間點(diǎn)菲律賓蛤仔對(duì)阿特拉津的富集系數(shù)均隨暴露濃度的升高而下降，證明其富集效率與暴露濃度成反比。

圖2 菲律賓蛤仔在阿特拉津不同暴露濃度下的富集系數(shù)-時(shí)間曲線Fig.2 BCF-t curve of atrazine at various exposed concentrations in Ruditapes philippinarum(n=2)

2.2 菲律賓蛤仔對(duì)阿特拉津的消除規(guī)律

由圖3可見(jiàn)，在14 d的消除實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，1.0、10.0和200 μg/L 3個(gè)實(shí)驗(yàn)組菲律賓蛤仔中阿特拉津的含量均在極短時(shí)間(2 h)就出現(xiàn)斷崖式下降，分別達(dá)到1.4、4.0、47.2 μg/kg，暴露濃度越高下降幅度越大；在24 h時(shí)分別降至低于檢測(cè)限、2.3和13.3 μg/kg，此后下降趨緩。實(shí)驗(yàn)水體中的阿特拉津濃度始終低于檢出限(1.0 μg/kg)。3個(gè)實(shí)驗(yàn)組下降到低于檢出限的時(shí)間分別為1、4 和8 d。結(jié)果表明，菲律賓蛤仔對(duì)阿特拉津的消除效率很高，脫離暴露環(huán)境可以迅速降低菲律賓蛤仔中阿特拉津的含量。

圖3 菲律賓蛤仔中阿特拉津含量隨時(shí)間的消除變化曲線Fig.3 C-t curve of atrazine at various exposed concentrations in elimination stage

3 討論

3.1 菲律賓蛤仔對(duì)阿特拉津的富集作用

正辛醇/水分配系數(shù)(Kow)為某一化學(xué)品在正辛醇相與水相濃度之比，Pacakova等[10]采用lgKow值來(lái)估計(jì)污染物在生物體中的生物富集效果，阿特拉津 lgKow值為2.7，代表阿特拉津應(yīng)易于在生物體內(nèi)富集，與本研究結(jié)果一致。本研究數(shù)據(jù)顯示，在阿特拉津暴露濃度為1、10和200 μg/L時(shí)，菲律賓蛤仔的最大富集系數(shù)分別為15.4、6.15、3.56，與徐英江等[8]對(duì)海參的研究結(jié)果相比，相同阿特拉津暴露濃度下海參的最大富集系數(shù)分別為1.77、1.46、1.23，可見(jiàn)不同水生動(dòng)物對(duì)阿特拉津的富集能力存在著較大區(qū)別，菲律賓蛤仔對(duì)阿特拉津的富集能力明顯高于海參。

菲律賓蛤仔對(duì)阿特拉津的富集速度快，富集系數(shù)高，可能與其攝食方式有關(guān)。菲律賓蛤仔為濾食性生物，直接濾食海水中的浮游藻類為食物。浮游藻類具有巨大的總表面積、特殊胞外組分及細(xì)胞形態(tài)，對(duì)阿特拉津具有很高的富集能力[11]。藻類富集除草劑是毒物物理轉(zhuǎn)移的一個(gè)重要途徑，可通過(guò)食物鏈在高濃度水平轉(zhuǎn)移毒物，對(duì)所有的水生生物生存造成不良的影響[12-13]。通過(guò)食物鏈的傳遞，阿特拉津可在菲律賓蛤仔中快速富集，而且菲律賓蛤仔具有開(kāi)放式循環(huán)系統(tǒng)[14]，與外來(lái)物質(zhì)的接觸較為充分，因此會(huì)快速形成峰值。

富集實(shí)驗(yàn)開(kāi)始時(shí)，菲律賓蛤仔中阿特拉津含量迅速上升，達(dá)到最高值后逐漸下降，可能是由于短時(shí)間內(nèi)菲律賓蛤仔對(duì)阿特拉津的代謝效率遠(yuǎn)低于富集效率，表現(xiàn)為富集量的快速增加；隨著體內(nèi)阿特拉津含量的升高，代謝效率也不斷提高，逐漸高于富集效率，菲律賓蛤仔中阿特拉津的含量逐漸下降；隨后，由于對(duì)環(huán)境的適應(yīng)，菲律賓蛤仔對(duì)阿特拉津的富集和代謝效率達(dá)到平衡，表現(xiàn)為阿特拉津含量基本達(dá)到穩(wěn)定狀態(tài)。

3.2 菲律賓蛤仔對(duì)阿特拉津的消除能力

消除實(shí)驗(yàn)表明，阿特拉津在菲律賓蛤仔中的含量在短時(shí)間內(nèi)呈斷崖式下降，可能是由于轉(zhuǎn)移到潔凈海水中之后，菲律賓蛤仔對(duì)阿特拉津的代謝效率遠(yuǎn)高于富集效率，表現(xiàn)為其阿特拉津含量的急速下降；菲律賓蛤仔對(duì)阿特拉津的代謝效率隨著體內(nèi)阿特拉津含量的減少逐漸下降，直至降至檢出限以下。且菲律賓蛤仔中阿特拉津含量越高，完全消除需要的時(shí)間越長(zhǎng)。

2012年，日本查出從中國(guó)進(jìn)口的3 種貝類產(chǎn)品中撲草凈殘留超標(biāo)[15]，引起對(duì)海產(chǎn)貝類除草劑污染情況的重視。目前國(guó)內(nèi)外尚沒(méi)有水產(chǎn)品中阿特拉津的殘留限量規(guī)定，中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定玉米、甘蔗等食品中阿特拉津殘留限量為≤0.05 mg/kg[16]。一般情況下，菲律賓蛤仔在食用前需要在潔凈海水中24 h的凈化以排出體內(nèi)的泥沙，在此期間菲律賓蛤仔中的阿特拉津可被迅速凈化。研究發(fā)現(xiàn)萊州灣海域表層海水中阿特拉津質(zhì)量濃度為6.82～83.0 ng/L[17]，在自然狀態(tài)下，隨污染的徑流和池塘養(yǎng)殖用水排入海水中的阿特拉津，在海水的稀釋和自凈作用后濃度應(yīng)遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于人工給藥濃度1.0 μg/L。根據(jù)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)推測(cè)，在自然海區(qū)中生長(zhǎng)的菲律賓蛤仔，經(jīng)過(guò)24 h凈化后其阿特拉津含量應(yīng)該達(dá)到1 μg/kg以下，食用相對(duì)安全。

4 結(jié)論

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在1.0、10.0和200 μg/L阿特拉津暴露濃度下，菲律賓蛤仔分別在暴露后第4天、第4天和第2天對(duì)阿特拉津達(dá)到富集最大值，分別為15.4、61.5和711 μg/kg，最大富集系數(shù)分別為15.4、6.15、3.56。在各暴露濃度下，菲律賓蛤仔對(duì)阿特拉津的富集量均隨著作用時(shí)間的延長(zhǎng)而呈現(xiàn)先升高后降低的變化趨勢(shì)。菲律賓蛤仔對(duì)阿特拉津的富集能力因阿特拉津暴露濃度的不同有所差異，低暴露濃度下富集系數(shù)大，高暴露濃度下富集系數(shù)小，低暴露濃度下阿特拉津在菲律賓蛤仔中易產(chǎn)生較大程度的富集。轉(zhuǎn)移至潔凈海水后，阿特拉津在菲律賓蛤仔中的含量在短時(shí)間內(nèi)呈斷崖式下降，說(shuō)明阿特拉津在菲律賓蛤仔中能夠快速消除。

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Accumulation and elimination of atrazine in Ruditapes philippinarum

WANG Weiyun1, LIU Lijuan1*, ZHANG Huawei1, REN Lihua1, JIANG Xiangyang1, JIANG Fang1, SUN Lingyi2

( 1. Shandong Marine Resource and Environment Research Institute, Yantai, 264006, China; 2. Yantai Fisheries Research Institute, Yantai 264003, China)

Accumulation and elimination of atrazine inRuditapesphilippinarumwere studied by semi-static method. TheRuditapesphilippinarumwas exposed to water containing 1.0, 10.0 and 200 μg/L atrazine at (20±1)℃. The accumulation amounts in these clams were rised with the increase of atrazine concentrations (1.0, 10.0, 200 μg/L), presenting significantly positive correlation. Moreover, the residues of atrazine were firstly increased and then decreased. Afterwords they remained at certain concentrations (i.e.5.2, 30.5 and 420.1 μg/kg) with small fluctuations. The biggest bioconcentration factors (BCF) for the three concentrations were 15.4，6.15 and 3.56 when exposed for 4，4 and 2 d, respectively. In addition, the atrazine concentration was dropped down in elimination stage till it was not detected after 1, 4 and 8 d. These suggested thatRuditapesphilippinarumhad strong ability on rapid accumulation and elimination of atrazine. The study would provide theoretical support for the sea shellfish food safety and marine environmental protection.[Chinese Fishery Quality and Standards, 2016, 6(4):12-16]

atrazine;Ruditapesphilippinarum; accumulation; elimination

LIU Lijuan, liu_li_juan_426@aliyun.com

2015-12-19；接收日期：2016-05-21

煙臺(tái)市科技發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目( 2013NC334)；山東省現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系貝類產(chǎn)業(yè)創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)(SDAIT-19)

王瑋云( 1987-) ，女，碩士，助理研究員，研究方向?yàn)樗a(chǎn)品質(zhì)量安全檢測(cè)，wwy495278513@163.com 通信作者：劉麗娟，副研究員，研究方向?yàn)樗a(chǎn)品質(zhì)量安全檢測(cè)，liu_li_juan_426@aliyun.com

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2095-1833(2016)04-0012-05