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    細(xì)胞培養(yǎng)在生物制藥領(lǐng)域的應(yīng)用

    2016-12-28 17:30:44姜萌季曉宇羅來(lái)鵬侯毅鞠
    中國(guó)科技縱橫 2016年20期
    關(guān)鍵詞:生物制藥細(xì)胞培養(yǎng)應(yīng)用

    姜萌++季曉宇++羅來(lái)鵬++侯毅鞠

    【摘 要】經(jīng)過(guò)長(zhǎng)時(shí)間的研究與實(shí)踐,細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)已經(jīng)得到了充分的發(fā)展與完善,離體培養(yǎng)的動(dòng)物細(xì)胞具有可以人為控制的培養(yǎng)條件且結(jié)果便于觀察的特點(diǎn),因而被廣泛應(yīng)用于生物制藥領(lǐng)域中并對(duì)該領(lǐng)域產(chǎn)生了巨大而深遠(yuǎn)的影響。本文對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)在疫苗生產(chǎn)、單克隆抗體制備、藥物篩選、基因重組產(chǎn)品等生物制藥領(lǐng)域的應(yīng)用作一綜述。

    【關(guān)鍵詞】細(xì)胞培養(yǎng) 生物制藥 應(yīng)用

    隨著生命科學(xué)理論和技術(shù)的飛速發(fā)展,細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的地位和作用日益成熟,動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的研究取得了可觀的效果,并且有著無(wú)限的應(yīng)用發(fā)展前景。主要的發(fā)展目標(biāo)包括:開發(fā)生長(zhǎng)密度高、目標(biāo)產(chǎn)品分泌量大的細(xì)胞系;研制性能優(yōu)良、吸附與解離容易、重復(fù)利用的微載體;開展規(guī)模化的生物反應(yīng)器、檢測(cè)系統(tǒng)、細(xì)胞培養(yǎng)與產(chǎn)物分離耦合系統(tǒng)等;設(shè)計(jì)新型培養(yǎng)基促進(jìn)生物制品安全;研究三維細(xì)胞的培養(yǎng)條件[1]。

    生物制藥即運(yùn)用生物化學(xué)、醫(yī)學(xué)、微生物學(xué)等原理和方法,利用生物機(jī)體、組織、細(xì)胞、體液等生產(chǎn)具有預(yù)防、診斷和治療功能的藥物制品。有關(guān)研究者采用基因重組技術(shù)或其他創(chuàng)新生物技術(shù)生產(chǎn)治療性藥物,主要產(chǎn)品有基因工程藥物、抗體工程藥物、疫苗等幾類。這些產(chǎn)品的開發(fā)研制及生產(chǎn)過(guò)程都離不開細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)。

    1 疫苗生產(chǎn)

    疫苗免疫是最有效的預(yù)防感染性疾病的措施之一。疫苗免疫是指利用病毒性制劑、細(xì)菌性制劑及類毒素等人工主動(dòng)免疫制劑,通過(guò)作用于機(jī)體的免疫防御系統(tǒng)起到免疫應(yīng)答作用。傳統(tǒng)的流感疫苗生產(chǎn)多采用雞胚培養(yǎng),但當(dāng)面臨高致病性流感全球大流行、微生物感染、內(nèi)毒素殘余量多等問(wèn)題時(shí),傳統(tǒng)的雞胚生產(chǎn)方法可能難以滿足疫苗市場(chǎng)的需求。隨著細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的完善及其優(yōu)點(diǎn)的體現(xiàn)積極推進(jìn)使用細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)替代雞胚培養(yǎng)技術(shù)生產(chǎn)流感疫苗,未來(lái)將會(huì)越來(lái)越多依靠細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)獲得理想的疫苗。與此同時(shí)也存在一些缺陷,尤其是哺乳動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的病毒疫苗特別適合于工業(yè)的發(fā)展,應(yīng)用微載體大規(guī)模培養(yǎng)細(xì)胞生產(chǎn)流感疫苗,使得流感病毒適應(yīng)傳代細(xì)胞(如VERO細(xì)胞),該細(xì)胞不僅培養(yǎng)條件要求不高而且遺傳性狀穩(wěn)定,對(duì)多種病毒的感染敏感[2],如利用生物反應(yīng)器大規(guī)模進(jìn)行病毒繁殖,可實(shí)現(xiàn)流感疫苗的規(guī)?;a(chǎn)。MDCK細(xì)胞系是被公認(rèn)為最適于生產(chǎn)甲、乙型流感病毒疫苗的細(xì)胞系,對(duì)流感病毒增殖快、感染效率高,且不易變異[3]。其中典型代表,如巴斯德公司利用1000L反應(yīng)器微載體培養(yǎng)Vero細(xì)胞生產(chǎn)人用狂犬病疫苗和脊髓灰質(zhì)炎疫苗。由此可見(jiàn),利用細(xì)胞培養(yǎng)疫苗已成為目前疫苗研制的重要應(yīng)用方向。

    2 單克隆抗體制備

    單克隆抗體是由單一B淋巴細(xì)胞克隆產(chǎn)生的高度均一、僅針對(duì)某一特定抗原表位的抗體。研究Hb在帕金森病中的發(fā)病機(jī)制,李旭穎等[4]制備抗Hb單克隆抗體,由重組人Hb作為抗原免疫小鼠,并將其細(xì)胞融合及細(xì)胞培養(yǎng)制備成雜交瘤,經(jīng)過(guò)篩選獲得抗人Hb單克隆抗體雜交瘤株,體內(nèi)誘生法制備腹水經(jīng)過(guò)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)等方法進(jìn)而獲得特異性抗Hb單克隆抗體。張培等[5]制備乙型腦炎病毒的單克隆抗體通過(guò)動(dòng)物免疫、細(xì)胞融合、克隆和篩選等方法,應(yīng)用ELISA等免疫學(xué)方法進(jìn)行特異性和亞型的鑒定,為快速檢測(cè)方法的建立奠定了基礎(chǔ)。單克隆抗體藥物研發(fā)已經(jīng)被列入863計(jì)劃和國(guó)家重點(diǎn)項(xiàng)目,國(guó)內(nèi)已經(jīng)有2個(gè)治療性單抗產(chǎn)品準(zhǔn)備生產(chǎn),3個(gè)治療性產(chǎn)品處于臨床試驗(yàn)階段,多個(gè)抗體藥物處于臨床研究階段,已經(jīng)批準(zhǔn)的治療性單抗有31個(gè),目前國(guó)內(nèi)正在進(jìn)行臨床前研究的抗體藥物有:抗CEA嵌合抗體;抗破傷風(fēng)抗體及抗乙型腦炎等[6]。

    3 藥物篩選

    藥物篩選是從天然或合成的化合物中篩選出高效的新藥或先導(dǎo)化合物。生物活性和藥理作用檢測(cè)所篩選出的高效的新藥或先導(dǎo)化合物,并根據(jù)檢測(cè)結(jié)果評(píng)價(jià)某一物質(zhì)的藥用前景,是新藥研究的最初過(guò)程和關(guān)鍵步驟。體外二維和應(yīng)用球狀聚集體、細(xì)胞片層、脫細(xì)胞基質(zhì)進(jìn)行三維培養(yǎng)肝細(xì)胞的具體技術(shù)是進(jìn)行藥物毒性檢測(cè)的重要途徑[7]。Kostadinava等建立了一種長(zhǎng)時(shí)間的三維肝細(xì)胞共培養(yǎng)體系,比單層培養(yǎng)肝細(xì)胞能更好地檢測(cè)體內(nèi)藥物導(dǎo)致的毒性。細(xì)胞水平的藥物篩選更接近人體生理狀態(tài),外界環(huán)境干擾少,準(zhǔn)確率高,是細(xì)胞水平藥物篩選模型的核心技術(shù)高內(nèi)涵篩選。高內(nèi)涵藥物篩選主要在微陣列多孔板上完成,通過(guò)在微孔板上進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng),施加藥物刺激進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作和數(shù)據(jù)的采集和分析。HCS技術(shù)可完成各種對(duì)于細(xì)胞生理現(xiàn)象本質(zhì)的研究,Talyor等[8]提出高內(nèi)涵概念,HCS模型主要建立在細(xì)胞水平,通過(guò)觀察樣品對(duì)固定或動(dòng)態(tài)細(xì)胞的多個(gè)功能的作用,涉及各種不同的靶點(diǎn),從多個(gè)角度分析樣品的作用,最終確定樣品的活性和可能的毒性。近年來(lái)發(fā)展起來(lái)的微流控芯片技術(shù)有可能成為細(xì)胞水平藥物篩選的理想選擇。Ye等[9]構(gòu)建了一套用于細(xì)胞水平藥物篩選研究的集成化微流控芯片系統(tǒng),它可以將細(xì)胞種植、培養(yǎng)、標(biāo)記、加藥、梯度稀釋等操作通過(guò)微通道網(wǎng)絡(luò)流體控制技術(shù)集成到一張芯片完成,保持了細(xì)胞結(jié)構(gòu)的完整性,可全面記錄細(xì)胞對(duì)藥物刺激的各種反應(yīng)。

    4 基因重組產(chǎn)品

    基因工程藥物是將人某一部位的基因,注入到質(zhì)粒中,然后導(dǎo)入工程菌或工程細(xì)胞中,經(jīng)細(xì)胞培養(yǎng)或細(xì)菌培養(yǎng),充分表達(dá)擴(kuò)增后,分離,純化而得?;蛑亟M產(chǎn)品與天然型的生物學(xué)活性一致,其結(jié)構(gòu)分為兩種,一種與天然型的一樣;另一種稍有區(qū)別,如人白細(xì)胞介素是糖蛋白質(zhì),但糖鏈的有無(wú)對(duì)其機(jī)能無(wú)影響,故重組的不含糖鏈。哺乳動(dòng)物細(xì)胞已成為生物制藥最重要的表達(dá)或生產(chǎn)系統(tǒng),F(xiàn)DA(美國(guó)食品藥品管理局)在2000年以后批準(zhǔn)的創(chuàng)新生物技術(shù)藥物,用酵母表達(dá)的有2種,用大腸桿菌表達(dá)的產(chǎn)品只有4種,而通過(guò)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)生產(chǎn)的生物技術(shù)產(chǎn)品則有22種,除兩種組織工程產(chǎn)品外,其余都是蛋白類產(chǎn)品,這些蛋白都是分子量大、二硫鍵多、空間結(jié)構(gòu)復(fù)雜的糖蛋白,只有使用CHO等哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng),這些蛋白的生產(chǎn)才成為可能。建立CHO細(xì)胞表達(dá)的重組人白細(xì)胞介素-12(rhIL-12)的純化工藝,趙峰等[10]取高效表達(dá)rhIL-12的CHO工程細(xì)胞培養(yǎng)上清液,分離純化、定量計(jì)算、對(duì)純化產(chǎn)品進(jìn)行鑒定及檢測(cè)rhIL-12的生物活性,經(jīng)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)純化產(chǎn)物回收率和純度高,適用于工業(yè)化生產(chǎn)。

    5 前景與展望

    細(xì)胞培養(yǎng)是模擬機(jī)體內(nèi)的生理環(huán)境,使細(xì)胞維持生長(zhǎng)、繁殖的技術(shù)。目前,世界眾多領(lǐng)域集中在優(yōu)化細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境,改變細(xì)胞特性,提高產(chǎn)品的產(chǎn)率并保證其質(zhì)量和一致性上。細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)經(jīng)過(guò)不斷的研究和完善,已經(jīng)成為實(shí)驗(yàn)室常用的制藥研究方法,廣泛應(yīng)用于疫苗生產(chǎn)、單克隆抗體制備、藥物篩選、基因重組的生產(chǎn)等領(lǐng)域。

    隨著現(xiàn)代醫(yī)藥生物技術(shù)的發(fā)展、人類基因組計(jì)劃的完成及遺傳病基因的不斷發(fā)現(xiàn),越來(lái)越多的人類功能基因得到克隆、表達(dá)和應(yīng)用。目前基因重組技術(shù)、蛋白質(zhì)工程、抗體工程、細(xì)胞工程和基因治療等新技術(shù)的研究取得重大突破與發(fā)展,為醫(yī)藥制藥技術(shù)開拓了一個(gè)新領(lǐng)域,并為產(chǎn)生大量有益于人類健康的醫(yī)藥生物技術(shù)產(chǎn)品奠定了基礎(chǔ),我們有理由相信細(xì)胞培養(yǎng)在生物制藥領(lǐng)域會(huì)取得更大的突破。

    參考文獻(xiàn):

    [1]李智.細(xì)胞培養(yǎng)核心技術(shù)發(fā)展近況.科技世界,2014,(15).

    [2]曹大紅.病毒類疫苗生產(chǎn)過(guò)程中的動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)及其技術(shù)發(fā)展.中國(guó)科技縱橫,2015(21).

    [3]李一峰,謝波,惠覓宙.流感病毒及其疫苗傳代細(xì)胞制備研究進(jìn)展.生物學(xué)雜志,2012,29(2):59~64.

    [4]李旭穎,李昕,李旭冉,楊巍巍,于蘭,王鵬,于順.抗人血紅蛋白單克隆抗體的制備及鑒定.首都醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2015,36(5).

    [5]張培,楊柳,于德憲,任瑞文,劉建偉,陳月,唐波恒.幾種重要蟲媒病毒單克隆抗體的制備及初步鑒定.廣東醫(yī)學(xué),2014,35(18).

    [6]何敬琦.細(xì)胞反應(yīng)器技術(shù)及其在生物制藥領(lǐng)域的應(yīng)用.黑龍江科技信息,2015,(21).

    [7]羅南書,羅南英.體外肝細(xì)胞培養(yǎng)及在藥物篩選中的應(yīng)用.中國(guó)生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)報(bào),2015,34(1).

    [8]劉翠,楊書程,李民,劉培慶,陳瓚光,張仁偉.藥物篩選新技術(shù)及其應(yīng)用進(jìn)展.分析測(cè)試學(xué)報(bào),2015,34(11):1324-1330.

    [9]Ye N,Qin J,Shi W,Liu X,liu B.Lab Chip.2007.7(12):1696-1704.

    [10]趙峰,羅慧娟,葉倩君,張霞,張桂玲,王興勇,張宜俊.重組人白細(xì)胞介素-12(CHO細(xì)胞)的純化及其活性.中國(guó)生物制品學(xué)雜志,2009,22(11):1117-1120.

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