實(shí)驗(yàn)條件下小亞璃眼蜱的生物學(xué)特性研究

聞秀秀，謝小婉，呼爾查，朱玉濤，瓦熱斯·吐爾松，巴音查汗*

（1.新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)學(xué)院，新疆烏魯木齊830052；2.巴音郭楞蒙古自治州動(dòng)物疾病控制與診斷中心，新疆庫爾勒841000）

實(shí)驗(yàn)條件下小亞璃眼蜱的生物學(xué)特性研究

聞秀秀1，謝小婉1，呼爾查2，朱玉濤1，瓦熱斯·吐爾松2，巴音查汗1*

（1.新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)學(xué)院，新疆烏魯木齊830052；2.巴音郭楞蒙古自治州動(dòng)物疾病控制與診斷中心，新疆庫爾勒841000）

為了探究實(shí)驗(yàn)條件下小亞璃眼蜱的生物學(xué)特性，以便能更好地為二、三宿主的變更、環(huán)境變化等因素對(duì)小亞璃眼蜱繁殖影響提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。試驗(yàn)于2015年3-6月在吐魯番地區(qū)某疫區(qū)采集家畜體表（牛）蜱蟲約1 000只，采用了蜱種鑒定以及飼蜱試驗(yàn)，對(duì)小亞璃眼蜱飼養(yǎng)觀察、掌握其生活史與滯育現(xiàn)象。結(jié)果表明：小亞璃眼蜱在兔體上可表現(xiàn)為二宿主型與三宿主型生活史周期，需要115±14.832 d完成一個(gè)生活史，并具有生殖滯育現(xiàn)象。說明此次試驗(yàn)對(duì)小亞璃眼蜱的傳代培養(yǎng)具有指導(dǎo)意義。

小亞璃眼蜱；生物學(xué)特性；人工飼養(yǎng)

10.16863 /j.cnki.1003-6377.2016.06.011

硬蜱通過叮咬可傳播多種人畜共患病，對(duì)人類及家畜的危害程度僅次于蚊類[1]。Jacobs PA等研究發(fā)現(xiàn)，相對(duì)于其它節(jié)肢動(dòng)物，蜱體內(nèi)分離的病原體多達(dá)200余種，相對(duì)于其它類節(jié)肢動(dòng)物，其種類繁多、分布方式多樣[2]。目前世界上現(xiàn)記錄的蜱類有3科18屬899種，我國蜱類記錄有2科10屬119種[4]，而新疆蜱類據(jù)統(tǒng)計(jì)包括2科9屬45種[3]。其中，小亞璃眼蜱（Hyalomma anatolicum anatolicum）屬于寄螨目（Parasitiformes）、蜱總科（Ixodoidea）、硬蜱科（Ixodidae）、璃眼蜱屬（Hyalomma）[5]。根據(jù)資料報(bào)道，該硬蜱在國外分布于巴基斯坦、印度以及北非、中亞、東歐等國家，我國僅在新疆的半荒漠及草原地區(qū)有所分布，其各蟲期均可寄生于牛、馬、羊、駱駝、驢等動(dòng)物的體表，是新疆出血熱（克里米亞-剛果出血熱）、環(huán)形泰勒蟲的傳播媒介，能夠自然感染布魯氏桿菌病和Q熱的病原[6]。由此可見，在實(shí)驗(yàn)室條件下，對(duì)新疆小亞璃眼蜱進(jìn)行科學(xué)系統(tǒng)的觀察研究，對(duì)新疆蜱傳疫病的防治具有一定的應(yīng)用意義。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

2015年3-6月在吐魯番地區(qū)某疫區(qū)采集家畜體表硬蜱及其環(huán)境中游離蜱（N=1 434）。成年健康體重約22 g的小白鼠和體重約2 kg的新西蘭大白兔（均購自新疆醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心）。

1.2 蜱種鑒定

使用滅菌蒸餾水對(duì)采到的硬蜱體表進(jìn)行清洗，去除污垢暴露其特征結(jié)構(gòu)，并通過主要外部特征進(jìn)行初步分類。將一部分硬蜱用75％乙醇固定后待用，另一部分經(jīng)二甲苯透明后，制成玻片標(biāo)本。根據(jù)參考相關(guān)資料的檢索表[7-9]，借助解剖顯微鏡、光學(xué)顯微鏡和掃描電鏡觀察蟲體形態(tài)特征并進(jìn)行定種。

1.3 飼蜱試驗(yàn)

飼蜱過程以鼠供小亞璃眼蜱成蜱繁殖，兔供幼蟲、若蟲階段吸血發(fā)育，均在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)進(jìn)行。選取其中少量的飽血璃眼蜱，收集其蟲卵（N=200）；將蟲卵置于生化恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)（設(shè)置溫度為28℃和相對(duì)濕度為85％～95％）孵化為幼蜱；具有較強(qiáng)活力的幼蜱放入兔背部粘好的瓶蓋內(nèi)進(jìn)行吸血，飽血落地后的幼蜱放入用布扎口的塑料試管瓶?jī)?nèi)，置于生化恒溫培養(yǎng)箱中蛻化為若蜱；再將具有較強(qiáng)活力的若蜱放入兔背部粘好的瓶蓋內(nèi)進(jìn)行吸血，飽血落地后的的若蜱放入用布扎口的塑料試管瓶?jī)?nèi)，置于生化恒溫培養(yǎng)箱中蛻化為成蜱；從中選取已鑒定的小亞璃眼蜱（饑餓狀態(tài)）放入鼠背部粘好的瓶蓋內(nèi)進(jìn)行吸血，收集飽血雌蜱在生化恒溫箱內(nèi)產(chǎn)卵孵化，使其完成一個(gè)生活周期。詳細(xì)觀察各發(fā)育階段的生物學(xué)參數(shù)，并做好記錄。

2 結(jié)果

2.1 小亞璃眼蜱的鑒定

根據(jù)有關(guān)資料,借助體視顯微鏡、光學(xué)顯微鏡和電子顯微鏡對(duì)蜱進(jìn)行形態(tài)學(xué)鑒定，整理記錄其形態(tài)鑒定特征，小亞璃眼蜱鑒別要點(diǎn)表如表1。

2.2 小亞璃眼蜱生活史各發(fā)育階段的觀察

小亞璃眼蜱完整的生活周期需經(jīng)卵、幼蜱、若蜱、成蜱4個(gè)階段。對(duì)小亞璃眼蜱的生活史各發(fā)育階段的生物學(xué)參數(shù)進(jìn)行記錄（見表2、表3、表4、圖1）。

表2 小亞璃眼蜱生活史中各期發(fā)育觀察

表3 小亞璃眼蜱生活史中各期體重變化

表4 小亞璃眼蜱生活史各期蛻化率

圖1 小亞璃眼蜱成蜱各階段的體長參數(shù)

2.2.1 小亞璃眼蜱蟲卵發(fā)育觀察

平均重約0.067±0.005 mg(每300顆稱量計(jì)算），呈橢圓形，棕黃色，半透明。雌蜱的平均產(chǎn)卵量為3 698粒，雌蜱產(chǎn)卵時(shí)所分泌的黏性物質(zhì)將卵粘連在一起,呈石榴籽狀。卵產(chǎn)出后的第20.5±1.708 d后蟲卵逐漸變成乳白色。

2.2.2 小亞璃眼蜱幼蜱發(fā)育觀察

剛孵出的幼蜱平均重為0.03±0.004 mg（100顆稱量計(jì)算），幼蜱體卵圓形，淺黃。以后體色加深，活動(dòng)增強(qiáng)。在暗環(huán)境中聚集在管壁上方,呈堆狀，在光或熱的刺激下,幼蜱異?；钴S。接種在兔耳部一次200只，在1.5±0.5 h便叮咬到耳部進(jìn)行吸血，直至2±0.816 d蟲體體積增大，由淺黃變?yōu)榘底匣蚣t黑色,并排出白色粉樣糞便。4±0.816 d有18％幼蜱脫落，平均重為0.54±0.077mg，增重為未吸血前的18.3±3.868倍。實(shí)驗(yàn)過程中82％幼蜱并未飽血后立刻脫落，而是直接在大白兔背部吸血部位蛻變?yōu)槿趄?，后?jīng)再次飽血后才發(fā)生脫落。

2.2.3 小亞璃眼蜱若蜱發(fā)育觀察

吸血的若蜱體重為00.25±0.048mg，體色淺黃，經(jīng)2.5±0.5 d后整個(gè)軀體顏色加深，變成紅褐色。100只飽血幼蜱中蛻化出若蟲的有75只,其蛻化率為75％。若蜱蛻皮后經(jīng)1.5±0.5 h才進(jìn)行活動(dòng)，吸血4.5±0.957 d，平均4.5±1.118 mg，蟲體體積逐漸增大，由褐色變?yōu)楹谏?，并排出黑色和白色顆粒樣糞便，平均體重為19±2.380mg，是吸血前的80.6±24.868倍。若蜱飽血后自行脫落，在試管中活動(dòng)一段時(shí)間后聚集在試管壁，靜止不動(dòng)。

2.2.4 小亞璃眼蜱成發(fā)育觀察

未吸血雌蟲體重為13±1.291 mg，蛻化的成蜱呈淡黃色，1.5±0.5 d后顏色加深，變?yōu)辄S褐色，活力強(qiáng)。接種兔背2±0.816 d可全部咬上。經(jīng)2.5±0.5 d后，蟲體體積明顯增大，由紅褐色變?yōu)榍嗷疑?，并排出大量白色顆粒樣糞便。5.5±1.893 d后蟲體全部自動(dòng)脫落,體型似蠶豆樣，平均體重為448.5±14.021mg。雄性成蜱的吸血方式為間斷性吸血，可移動(dòng)其吸血部位，這與雌性成蜱的持續(xù)性吸血方式不同。吸血過程中雄性成蜱的軀體與雌性成蜱的體軀無明顯變化。

2.2.5 小亞璃眼蜱飽血雌蜱產(chǎn)卵和孵化

飽血雌蜱脫落置于溫度28℃和相對(duì)濕度85％～95％的條件培養(yǎng)。雌蜱經(jīng)3.5±0.5 d軀體稍膨脹、變硬，在試管兩端靜止不動(dòng)，經(jīng)5±1.291 d的產(chǎn)卵前期雌蜱產(chǎn)卵，第5±0.816 d是產(chǎn)卵的高峰期。產(chǎn)卵時(shí)蜱活動(dòng)極弱，僅肢體活動(dòng)，用爪將卵推至假頭前。雌蜱產(chǎn)卵前體表附有乳白色粘稠液體，產(chǎn)卵后逐漸變?yōu)辄S色并且表皮起皺，逐漸縮小，經(jīng)10±3.651 d死亡。

2.3 蜱的滯育現(xiàn)象

通過成年大白兔為宿主供血，發(fā)現(xiàn)小亞璃眼蜱雌性成蜱有生殖滯育現(xiàn)象[10]，經(jīng)130 d后發(fā)現(xiàn)其未進(jìn)行產(chǎn)卵。

3 討論

3.1 小亞璃眼蜱的鑒定

根據(jù)相關(guān)資料，對(duì)采集到的蜱蟲進(jìn)行鑒別，確定其為小亞璃眼蜱。并對(duì)采集到小亞璃眼蜱的地理位置與現(xiàn)已記錄的新疆地區(qū)小亞璃眼蜱地理分布進(jìn)行對(duì)比分析，發(fā)現(xiàn)其與現(xiàn)記錄地理分布相符，這表明該地區(qū)在過去的十幾年中氣候條件未發(fā)生太大的變化，適合小亞璃眼蜱的生存。

3.2 小亞璃眼蜱生活史各發(fā)育階段的觀察

本實(shí)驗(yàn)通過以家兔為其供血?jiǎng)游飳?duì)小亞璃眼蜱進(jìn)行飼養(yǎng)發(fā)現(xiàn)其不僅表現(xiàn)為二宿主蜱，也表現(xiàn)為三宿主蜱，這與國內(nèi)學(xué)者孫明的的研究結(jié)果該蜱僅表現(xiàn)為二宿主不同[11]，是否由于培養(yǎng)的季節(jié)、溫度、濕度等條件不同引發(fā)的結(jié)果，還需進(jìn)一步的研究。在實(shí)驗(yàn)室條件下，對(duì)小亞璃眼蜱進(jìn)行培養(yǎng)1代平均需要115± 14.832 d[12]。因此，人工飼養(yǎng)小亞璃眼蜱可顯著縮短其繁育周期，一年內(nèi)繁殖代數(shù)可達(dá)2.5±0.5代，為實(shí)驗(yàn)室蜱傳疾病中，蜱垂直傳播疾病的研究提供了大量的材料。

3.3 蜱的滯育現(xiàn)象

在人工飼養(yǎng)小亞璃眼蜱中發(fā)現(xiàn)小亞璃眼蜱飽血雌蜱有生殖滯育現(xiàn)象，這種生殖滯育現(xiàn)象可能是小亞璃眼蜱對(duì)外界不良環(huán)境的適應(yīng)所導(dǎo)致，結(jié)合國內(nèi)外相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)該現(xiàn)象是硬蜱適應(yīng)外界環(huán)境所獲得的一種發(fā)育規(guī)律，屬于正常表現(xiàn)行為。

本實(shí)驗(yàn)對(duì)新疆地區(qū)小亞璃眼蜱的生物學(xué)特性研究，對(duì)該蜱各生活階段進(jìn)行詳細(xì)的記錄并分析，豐富了新疆地區(qū)小亞璃眼蜱生物學(xué)特性資料，對(duì)新疆地區(qū)蜱傳疾病綜合防控具有應(yīng)用意義。

[1]吳輝,等.新疆四種優(yōu)勢(shì)種革蜱超微結(jié)構(gòu)觀察[J].昆蟲學(xué)報(bào),2016,59(1)：-92.

[2]Jacobs P A,et al.A laboratory comparison of the life cycles of the dog ticks.Haemaphysalis leachi and Rhipicephalus sanguineus[J].Onderstepoort Journal of Veterinary Research,2004,71(1)：15-28.

[3]Barker S C,et al.Systematics and evolution of ticks with a list of valid genus and species names[J].Parasitology,2004,129 Suppl(7):S15-S36.

[4]于心,等.新疆蜱類志[M].烏魯木齊:新疆科學(xué)技術(shù)衛(wèi)生出版社,1997:79.

[5]Krantz GW,etal.A Manual of Acarology[M].Texas Technology University Press,Lubbock,2009:807.

[6]呂繼洲,等.小亞璃眼蜱、亞洲璃眼蜱和殘緣璃眼蜱的分子生物學(xué)鑒定[J].中國畜牧獸醫(yī),2013,40(1)：7-14.

[7]陸寶麟.中國重要醫(yī)學(xué)動(dòng)物鑒定手冊(cè)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,1982:805-819.

[8]徐秉錕.人體寄生蟲電鏡圖譜[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,1988:160-163.

[9]呂文祥,等.牛羊蜱傳性血液原蟲超微結(jié)構(gòu)研究[J].中國獸醫(yī)科技,1997:27(5):10-12.

[10]姜在階.蜱類的滯育現(xiàn)象[J].昆蟲知識(shí),1987,（03）:179-183.

[11]孫明,等.實(shí)驗(yàn)室條件下小亞璃眼蜱生活史觀察[J].中國媒介生物學(xué)及控制雜志,2011,22(4):344-347.

[12]王振寶.小亞璃眼蜱的生活史和抗菌多肽活性的研究及牛環(huán)形泰勒蟲病二溫式PCR檢測(cè)方法的建立[D].新疆農(nóng)業(yè)大學(xué),2009.

Study on Biological Characteristics of Hyalomma Anatolicum Anatolicum under Laboratory Conditions

WEN Xiu-xiu1,XIE Xiao-wan1,HUERCHA2,ZHU Yu-tao1,WAGESTulson2,BAYINCHAHAN1*
（1.College of Animal Medicine,Xinjiang Agricultural University,Urumqi830052,China；2.Animal Disease Control and Diagnostic Center of Bayinguoleng Mongolia Autonomous Prefecture Korla 841000,China)

To study the biological characteristics of Hyalomma anatolicum anatolicum(H.a.anatolicum)in laboratory conditions,the paper provides laboratory reference to the influence of changes of the two or threehost and the environment against the reproduction of H.a.anatolicum,suchas.This research sampled about 1 000 ticks on the animals(bovine)bodies in some affected areas in Turpan area between March,2015 and June,2015,fed and observed H.a.anatolicum bymeans of species identification and feeding test,and learned well about its live circle and diapauses.It is found that H.a.anatolicum on rabbit body showed two or three host type,and it took 115±14.832 d to finish a whole live circle with diapauses.The experiment provided guidance on the subcultivation of H.a.anatolicum.

Hyalomma anatolicum anatolicum;biological characteristics;artificial feeding

S855.9+9

A

1003－6377（2016）06－0053-05

自治區(qū)成果轉(zhuǎn)化項(xiàng)目（201454129）資助

聞秀秀（1992-），女，新疆喀什人，在讀碩士。Email:1505500475@qq.com

巴音查汗，教授，博士生導(dǎo)師。E-mail：2514062881@qq.com

2016-07-30，

2016-08-25