ABTS法測定福州薯蕷的抗氧化活性研究

摘要：研究福州薯蕷（Dioscorea futschauensis）不同溶劑提取物的抗氧化活性，使用冷浸法得到福州薯蕷乙醇、丙酮和乙酸乙酯提取物，測定了3種提取物的總酚含量，并利用ABTS體系吸光度的變化研究其抗氧化能力。結(jié)果表明，乙酸乙酯提取物對ABTS·+自由基的清除效果最優(yōu)，清除率最高可達95.8%。福州薯蕷不同溶劑提取物均表現(xiàn)出很強的抗氧化能力，是一種天然抗氧化劑。

關(guān)鍵詞：福州薯蕷（Dioscorea futschauensis）；自由基；抗氧化

中圖分類號：S567.239 文獻標識碼：A 文章編號：0439-8114（2016）12-3173-03

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2016.12.043

Abstract： To study the antioxidant activity of several extracts of Dioscorea futschauensis. The ethanol， acetone and ethyl acetate extacts were obtained by cold-extraction， then the total phenolics content were determined and the antioxidant activities of them were studied employing ABTS assay. Results showed that EAE possesses the strongest scavenging activity on ABTS·+ radical，and the highest scavenging capacity reached 95.8%. All the extracts of Dioscorea futschauensis had prominent antioxidant activity， which could be employed as natural antioxidants and health care products.

Key words：Dioscorea futschauensis； free radical； antioxidant

人體內(nèi)過多自由基可能會導(dǎo)致老年癡呆等多種疾病，因此需要補充抗氧化劑來調(diào)節(jié)體內(nèi)自由基[1]。近年來，從植物中尋找天然抗氧化劑已經(jīng)成為研究的熱點[2]。福州薯蕷（Dioscorea futschauensis）是薯蕷科薯蕷屬植物纏繞草質(zhì)藤本。根狀莖橫生，不規(guī)則長圓柱形，外皮黃褐色。莖左旋，無毛。單葉互生，微革質(zhì)，莖基部葉為掌狀裂葉，大小不等，基部深心形，中部以上葉為卵狀三角形，邊緣波狀或全緣，頂端漸尖，基部深心形或廣心形，背面網(wǎng)脈明顯，兩面沿葉脈疏生白色刺毛。分布于浙江南部、福建、湖南、廣東北部、廣西全州等地區(qū)，生于海拔700 m以下的山坡灌叢和林緣、溝谷邊或路旁。有祛風、利濕的功效?？芍物L濕頑痹、腰膝疼痛、小便不利、淋濁、遺精、濕熱瘡毒[3]。福州薯蕷在民間使用非常廣泛，但其抗氧化方面的研究鮮見報道，本研究采用ABTS法對福州薯蕷不同溶劑提取物的抗氧化能力進行評估，并研究福州薯蕷不同溶劑提取物的總酚含量與其抗氧化能力的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

福州薯蕷購于廣西玉林藥材市場，沒食子酸標準品購于百靈威科技有限公司，所有試劑均為分析純。

UV1901型紫外可見分光光度計（北京普析電子科技有限公司）。

1.2 方法

1.2.1 福州薯蕷不同溶劑提取物的制備 稱取20 g福州薯蕷粉末，加入200 mL乙醇（95%），冷浸72 h，重復(fù)上述操作3次，合并提取液。旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)回收溶劑，得到福州薯蕷乙醇提取物（EE）0.9 g，得率為4.5%。同法，用丙酮及乙酸乙酯提取，得到丙酮提取物（AE）0.8 g和乙酸乙酯提取物（EAE）0.7 g，得率分別為4.0%和3.5%。

1.2.2 ABTS·+自由基清除能力測定 將2，2’-聯(lián)氨-雙（3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸）二胺鹽（ABTS）用蒸餾水配制成2 mmol/L溶液，取50 mL上述溶液與200 mL K2S2O8水溶液（70 mmol/L）混合均勻，避光放置12～16 h，得到ABTS·+ 溶液。用磷酸鹽緩沖液將ABTS·+ 溶液稀釋至吸光度為0.70。將福州薯蕷提取物用95%乙醇稀釋為7個不同濃度藥液，取一定量提取物藥液，加入1.9 mL ABTS·+ 溶液混勻，在1、3、5、10 min時測定其吸光度[4]。ABTS·+ 自由基清除率（S）計算公式如下：S=（A0-A）/A0×100%，其中A0為ABTS·+ 溶液的吸光度，A為加藥液后的吸光度。

1.2.3 總酚含量測定

1）Folin-Ciocalteu試劑的配制。稱取80 g鎢酸鈉和20 g鉬酸鈉于圓底燒瓶中，用560 mL蒸餾水溶解，加入40 mL 85%磷酸溶液和80 mL濃鹽酸，文火回流10 h，然后加入12 g硫酸鋰及60 mL雙氧水，加熱沸騰15 min至溶液呈亮黃色，冷卻，移入1 000 mL容量瓶中，用蒸餾水定容，貯于棕色瓶中。

2）總酚標準曲線的繪制。精確稱取沒食子酸標準品25 mg，用蒸餾水溶解并定容到250 mL，得到0.1 mg/mL的對照品標準溶液。精密吸取對照樣品溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL于10 mL容量瓶中，加入1 mL Folin-Ciocalteau試劑，搖勻后加入3 mL 2% Na2CO3溶液，用蒸餾水定容到10 mL，室溫下反應(yīng)2 h后在760 nm處測定吸光度，繪制標準曲線，得出回歸方程。

3）提取液中總酚含量的測定。測定各提取物溶液吸光度，多次測量求平均值。根據(jù)回歸方程計算總酚的沒食子酸當量，總酚含量以每克干物質(zhì)的沒食子酸當量（mg）表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同濃度提取物對ABTS·+自由基清除能力的影響

圖1為不同濃度福州薯蕷乙酸乙酯提取物（EAE）對ABTS·+自由基清除能力的影響。EAE和ABTS·+自由基作用時間為3 min時，濃度為0.5 mg/mL的藥液對ABTS·+自由基的清除率為50.4%，濃度上升為1.0和1.5 mg/mL時ABTS·+自由基的清除率增加為65.2%和73.7%；作用時間為5 min時，濃度為0.5 mg/mL的藥液對ABTS·+自由基的清除率為57.8%，濃度上升為1.0和1.5 mg/mL時ABTS·+自由基的清除率為70.5%和77.3%。可見，隨著濃度和時間增加，乙酸乙酯提取物對ABTS·+自由基的清除增強。

圖2為不同濃度丙酮提取物（AE）對ABTS·+自由基清除率的影響。隨著作用時間和濃度的增加，AE對ABTS·+自由基清除效果增強。作用時間為 1 min時，濃度為0.5 mg/mL的AE對ABTS·+自由基清除率為39.0%，濃度增加為0.8和1.0 mg/mL時清除率升高為43.3%和52.0%；濃度增加為1.2和1.5 mg/mL時清除率為61.3%和69.5%；當濃度增大到1.8和2.0 mg/mL時清除率為72.7%和75.1%。而對于濃度為1.8 mg/mL的AE，藥液和ABTS·+自由基作用時間為1 min時清除率為72.7%，作用時間增加為3和5 min時清除率分別為75.5%和80.2%，作用時間增加為10 min時清除率為85.6%。

2.2 不同溶劑提取物對ABTS·+自由基清除率的影響

圖3為福州薯蕷濃度為0.5、1.0、1.5和2.0 mg/mL的3種溶劑提取物在作用時間為10 min時對ABTS·+自由基清除能力的影響。AE濃度為0.5、1.0、1.5和2.0 mg/mL時對ABTS·+自由基的清除率分別為55.1%、70.0%、80.3%和88.7%。EE濃度為0.5和1.0 mg/mL時對ABTS·+自由基的清除率分別為41.1%和53.6%，濃度為1.5和2.0 mg/mL時清除率分別為68.8%和75.2%。在3種溶劑提取物中，EAE表現(xiàn)出最強的ABTS·+自由基清除率，濃度為0.5 mg/mL時對ABTS·+自由基的清除率為63.1%，濃度為1.0和1.5 mg/mL時清除率為73.9%和83.7%，在最大濃度2.0 mg/mL時清除率為95.8%。

2.3 不同溶劑提取物EC50

福州薯蕷提取物在10 min對ABTS·+自由基的EC50見表1。抗氧化劑清除ABTS·+自由基能力采用EC50表示。EC50的物理意義為當抗氧化劑對ABTS·+自由基清除率達到50%時的質(zhì)量濃度，EC50越低，抗氧化劑清除自由基的能力越強。EAE、AE和EE的EC50分別為0.16、0.35和0.62 mg/mL，EC50順序為EAEAE>EE。

2.4 不同溶劑提取物總酚含量測定結(jié)果

福州薯蕷提取物中，EAE的總酚含量最高，為43.2 mg/g。其次為EE的總酚含量，為30.1 mg/g。3種提取物均具有較高的總酚含量，說明這3種提取物優(yōu)良的ABTS·+自由基的清除能力可能與其含有的酚類物質(zhì)有關(guān)。

3 結(jié)論

采用ABTS法對福州薯蕷不同溶劑提取物的抗氧化能力進行評估，并研究福州薯蕷不同溶劑提取物的總酚含量與其抗氧化能力的關(guān)系。結(jié)果表明，不同溶劑的提取物均表現(xiàn)出較好的抗氧化性，其對ABTS·+自由基的清除率均表現(xiàn)出較高的清除能力。其中，EAE表現(xiàn)出最優(yōu)異的抗氧化性，其對ABTS·+自由基的清除率最高為95.8%。此外，福州薯蕷不同溶劑提取物對ABTS·+自由基的清除率隨藥液濃度增加而增大，同時，隨著作用時間增長，其對ABTS·+自由基的清除效果也變強。提取物均具有較高的總酚含量，表明3種提取物優(yōu)良的ABTS·+自由基的清除能力可能與其含有的酚類物質(zhì)有關(guān)。

參考文獻：

[1] KUMAR K S，GANESAN K，RAO P V S.Antioxidant potential of solvent extracts of Kappaphycus alvarezii（Doty） Doty-An edible seaweed[J].Food Chemistry，2008，107（1）：289-295.

[2] CONTINI M，BACCELLONI S，MASSANTINI R，et al. Extraction of natural antioxidants from hazelnut（Corylus avellana L.） shell and skin wastes by long maceration at room temperature[J].Food Chemistry，2008，110（3）：659-669.

[3] 中國科學(xué)院中國植物志編輯委員會.中國植物志[M].北京：科學(xué)出版社，1998.

[4] CRISTINA D A，RUFIAN-HENARES J A，MORALES F J.Assessing the antioxidant activity of melanoidins from coffee brews by different antioxidant methods[J]. J Agric Food Chem， 2005，53（20）：7832-7837.