竹醋液防治甜瓜細(xì)菌性果斑病藥效試驗(yàn)

徐巖巖，彭艷芳，于文青，張溫典，崔文杰，李 潔

（河北民族師范學(xué)院生物系，河北 承德 067000）

XU Yan-yan，PENG Yan-fang，YU Wen-qing，ZHANG Wen-dian，CUI Wen-jie，LI Jie*（Department of Biology, Hebei Normal University for Nationalities, Chengde 067000, China）

竹醋液防治甜瓜細(xì)菌性果斑病藥效試驗(yàn)

徐巖巖，彭艷芳，于文青，張溫典，崔文杰，李 潔

（河北民族師范學(xué)院生物系，河北 承德 067000）

采用抑菌圈法測(cè)定竹醋液原液，50%、20%、12.5%、10%體積濃度竹醋液，無(wú)菌水和鏈霉素0.5 mg/mL作對(duì)照，對(duì)甜瓜（Cucumis melo var. melo）細(xì)菌性果斑病菌進(jìn)行藥效試驗(yàn)。結(jié)果表明：竹醋液濃度越高，抑菌圈越大，其中以竹醋液原液抑菌效果最佳，其抑菌圈直徑可達(dá)35.17 mm，50%竹醋液與0.5 mg/mL鏈霉素抑菌效果相當(dāng)，10%竹醋液抑菌圈直徑最小，為9.13 mm；12.5%竹醋液與硫酸鏈霉素0.5 mg/mL浸種過(guò)的甜瓜種子出芽率和出苗率均較高，且二者效果相當(dāng)；竹醋液（20%、12.5%）與0.5 mg/mL硫酸鏈霉素浸種的幼苗長(zhǎng)勢(shì)優(yōu)且二者相當(dāng)，但竹醋液處理組幼苗更為矮壯，尤其竹醋液12.5%處理組效果最佳，其平均干物質(zhì)重量可達(dá)0.112 g。

甜瓜；細(xì)菌性果斑??；抑菌圈法；竹醋液

甜瓜（Cucumis melo var. melo），又稱香瓜，清涼爽口，汁多味甜，深受廣大消費(fèi)者的喜愛。近年來(lái)甜瓜細(xì)菌性果斑病的發(fā)生對(duì)甜瓜種植產(chǎn)生了嚴(yán)重的影響，該病在海南、山東、內(nèi)蒙古、陜西、河南、吉林、甘肅、廣西、福建等省、自治區(qū)都有不同程度的發(fā)生和危害。

細(xì)菌性果斑病又稱細(xì)菌性果腐病，是由燕麥?zhǔn)乘峋鞴蟻喎N（Acidovorax avenae subsp. citrulli）引起的細(xì)菌性病害，是近年由國(guó)外傳入我國(guó)的一種毀滅性病害，該病原細(xì)菌是國(guó)際檢疫性病原細(xì)菌之一。該病主要侵染葫蘆科植物[1～2]，通過(guò)嫁接、農(nóng)事操作、灌溉等傳播，但種子帶菌是該病流行發(fā)展的主要原因。高溫、高濕是甜瓜細(xì)菌性果斑病發(fā)病的主要條件。由于其可通過(guò)種子進(jìn)行傳播，所以蔓延的速度很快，近幾年該病已對(duì)我國(guó)甜瓜產(chǎn)業(yè)造成了很大的威脅，這也引起了國(guó)內(nèi)外學(xué)者的注意。

目前還沒有培育出有效的商業(yè)化抗病品種，只存在具有一定程度耐病性的品種，生產(chǎn)上防治細(xì)菌性果斑病的藥劑多以抗生素類及銅制劑為主，這些藥劑在實(shí)際應(yīng)用中導(dǎo)致有害生物抗藥性的產(chǎn)生、殘留毒性以及環(huán)境污染等問(wèn)題[3～4]。因此篩選高效、低毒、綠色環(huán)保、特異性強(qiáng)的藥劑是生產(chǎn)健康綠色食品的最佳措施之一。

竹醋液是竹炭燒制過(guò)程中的副產(chǎn)品，具有殺菌[5]、殺蟲、保鮮除臭、無(wú)毒副作用等諸多優(yōu)異的特性[6]，本次研究采用抑菌圈法，通過(guò)測(cè)定不同濃度竹醋液對(duì)甜瓜細(xì)菌性果斑病菌抑菌圈的大小，以及盆栽防效試驗(yàn)，篩選出有效安全的防治濃度。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 供試病原菌與甜瓜品種 供試病原菌：甜瓜細(xì)菌性果腐病菌來(lái)源于河北民族師范學(xué)院山杏優(yōu)良品種繁育及產(chǎn)品開發(fā)工程技術(shù)研究中心。供試品種：超甜八里香，來(lái)源于河北省泊頭市永紅種子有限公司。

1.1.2 供試培養(yǎng)基 LB固體培養(yǎng)基：胰蛋白胨10 g，酵母提取物5 g，NaCl 10 g，蒸餾水1 000 mL、pH 7.0，瓊脂 18 g，用于培養(yǎng)細(xì)菌，每瓶100 mL。

LB液體培養(yǎng)基：胰蛋白胨10 g，酵母提取物5 g，NaCl 10 g，蒸餾水1 000 mL、pH 7.0，用于培養(yǎng)細(xì)菌，每瓶100 mL。

1.1.3 供試藥劑 硫酸鏈霉素可溶性粉劑（streptomycin，效價(jià)1 000 U/ mg），江西博萊大藥廠產(chǎn)品；竹醋液，江陰中炬生物技術(shù)有限公司提供。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 抑菌圈法室內(nèi)抑菌效果的測(cè)定 挑取單個(gè)致病菌菌株，接種在LB培養(yǎng)液中170 r/min振蕩培養(yǎng)36 h，無(wú)菌水配制成濃度為1×108個(gè)/mL的菌懸液。取100mL LB固體培養(yǎng)基微波爐溶化后，待溫度降至65℃時(shí)，倒到培養(yǎng)皿上，每皿10 m L，冷卻，每瓶可倒10皿。將100 μL稀釋好的病菌菌懸液加到冷卻好的培養(yǎng)基上，涂布均勻，晾干，打孔8 mm×8 mm，每皿1個(gè)孔。用移液槍各取100 μL梯度稀釋的藥劑（竹醋液原液，50%、20%、12.5%、10%濃度竹醋液）滴入每孔中，設(shè)置無(wú)菌水作對(duì)照（CK）（100 μL），鏈霉素（0.5 mg/mL）（100 μL）處理為另一對(duì)照，一共7個(gè)處理，每個(gè)處理3皿，共21皿。37℃黑暗培養(yǎng)2 d，每隔24 h調(diào)查1次，采用十字交叉法測(cè)定抑菌圈直徑大小。

1.2.2 盆栽防效測(cè)定 將甜瓜種子于1×108個(gè)/mL的菌懸液中過(guò)夜，自然晾干，然后于55 ℃溫水中浸泡30 min，再將其放于不同濃度的處理中浸種40 min，無(wú)菌水和鏈霉素作對(duì)照。經(jīng)浸種的甜瓜種子放于無(wú)菌水中清洗去除表面殘留藥劑，然后置于有濕潤(rùn)紗布的培養(yǎng)皿中，于25℃條件下催芽，待胚根長(zhǎng)至2 mm時(shí)統(tǒng)計(jì)發(fā)芽率（發(fā)芽種子數(shù)與催芽種子總數(shù)的百分比）。然后將經(jīng)浸種后催芽的甜瓜種子播種于裝有營(yíng)養(yǎng)土的缽（6 cm×6 cm）中，置于25℃、12 h光照/黑暗的培養(yǎng)室中培養(yǎng)，每個(gè)處理50缽，4個(gè)處理共200缽。幼苗出土后統(tǒng)計(jì)出苗率（出苗數(shù)與播種種子總數(shù)的百分比）。待幼苗長(zhǎng)至5葉1心期時(shí)測(cè)定全部植株的真葉葉片直徑、莖粗、株高、干重量。

1.2.3 數(shù)據(jù)處理與分析 數(shù)據(jù)處理采用SPSS 19.0軟件，進(jìn)行一元方差與多重比較分析各處理之間的差異顯著性。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同濃度竹醋液室內(nèi)毒力試驗(yàn)

由表 1可知，竹醋液不同濃度處理間的抑菌效果差異顯著（p＜0.05），其中以竹醋液原液抑菌效果最佳，其抑菌圈直徑可達(dá)35.17 mm，50%竹醋液與0.5 mg/mL鏈霉素的抑菌效果相當(dāng)，10%竹醋液抑菌圈直徑最小，為9.13 mm。這說(shuō)明在藥劑的有效使用范圍內(nèi)，竹醋液濃度越高，抑菌圈越大。

2.2 不同濃度竹醋液對(duì)甜瓜種子出芽率及出苗率的影響

竹醋液原液與50%濃度抑菌效果最佳，但濃度太高，有燒苗現(xiàn)象；10%竹醋液濃度抑菌圈抑菌效果較差，因此選取了12.5%和20%竹醋液濃度進(jìn)行出芽和盆栽實(shí)驗(yàn)。由表2可知，竹醋液不同濃度處理對(duì)甜瓜種子出芽率有顯著影響（p＜0.05）?？瞻讓?duì)照因?yàn)槿揪鲅柯逝c出苗率最低，12.5%竹醋液與硫酸鏈霉素0.5 mg/mL處理的甜瓜種子出芽率和出苗率相當(dāng)，20%竹醋液濃度較高，浸種后對(duì)甜瓜種子的出芽與出苗有一定的抑制作用。

表1 不同濃度竹醋液對(duì)甜瓜細(xì)菌性果斑病菌的抑菌圈直徑的影響Table 1 Effect of different concentrations of bamboo vinegar on diameter of inhibition zone of A. avenae

2.3 不同濃度竹醋液對(duì)甜瓜幼苗質(zhì)量的影響

由表3可知，不同處理浸種的幼苗，其真葉的平

均葉面積、平均株高、平均干重在不同處理間差異顯

著（P＜0.05）。竹醋液（20%、12.5%）浸種的幼苗長(zhǎng)

勢(shì)顯著優(yōu)于空白對(duì)照，與0.5 mg/mL硫酸鏈霉素處理

相當(dāng)，但竹醋液處理組幼苗更為矮壯，其中竹醋液

12.5%處理組效果最佳，其平均干物質(zhì)重量可達(dá)0.112 g。

表2 不同濃度竹醋液對(duì)甜瓜種子出芽及出苗的影響Table 2 Effect of different concentrations of bamboo vinegar treated seed on germination and emergence rate

表3 不同濃度竹醋液對(duì)甜瓜幼苗質(zhì)量的影響Table 3 Effect of different concentrations of bamboo vinegar treated seed on seedling quality

3 結(jié)論與討論

近年來(lái)開發(fā)低毒、低殘留、對(duì)環(huán)境影響小的天然源農(nóng)藥，逐漸成為植物病害防治的熱點(diǎn)。竹醋液是竹材熱解得到的液體產(chǎn)物，主要成分是水、有機(jī)酸、酚類、酮類、醇類等物質(zhì)。竹醋液是純天然產(chǎn)物，是一種綠色環(huán)保產(chǎn)品，并具有廣譜抗菌性，在醫(yī)藥、化工、農(nóng)業(yè)、環(huán)保等領(lǐng)域有著非常廣泛的用途[7]。本試驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)竹醋液對(duì)甜瓜細(xì)菌性果斑病菌有一定的抑制作用，尤其是經(jīng) 12.5%的竹醋液浸種后的甜瓜幼苗長(zhǎng)勢(shì)佳，植株矮壯。但較高濃度的竹醋液會(huì)對(duì)幼苗產(chǎn)生藥害，所以在田間施用過(guò)程中，應(yīng)嚴(yán)格控制浸種的濃度和時(shí)間，也為竹醋液進(jìn)一步的在植物病害防治方式的研究以及田間試驗(yàn)奠定了基礎(chǔ)。

在大力提倡健康食品的現(xiàn)代，作為一種新型天然原材料的竹醋液的推廣應(yīng)用將有效減少農(nóng)藥用量，緩解有害生物的抗藥性，并可減輕農(nóng)藥對(duì)環(huán)境的毒性壓力，有力地促進(jìn)我國(guó)無(wú)公害、綠色及有機(jī)農(nóng)業(yè)的發(fā)展。

[1] 王雪，高潔，張靜，等. 63種殺菌劑對(duì)西瓜、甜瓜細(xì)菌性果斑病菌的室內(nèi)毒力測(cè)定[J]. 吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2012，34（6）：612-617，623.

[2] 趙廷昌，孫福在，王兵萬(wàn). 哈密瓜細(xì)菌性果腐病病原菌鑒定[J]. 植物病理學(xué)報(bào)，2001，31（4）∶ 357-364.

[3] 李國(guó)英，任毓忠，張昕，等. 甜瓜細(xì)菌性病害藥劑防治試驗(yàn)[J]. 中國(guó)西瓜甜瓜，2003（3）：12-14.

[4] 胡俊，黃俊霞，劉雙平，等. 內(nèi)蒙古哈密瓜細(xì)菌性果斑病的發(fā)生特點(diǎn)與防治技術(shù)[J]. 中國(guó)植保導(dǎo)刊，2006，26（12）：19-20.

[5] 王文橋，許曉梅，劉金朵，等. 竹醋液對(duì)幾種植物病原真菌的抑制活性[J]. 植物病理學(xué)報(bào)，2005，35（6）：99-104.

[6] 鄔國(guó)勝，李敏，應(yīng)國(guó)清.竹醋液抑菌活性及其穩(wěn)定性研究[J]. 浙江工業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2011，39（1）：44-46，66.

[7] 倪春耕. 竹醋液抑菌活性及應(yīng)用技術(shù)研究[D]. 合肥，安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)，2006.

Experiment on Effect of Bamboo Vinegar on Bacterial Fruit Blotch

Bacteriostasis circle trials were conducted on different concentrations (100%, 50%, 20%, 12.5% and 10%) of bamboo vinegar on bacterial fruit blotch by Acidovorax avenae subsp. citrulli of Cucumis melo var. melo with sterile water and 0.5mg/mL of streptomycin as control. The results showed that concentration of bamboo vinegar had positive effect on inhibition zone diameter. It had 35.17mm inhibition zone of 100% of bamboo vinegar, 9.13mm of 10%. Infected C. melo var. meloboo seeds soaking b y 20% and 12.5% of ba mboo vinegar and control demonstrated that germination rate of the later one was better, the same as the control(0.5mg/mL of streptomycin). Seeds treated by 12.5% bamboo vinegar had the best seedling growth.

Cucumis melo var. melo; bacterial fruit blotch; inhibition zone; bamboo vinegar

S652；S463.5

：A

1001-3776（2016）03-0065-03

XU Yan-yan，PENG Yan-fang，YU Wen-qing，ZHANG Wen-dian，CUI Wen-jie，LI Jie*
（Department of Biology, Hebei Normal University for Nationalities, Chengde 067000, China）

2015-12-19；

：2016-03-20

河北省科技廳資助項(xiàng)目（13226511）；承德市財(cái)政局資助項(xiàng)目（CZ2013007）；承德市科技局資助項(xiàng)目（20157029）

徐巖巖（1985－），女，山東聊城人，講師，研究方向?yàn)檗r(nóng)業(yè)微生物學(xué)；*通訊作者。