西藏林芝地區(qū)黑木耳栽培種培養(yǎng)料的優(yōu)化

摘要：以黑木耳[Auricularia auricula （L.ex Hook.） Undeew.]菌種黑V29為試驗(yàn)材料，分別以菌絲生長(zhǎng)速率和子實(shí)體產(chǎn)量為指標(biāo)，研究了在西藏林芝地區(qū)運(yùn)用袋料地栽方式生產(chǎn)黑木耳的最佳培養(yǎng)料配方。結(jié)果表明，最佳培養(yǎng)料配方為青岡木屑76%、青稞麩皮22%、1%石膏、1%石灰、含水量62%。

關(guān)鍵詞：黑木耳[Auricularia auricula （L.ex Hook.） Undeew.]；培養(yǎng)料；優(yōu)化；林芝市

中圖分類號(hào)：S646.6+7（753LZ） 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：0439-8114（2016）12-3108-04

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2016.12.027

Abstract： Using Auricularia auricula（L.ex Hook.） Undeew. cv. Hei V29 as the experimental bacteria， taking mycelium growth rate and sporocarp yield as indicator，the best culture medium formula for cultivate black fungus through pocket material plant method in Linzhi area of Tibet was studied. The results suggest that the best medium formula is as follows， beech sawdust 76%，barley bran 22%，gypsum 1%，lime 1%，water 62%.

Key words： Auricularia auricula （L.ex Hook.） Undeew.； culture material； optimization； Linzhi city

黑木耳[Auricularia auricula（L.ex Hook.）Undeew.]又名木耳、木茸、細(xì)木耳、黑菜等[1]。在分類學(xué)上屬于真菌界（Eumycetes）、擔(dān)子菌門（Basidiomycota）、傘菌亞門（Agaricomycotina）、傘菌綱（Agaricomycetes）、木耳目（Auriculariales）、木耳科（Auriculariaceae）、木耳屬（Auricularia Bull.ex Juss.）[2-4]?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究證實(shí)，黑木耳不僅具有出色的食用價(jià)值，而且具有很高的藥用價(jià)值，其含有的木耳多糖具有抗脂質(zhì)過敏、抗凝血、降血脂、清除自由基、降血糖和抗癌等功效[3-8]。近年來，林芝市旅游業(yè)迅速發(fā)展，帶動(dòng)了當(dāng)?shù)氐暮谀径M(fèi)。為增加廣大農(nóng)牧民的收入，采取人工栽培黑木耳是使群眾快速致富的途徑之一。課題組根據(jù)林芝市特有的資源及環(huán)境條件，對(duì)黑木耳人工袋料地栽的培養(yǎng)料配方進(jìn)行了試驗(yàn)比較，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 材料

黑木耳菌種為黑V29（A. auricula cv. Hei V29），由黑龍江省科學(xué)院微生物研究所提供。黑木耳培養(yǎng)料的配方以高原地區(qū)常見的闊葉樹青岡的木屑為主要原料，輔以青稞麩皮和一定量的石灰、石膏混勻加水配置而成，之后裝入16.5 cm×33 cm的聚乙烯菌袋內(nèi)，置于高壓滅菌鍋內(nèi)114 ℃滅菌2 h[9，10]，待培養(yǎng)基冷卻至室溫后，在超凈工作臺(tái)內(nèi)接入相同量的黑木耳二級(jí)菌種，然后進(jìn)行培養(yǎng)。

1.2 操作過程

1.2.1 拌料 拌料的目的是使主料、輔料和水充分混合均勻，防止因拌料不勻造成局部水分過小或過大、碳氮比例和酸堿度失調(diào)等問題出現(xiàn)而影響菌絲生長(zhǎng)[6]。目前多采用菌棒制菌法生產(chǎn)栽培菌種，中間的接種孔只用菌種封口。拌料是否均勻可通過袋底積水來判斷，袋底積水一樣高，說明拌料均勻；水漬不一樣高，則說明拌料不均勻。

1.2.2 裝袋 袋料栽培黑木耳對(duì)裝袋的標(biāo)準(zhǔn)要求較高，培養(yǎng)料不但要裝實(shí)，更要上下松緊一致、料面平整無散料、袋料緊貼塑料袋無褶皺，這是克服袋料分離的前提條件。為保障裝袋的質(zhì)量，實(shí)際生產(chǎn)中多采用防爆裝袋機(jī)和薄菌袋來提高裝袋質(zhì)量，這是克服袋料分離較有效的方法之一。

1.2.3 封口 袋料栽培曾經(jīng)用頸圈、棉塞或無棉蓋封口，由于菌種接到培養(yǎng)料上部，菌絲由上向下長(zhǎng)，發(fā)滿菌時(shí)間一長(zhǎng)，上部菌絲老化嚴(yán)重，多數(shù)菌袋上部袋料分離，這種制菌法不適合袋料地栽模式。試驗(yàn)采用的菌棒有效克服了袋料分離的現(xiàn)象，并且提高了封口的質(zhì)量。

1.2.4 滅菌 滅菌是栽培菌袋制作過程中最重要的環(huán)節(jié)，目的是殺死培養(yǎng)料內(nèi)的微生物孢子、蟲卵，把培養(yǎng)料蒸熟，均衡培養(yǎng)料內(nèi)顆粒物的水分，溶融碳氮成分，使菌絲體更易吸收養(yǎng)分而生長(zhǎng)[7，8]。滅菌不徹底的直接后果是菌袋污染嚴(yán)重、雜菌多，變相增加了生產(chǎn)成本。

1.2.5 出鍋 三級(jí)菌種培養(yǎng)料滅菌完成后，要趁熱（菌袋溫度在55～65 ℃）將菌筐轉(zhuǎn)移到接菌室或菌種培養(yǎng)室，這樣可以利用培養(yǎng)料的余溫提高培養(yǎng)室內(nèi)的環(huán)境溫度，使熱能得到充分的利用，節(jié)約燃料成本。

1.2.6 接種 接種是在無菌條件下，將黑木耳菌種接到已經(jīng)準(zhǔn)備好的培養(yǎng)料上，并封嚴(yán)袋口，防止雜菌落到培養(yǎng)料內(nèi)。接種是與滅菌同樣的重要環(huán)節(jié)，一定要科學(xué)規(guī)范。要營(yíng)造一個(gè)較大范圍且穩(wěn)定的無菌區(qū)域；營(yíng)造無菌區(qū)不能只靠藥物消毒，消毒只能殺死部分微生物，接種的無菌區(qū)主要還是由接種設(shè)備所決定的，目前常用的接菌方式是接菌箱接菌或在培養(yǎng)室內(nèi)接菌，無論哪種接菌方式，都要使用菌室消毒王和菇友等消毒藥物對(duì)接菌空間實(shí)施消毒。

1.2.7 室內(nèi)養(yǎng)菌 室內(nèi)養(yǎng)菌過程要控制好溫度，堅(jiān)持低溫育菌。初期培養(yǎng)室內(nèi)溫度可稍微高一點(diǎn)，使菌種迅速萌發(fā)；菌絲封蓋或透袋后，降低袋溫，近似恒溫培養(yǎng)。若此時(shí)溫度高，則氣生菌絲生長(zhǎng)旺盛，培養(yǎng)料內(nèi)的菌絲生長(zhǎng)細(xì)弱，菌絲只是占領(lǐng)了培養(yǎng)料空間，并沒有將培養(yǎng)物徹底分解，而且菌絲易老化萎縮，既易造成袋料分離、又會(huì)降低產(chǎn)量；若此時(shí)溫度低，氣生菌絲弱，培養(yǎng)料內(nèi)的菌絲生長(zhǎng)旺盛，培養(yǎng)基分解徹底，雖提高產(chǎn)量，但袋料親和力差，易分離，不利于袋料地栽生產(chǎn)。相對(duì)空氣濕度要保持在65%左右，避光，每天2次通風(fēng)換氣，每次0.5 h，培養(yǎng)3～7 d開始檢查發(fā)菌情況和菌袋是否有雜菌污染，污染雜菌袋要及時(shí)剔除處理，一般40 d左右菌絲發(fā)滿菌袋。

1.3 高原袋料地栽黑木耳培養(yǎng)料配方的優(yōu)化設(shè)計(jì)

1.3.1 單因素試驗(yàn) 考慮到黑木耳栽培菌種菌絲生長(zhǎng)的實(shí)際情況，試驗(yàn)選擇黑木耳培養(yǎng)料的配方輔助原料青稞麩皮、培養(yǎng)料pH和含水量3個(gè)因素進(jìn)行單因素試驗(yàn)，具體設(shè)計(jì)見表1。由于同一溫度里培養(yǎng)菌絲生長(zhǎng)速率是衡量培養(yǎng)物優(yōu)劣的重要指標(biāo)，所以試驗(yàn)以菌絲日均生長(zhǎng)速率作為培養(yǎng)料配方的優(yōu)化評(píng)價(jià)指標(biāo)，菌絲日均生長(zhǎng)速率（mm/d）=菌絲滿管總長(zhǎng)度（mm）/菌絲滿管時(shí)間（d）。① 青稞麩皮最適添加量選擇試驗(yàn)。為研究青稞麩皮對(duì)黑木耳栽培菌種菌絲生長(zhǎng)的影響，試驗(yàn)采用了5%（體積分?jǐn)?shù)，后同）、10%、15%、20%、25%、30%、35%和40%8個(gè)不同比例的青稞麩皮添加量，在pH為6.5、含水量為65%（質(zhì)量分?jǐn)?shù)）、培養(yǎng)溫度20 ℃的條件下進(jìn)行試驗(yàn)。每個(gè)青稞麩皮添加量的樣本為10袋，重復(fù)3次，最后取菌絲日均生長(zhǎng)速率的平均值統(tǒng)計(jì)分析。②培養(yǎng)料pH最適范圍選擇試驗(yàn)。為研究培養(yǎng)料酸堿度對(duì)黑木耳栽培菌種菌絲生長(zhǎng)的影響，試驗(yàn)用石灰和石膏將培養(yǎng)料的pH分別調(diào)為5.5、6.0、6.5、7.0、7.5和8.0計(jì)6個(gè)梯度，在青稞麩皮添加量15%和含水量65%、培養(yǎng)溫度20 ℃的條件下進(jìn)行試驗(yàn)。每個(gè)pH梯度的樣本為10袋，重復(fù)3次，最后取菌絲日均生長(zhǎng)速率的平均值統(tǒng)計(jì)分析。③最適水分添加量選擇試驗(yàn)。為研究含水量對(duì)黑木耳栽培菌種菌絲生長(zhǎng)率的影響，試驗(yàn)設(shè)置了50%（質(zhì)量分?jǐn)?shù)，后同）、55%、60%、65%和70% 5個(gè)水分梯度，在培養(yǎng)料pH為6.5、青稞麩皮麩添加量為15%、培養(yǎng)溫度20 ℃的條件下進(jìn)行試驗(yàn)。每個(gè)水分梯度的樣本為10袋，重復(fù)3次，最后取菌絲日均生長(zhǎng)速率的平均值統(tǒng)計(jì)分析。

1.3.2 正交試驗(yàn) 為了尋求在實(shí)際生產(chǎn)中菌絲的最佳生長(zhǎng)條件，選擇青稞麩皮添加量、培養(yǎng)料含水量、pH為因素，同時(shí)根據(jù)每個(gè)單因素試驗(yàn)結(jié)果分別劃定5個(gè)水平，以菌絲生長(zhǎng)速率作為評(píng)價(jià)指標(biāo)，設(shè)計(jì)L25（53）的正交試驗(yàn)，具體設(shè)計(jì)見表2。每個(gè)組合10袋，重復(fù)3次，結(jié)果取均值統(tǒng)計(jì)分析。

1.3.3 菌絲生長(zhǎng)速率驗(yàn)證試驗(yàn) 對(duì)正交試驗(yàn)得到的由極差和各因素的均值比較出的最佳培養(yǎng)料配方進(jìn)行驗(yàn)證，每個(gè)組合10袋，重復(fù)3次，結(jié)果取均值統(tǒng)計(jì)分析，以進(jìn)一步確認(rèn)試驗(yàn)的可靠性。

1.3.4 產(chǎn)量驗(yàn)證試驗(yàn) 室內(nèi)養(yǎng)菌結(jié)束后，對(duì)各個(gè)菌絲生長(zhǎng)發(fā)育良好的黑木耳培養(yǎng)料配方進(jìn)行產(chǎn)量驗(yàn)證試驗(yàn)，每個(gè)培養(yǎng)料配方分別做600袋，置于同一地塊進(jìn)行出耳管理，最后計(jì)算每種培養(yǎng)料的平均干耳產(chǎn)量。

1.4 數(shù)據(jù)處理

試驗(yàn)所得數(shù)據(jù)采用Microsoft Office Excel 2003和SPSS 9.1軟件處理、作圖、制表，應(yīng)用鄧肯氏新復(fù)極差檢驗(yàn)法（Duncan's new multiple range test，DMRT）進(jìn)行差異顯著性檢驗(yàn)。

2 結(jié)果與分析

2.1 培養(yǎng)料中青稞麩皮添加量對(duì)黑木耳菌絲生長(zhǎng)速率的影響

青稞麩皮添加量對(duì)黑木耳菌絲生長(zhǎng)速率的影響情況見圖1。由圖1可知，伴隨著青稞麩皮添加量的增加，黑木耳栽培菌種菌絲生長(zhǎng)速率呈現(xiàn)先加快后減慢的變化趨勢(shì)，在青稞麩皮添加量為20%時(shí)，菌絲生長(zhǎng)速率達(dá)到最高，為3.01 mm/d。因此，試驗(yàn)里黑木耳培養(yǎng)料中青稞麩皮最佳添加量在20%左右。

2.2 培養(yǎng)料pH對(duì)黑木耳菌絲生長(zhǎng)速率的影響

培養(yǎng)料pH對(duì)黑木耳菌絲生長(zhǎng)速率的影響情況見圖2。由圖2可知，伴隨著培養(yǎng)料pH的提高，黑木耳栽培菌種菌絲生長(zhǎng)速率呈現(xiàn)先加快后減慢的變化趨勢(shì)，在培養(yǎng)料pH為6.5時(shí)，菌絲的生長(zhǎng)速率達(dá)到最高，為2.95 mm/d。因此，試驗(yàn)里黑木耳培養(yǎng)料中最適宜栽培菌種菌絲生長(zhǎng)的pH在6.5左右。

2.3 培養(yǎng)料中含水量對(duì)黑木耳菌絲生長(zhǎng)速率的影響

培養(yǎng)料含水量對(duì)黑木耳菌絲生長(zhǎng)速率的影響情況見圖3。由圖3可知，伴隨著培養(yǎng)料含水量的增加，黑木耳栽培菌種菌絲生長(zhǎng)的速率呈現(xiàn)先加快后減慢的變化趨勢(shì)，在培養(yǎng)料含水量達(dá)到65%時(shí)，菌絲的生長(zhǎng)速率達(dá)到最高，為3.46 mm/d。因此，試驗(yàn)里黑木耳培養(yǎng)料中最佳含水量在65%左右。

2.4 正交試驗(yàn)結(jié)果分析

培養(yǎng)料里青稞麩皮添加量、含水量、pH 3個(gè)因素5個(gè)水平的L25（53）正交試驗(yàn)結(jié)果見表3。由表3的極差可知，其影響黑木耳菌絲生長(zhǎng)速率的因素作用大小排序依次是青稞麩皮添加量（A）、培養(yǎng)料含水量（C）、培養(yǎng)料pH（B）；根據(jù)各因素的均值可知最佳組合為A4B2C4，即培養(yǎng)料里青稞麩皮加入量占干料的22%、培養(yǎng)料含水量占總質(zhì)量的62%、培養(yǎng)料pH為6.3時(shí)菌絲生長(zhǎng)最快（控制培養(yǎng)料在pH 6.3左右需加入占干料體積分?jǐn)?shù)1%的石灰和1%的石膏）。而在所有25個(gè)組合中，以A4B2C5組合的菌絲生長(zhǎng)速率最快，達(dá)到3.67 mm/d。

2.5 菌絲生長(zhǎng)速率驗(yàn)證試驗(yàn)

為驗(yàn)證正交試驗(yàn)結(jié)果，將最佳組合A4B2C4與A4B2C5進(jìn)行黑木耳菌絲生長(zhǎng)速率比較，結(jié)果見表4。由表4可知，正交試驗(yàn)得到的最佳組合A4B2C5菌絲生長(zhǎng)速率極顯著快于A4B2C4組合，從而證實(shí)A4B2C5為黑木耳菌絲生長(zhǎng)速率最佳組合真實(shí)可信。

2.6 產(chǎn)量驗(yàn)證

從L25（53）正交試驗(yàn)結(jié)果里選擇黑木耳菌絲生長(zhǎng)速率在3.30 mm/d左右及以上的配方組合8個(gè)，包括A2B3C4、A3B2C4、A3B3C5、A4B1C4、A4B2C5、A5B4C3、A4B5C3、A5B5C4，接種黑V29后，在同一地塊進(jìn)行出耳培養(yǎng)，最后計(jì)算每種培養(yǎng)料組合的平均干耳產(chǎn)量，結(jié)果見表5。分析表5可知，A4B2C5、A4B1C4、A5B5C4、A3B2C4培養(yǎng)料組合的黑木耳產(chǎn)量位于前4位，而且4個(gè)培養(yǎng)料配方間的產(chǎn)量差異不顯著（P>0.05），但與其他3個(gè)（后3位）配方組合間差異極顯著（P<0.01）。由此確認(rèn)該4個(gè)培養(yǎng)料組合的子實(shí)體產(chǎn)量占優(yōu)，其中產(chǎn)量最高的配方組合是A4B2C5，也就是培養(yǎng)料配方的輔助原料青稞麩皮占總料用量的22%（體積分?jǐn)?shù)）、石膏占總料用量的1%（體積分?jǐn)?shù)）、石灰占總料用量的1%（體積分?jǐn)?shù)），含水量占總料重量的62%（質(zhì)量分?jǐn)?shù)）。

3 討論

綜合黑木耳菌絲生長(zhǎng)及子實(shí)體產(chǎn)量，可確定A4B2C5組合為最佳的培養(yǎng)料配方，即總料用量里青岡木屑占76%（體積分?jǐn)?shù)）、青稞麩皮占22%（體積分?jǐn)?shù)）、石膏占1%（體積分?jǐn)?shù)）、石灰占1%（體積分?jǐn)?shù)），含水量控制在62%（質(zhì)量分?jǐn)?shù)）。

林芝市由于特殊的地理及資源條件，無法將內(nèi)地的袋料栽培黑木耳模式完全照搬過來，試驗(yàn)以西藏獨(dú)特的原料青稞麩皮、青岡木屑為黑木耳地栽的培養(yǎng)料，篩選了袋料地栽黑木耳的配方，為林芝市日后發(fā)展黑木耳產(chǎn)業(yè)打下了堅(jiān)實(shí)基礎(chǔ)。

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