• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    快速線掃描拉曼成像技術(shù)在研究CaSki細(xì)胞凋亡過程中的應(yīng)用

    2016-12-27 02:11:20張金亮徐夢(mèng)溪
    關(guān)鍵詞:拉曼脂質(zhì)色素

    張金亮, 馬 鑫, 徐夢(mèng)溪, 宗 鋮, 任 斌

    (廈門大學(xué)化學(xué)化工學(xué)院, 固體表面物理化學(xué)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室, 廈門 361005)

    ?

    快速線掃描拉曼成像技術(shù)在研究CaSki細(xì)胞凋亡過程中的應(yīng)用

    張金亮, 馬 鑫, 徐夢(mèng)溪, 宗 鋮, 任 斌

    (廈門大學(xué)化學(xué)化工學(xué)院, 固體表面物理化學(xué)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室, 廈門 361005)

    應(yīng)用快速線掃描拉曼成像技術(shù)研究了在抗腫瘤藥物順鉑誘導(dǎo)下宮頸癌CaSki細(xì)胞凋亡過程中細(xì)胞色素c、 蛋白質(zhì)和脂質(zhì)等的時(shí)空變化規(guī)律. 結(jié)果表明, 細(xì)胞色素c與蛋白質(zhì)的相對(duì)拉曼峰強(qiáng)可以反映細(xì)胞凋亡程度. 與常用的表征細(xì)胞活性的噻唑藍(lán)(MTT)實(shí)驗(yàn)的統(tǒng)計(jì)方法相比, 利用拉曼成像技術(shù)可以更靈敏地觀察到細(xì)胞凋亡早期生物活性分子的變化, 從而在單細(xì)胞水平檢測(cè)細(xì)胞凋亡過程, 為解析藥物與細(xì)胞的作用機(jī)制提供分子水平信息.

    宮頸癌; 細(xì)胞色素c; 凋亡; 拉曼光譜; 拉曼成像; 噻唑藍(lán)法

    癌細(xì)胞的凋亡是大量胞內(nèi)分子同時(shí)參與的復(fù)雜過程. 從單細(xì)胞水平上研究癌細(xì)胞在藥物作用下的凋亡過程將有助于認(rèn)識(shí)藥物與癌細(xì)胞作用機(jī)理, 對(duì)高效治療癌癥具有重要的科學(xué)意義. 但目前從單個(gè)活細(xì)胞和單分子水平上探究生命問題對(duì)于傳統(tǒng)生物醫(yī)學(xué)手段仍是一個(gè)巨大的挑戰(zhàn), 對(duì)癌細(xì)胞凋亡過程的分子動(dòng)態(tài)時(shí)空演變信息仍然了解甚少.

    近年來(lái), 流式細(xì)胞術(shù)、 掃描探針顯微技術(shù)和熒光顯微術(shù)等單細(xì)胞技術(shù)發(fā)展較快, 其中流式細(xì)胞術(shù)可以實(shí)現(xiàn)單個(gè)細(xì)胞快速高通量的生物學(xué)分析, 獲得細(xì)胞的物理化學(xué)特性, 但缺乏空間分辨的信息[1~3]. 掃描探針顯微技術(shù)不僅可以研究單個(gè)細(xì)胞膜表面微結(jié)構(gòu)的形貌信息, 還可以對(duì)胞內(nèi)相關(guān)細(xì)胞器進(jìn)行分子水平上的操作, 但是會(huì)對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生應(yīng)力, 影響細(xì)胞的正常生理功能[4]. 熒光顯微技術(shù)為在單細(xì)胞水平上研究細(xì)胞生物學(xué)過程提供了豐富的信息, 也是目前單細(xì)胞研究的主要方法, 但熒光技術(shù)需要借助外來(lái)標(biāo)記分子, 會(huì)對(duì)細(xì)胞的微環(huán)境以及被標(biāo)記分子的功能產(chǎn)生一定的干擾, 難以如實(shí)反映生物分子的本征信息, 特別是對(duì)一些重要的生物活性分子, 如小分子和脂類等尚難以進(jìn)行熒光標(biāo)記而不影響其生物學(xué)活性; 此外, 熒光峰通常較寬, 難以同時(shí)實(shí)現(xiàn)多組分檢測(cè)[5~7]. 拉曼光譜技術(shù)不會(huì)發(fā)生生物分子光漂白, 適合長(zhǎng)時(shí)間對(duì)活體樣品進(jìn)行檢測(cè); 無(wú)需標(biāo)記即可獲得體系的指紋特征, 排除了標(biāo)記分子對(duì)生物體系的干擾甚至破壞; 其光譜特征由分子自身振動(dòng)特征決定, 不易受外界干擾; 譜峰窄, 可以進(jìn)行多組分同時(shí)檢測(cè). 因此, 拉曼光譜能夠同時(shí)獲得整個(gè)細(xì)胞的光譜信息, 對(duì)研究細(xì)胞內(nèi)多種分子同時(shí)參與的凋亡過程具有顯著優(yōu)勢(shì).

    宮頸癌是全球女性的第二大癌癥殺手, 根據(jù)其攜帶的人類乳頭瘤病毒的型號(hào), 宮頸癌細(xì)胞可分為HeLa, SiHa, C33A和CaSki等幾種[8~11]. 順鉑是常見的抗腫瘤藥物, 具有很好的抗腫瘤功效[12~15]. 目前認(rèn)為順鉑與癌細(xì)胞的作用機(jī)理主要有2種: 一種認(rèn)為順鉑與細(xì)胞核內(nèi)DNA的堿基形成絡(luò)合物, 阻止DNA的解旋、 復(fù)制等過程, 從而抑制癌細(xì)胞的增長(zhǎng)[16~18]; 另一種認(rèn)為順鉑可以誘導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)生活性氧, 從而誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡[19~22].

    本文選擇宮頸癌CaSki細(xì)胞作為研究的細(xì)胞系, 運(yùn)用快速線掃描拉曼成像技術(shù)對(duì)順鉑作用后的CaSki細(xì)胞的凋亡過程進(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè). 通過拉曼成像分析對(duì)活細(xì)胞內(nèi)生物分子如細(xì)胞色素c、 蛋白質(zhì)、 脂質(zhì)等的含量和分布進(jìn)行了分析, 從而獲得細(xì)胞凋亡過程的分子信息, 為順鉑抗腫瘤機(jī)理的研究提供分子水平信息.

    1 實(shí)驗(yàn)部分

    1.1 試劑與儀器

    DMEM高糖培養(yǎng)基(美國(guó)Gbcio公司); 鏈霉素、 青霉素、 噻唑藍(lán)(MTT)和二甲基亞砜(DMSO)(廈門鷺隆生物科技有限公司); 胎牛血清(美國(guó)Hyclone公司); 胰蛋白酶(Trypsin, 美國(guó)Amersco公司)、 磷酸鹽緩沖溶(PBS, pH=7.2~7.4, 每升含NaCl 8.0 g, KCl 0.2 g, Na3HPO41.15 g, KH3PO40.2 g); 順鉑(上海阿拉丁試劑有限公司). 順鉑藥物采用DMEM培養(yǎng)基配制, 現(xiàn)配現(xiàn)用.

    AE20型倒置顯微鏡(廈門MOTIC公司); DK-S22型電熱恒溫水槽(上海精宏設(shè)備有限公司); Sterilgard Ⅲ型生物安全柜(美國(guó)Baker公司), SCO6AD型氣套式CO2培養(yǎng)箱(美國(guó)Shellab公司); Raman-11快速共聚焦拉曼成像光譜儀(日本Nanophoton公司); EnSpire酶標(biāo)儀(美國(guó)PerkinElmer公司).

    1.2 細(xì)胞培養(yǎng)與細(xì)胞活性MTT實(shí)驗(yàn)

    實(shí)驗(yàn)細(xì)胞系為宮頸癌CaSki細(xì)胞. 細(xì)胞培養(yǎng)基為含1%(體積分?jǐn)?shù))鏈霉素, 1%(體積分?jǐn)?shù))青霉素和10%(體積分?jǐn)?shù))胎牛血清的DMEM高糖培養(yǎng)基. 培養(yǎng)環(huán)境為含5%(體積分?jǐn)?shù))CO2和95%(體積分?jǐn)?shù))空氣的混合氣環(huán)境, 培養(yǎng)溫度為37 ℃.

    通過細(xì)胞計(jì)數(shù)板將CaSki細(xì)胞的密度控制在105Cell/mL左右, 然后將細(xì)胞懸浮液種在96孔板中, 每孔種100 μL, 并設(shè)置調(diào)零孔和空白組. 種片24 h后, 分別加入0, 2, 4, 8, 10 mmol/L的順鉑溶液, 并作用24 h, 獲得順鉑對(duì)CaSki細(xì)胞的半抑制濃度(IC50).

    將IC50濃度的順鉑溶液加入到96孔板中, 每孔加150 μL, 分別和細(xì)胞作用4, 8, 12, 16, 24, 48 h后加入5 mg/mL的MTT溶液各10 μL, 孵育4 h. 小心吸去上層溶液, 每孔加入150 μL DMSO溶液, 作用0.5 h后搖勻, 用酶標(biāo)儀測(cè)量孔板的吸光度, 激光波長(zhǎng)為490 nm.

    1.3 細(xì)胞拉曼成像實(shí)驗(yàn)

    將Caski細(xì)胞種片24 h后, 加入IC50濃度的順鉑溶液分別作用4, 8, 12, 16, 24, 48 h, 然后將細(xì)胞放到經(jīng)除菌處理過的蓋玻片上, 滴加PBS對(duì)細(xì)胞封片處理, 然后進(jìn)行拉曼成像. 該處理方法可以避免細(xì)胞暴露在外界環(huán)境下發(fā)生不可控變化, 保持細(xì)胞的正常生命活動(dòng), 從而在成像時(shí)間內(nèi)可以固定細(xì)胞的形貌, 避免發(fā)生顯著變化, 使檢測(cè)到的細(xì)胞信號(hào)變化可以如實(shí)反映順鉑與細(xì)胞的作用.

    將532 nm激光束通過柱面鏡轉(zhuǎn)換為橢形光斑, 并經(jīng)過動(dòng)鏡掃描形成均勻的線光源, 再通過100倍油鏡[數(shù)值孔徑(NA)=1.4, Nikon公司, Type A型浸潤(rùn)油]照射在細(xì)胞上, 對(duì)應(yīng)成像寬度為80 μm. 結(jié)合動(dòng)鏡掃描, 獲得80 μm×20 μm細(xì)胞拉曼成像圖, 拉曼圖像中每個(gè)像素大小約為200 nm×200 nm. 每條線的曝光時(shí)間為10 s, 線激光功率為6 mW/像素. 選擇600 道光柵進(jìn)行分光, 對(duì)應(yīng)采譜范圍為580~3025 cm-1.

    2 結(jié)果與討論

    2.1 細(xì)胞活性MTT實(shí)驗(yàn)分析

    首先采用生物醫(yī)學(xué)中常用的MTT法來(lái)測(cè)算順鉑對(duì)CaSki細(xì)胞作用的IC50. 與不同濃度順鉑作用24 h后細(xì)胞的存活率如圖1所示. 可見, 細(xì)胞凋亡比例與順鉑藥物濃度呈良好的正相關(guān)性. 當(dāng)順鉑濃度為4 mmol/L時(shí), 細(xì)胞24 h的存活率降到50%左右, 該濃度即為順鉑作用于CaSki細(xì)胞的IC50值. 選擇4 mmol/L這一藥物濃度研究了順鉑對(duì)細(xì)胞作用不同時(shí)間后細(xì)胞的凋亡情況, 結(jié)果如圖2所示. 可見, 4 mmol/L的順鉑與CaSki細(xì)胞作用4 h和8 h后, 細(xì)胞存活率和無(wú)藥物的對(duì)照組基本一致, 說(shuō)明該時(shí)間范圍內(nèi)順鉑并沒有導(dǎo)致細(xì)胞發(fā)生明顯的凋亡. 而當(dāng)藥物作用12 h后, 細(xì)胞存活率降低到70%. 作用時(shí)間延長(zhǎng)到48 h后, 細(xì)胞的存活率低于20%. 采用MTT法檢測(cè)細(xì)胞毒性時(shí), 需要作用較長(zhǎng)時(shí)間才能反映出細(xì)胞的凋亡信息, 而且無(wú)法獲得細(xì)胞凋亡過程中細(xì)胞內(nèi)分子動(dòng)態(tài)變化信息.

    Fig.1 Viability of CaSki cells after being treated with different concentrations of cisplatin for 24 h

    Fig.2 Time-depended viability of CaSki cells after being treated with 4 mmol/L cisplatin

    2.2 拉曼成像分析

    Fig.3 Time depended bright field images(A1—F1) and Raman images using raman peaks of cytochrome c(750 cm-1)(A2—F2), protein(1660 cm-1)(A3—F3), and lipid(2852 cm-1)(A4—F4) of cells after being treated with 4 mmol/L cisplatin for 0 h(A1—A4), 4 h(B1—B4), 8 h(C1—C4), 12 h(D1—D4), 24 h(E1—E4) and 48 h(F1—F4)

    2.2.1 細(xì)胞內(nèi)生物分子成像分析 根據(jù)上述MTT實(shí)驗(yàn), 選擇用4 mmol/L順鉑溶液來(lái)誘導(dǎo)CaSki細(xì)胞的凋亡. 待藥物和細(xì)胞作用不同時(shí)間后, 對(duì)細(xì)胞進(jìn)行顯微觀察和拉曼成像, 結(jié)果如圖3所示. 可見, 當(dāng)順鉑與細(xì)胞作用時(shí)間短于12 h時(shí), 從細(xì)胞白光顯微圖像上觀察不到細(xì)胞形貌的明顯變化; 當(dāng)作用時(shí)間延長(zhǎng)到24 h后, 細(xì)胞發(fā)生皺縮, 細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)消失, 表明細(xì)胞已經(jīng)發(fā)生明顯凋亡, 如圖3(A1~F1)所示. 在顯微觀察時(shí)用拉曼光譜對(duì)細(xì)胞進(jìn)行成像, 圖3(A2~F2), (A3~F3), (A4~F4)分別是用代表細(xì)胞色素c(750 cm-1)、 蛋白質(zhì)酰胺Ⅰ帶(1660 cm-1)和細(xì)胞內(nèi)飽和脂質(zhì)(2852 cm-1)[16,18,23,24]的特征拉曼峰強(qiáng)度作的拉曼顯微圖像. 可見, 在沒有順鉑作用下, 細(xì)胞內(nèi)的細(xì)胞色素c含量較多, 呈顆粒狀分布, 表明細(xì)胞色素c分布在線粒體內(nèi), 而且細(xì)胞內(nèi)含有少量脂滴. 當(dāng)用順鉑作用4 h和8 h后, 細(xì)胞色素c的含量減少, 并呈云霧狀彌散分布, 表明細(xì)胞色素c開始從線粒體內(nèi)釋放到細(xì)胞質(zhì)中. 作用時(shí)間繼續(xù)延長(zhǎng), 細(xì)胞色素c繼續(xù)減少, 48 h后完全消失. 脂質(zhì)的含量隨著藥物作用時(shí)間的延長(zhǎng)而增加, 脂滴逐漸增多. 拉曼光譜中1660 cm-1處的信號(hào)峰可歸屬于蛋白質(zhì)和脂質(zhì). 由于蛋白質(zhì)分布在整個(gè)細(xì)胞中, 而飽和脂類主要出現(xiàn)在脂滴部分, 因此觀察到1660和2852 cm-1處的峰在脂滴部分重合, 而在細(xì)胞其它部位沒有明顯重合的現(xiàn)象. 此外, 隨著順鉑作用時(shí)間的延長(zhǎng), 細(xì)胞內(nèi)非脂滴區(qū)域蛋白質(zhì)的成像結(jié)果沒有發(fā)生明顯變化, 說(shuō)明細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)的含量和分布基本穩(wěn)定. 因此在后面數(shù)據(jù)處理中皆以細(xì)胞內(nèi)非脂滴區(qū)域1660 cm-1處的峰強(qiáng)度作為內(nèi)標(biāo). 拉曼成像結(jié)果表明, 細(xì)胞在凋亡過程中, 細(xì)胞色素c會(huì)從線粒體中釋放到細(xì)胞質(zhì)中, 被細(xì)胞內(nèi)活性氧氧化而信號(hào)強(qiáng)度減弱, 并逐漸消失. 細(xì)胞中的脂質(zhì)會(huì)在細(xì)胞凋亡過程中顯著增多, 這可能是由細(xì)胞凋亡過程中細(xì)胞中的脂質(zhì)受到活性氧作用發(fā)生團(tuán)聚所致[19].

    Fig.4 Intensity of 750 and 1660 cm-1 peaks and ratio of I750/I1660 of the cells after being treated with 4 mmol/L cisplatin for different time

    2.2.2 細(xì)胞色素c與蛋白質(zhì)拉曼信號(hào)相對(duì)強(qiáng)度分析 在藥物與細(xì)胞作用不同時(shí)間的拉曼成像數(shù)據(jù)中, 蛋白質(zhì)酰胺Ⅰ帶(1660 cm-1)的強(qiáng)度隨時(shí)間變化不大(圖4), 表明細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)總量與個(gè)體差異不明顯, 而且在細(xì)胞凋亡過程中也不會(huì)發(fā)生明顯變化; 而歸屬于細(xì)胞色素c的750 cm-1處的峰則變化顯著. 因此選擇1660 cm-1處的峰作為內(nèi)標(biāo), 研究細(xì)胞與藥物作用后細(xì)胞色素c的含量變化. 實(shí)驗(yàn)中, 每個(gè)作用時(shí)間隨機(jī)選擇3個(gè)細(xì)胞作為平行樣品. 每個(gè)細(xì)胞隨機(jī)選取細(xì)胞質(zhì)中5個(gè)12×12像素的拉曼信號(hào)進(jìn)行分析. 數(shù)據(jù)選擇過程中注意避開脂滴聚集區(qū)域. 由圖4可見, 在沒有藥物作用條件下, 細(xì)胞中I750/I1660的比值較高, 說(shuō)明此時(shí)細(xì)胞中的細(xì)胞色素c含量較高. 當(dāng)加入順鉑作用4 h 和8 h后,I750/I1660的比值顯著降低, 說(shuō)明細(xì)胞內(nèi)的細(xì)胞色素c含量降低; 繼續(xù)延長(zhǎng)作用時(shí)間,I750/I1660的比值繼續(xù)減小; 作用48 h后該比值趨于零, 表明細(xì)胞色素c基本消失. 因此, 通過拉曼成像研究, 可以根據(jù)細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞色素c的含量和分布, 靈敏地判斷細(xì)胞是否發(fā)生凋亡, 以及凋亡的程度, 并且可以同時(shí)觀察細(xì)胞在凋亡過程中蛋白質(zhì)、 脂質(zhì)等的動(dòng)態(tài)變化, 這對(duì)研究細(xì)胞的早期凋亡機(jī)制具有重要意義. 而常規(guī)MTT實(shí)驗(yàn)由于只能宏觀地評(píng)估細(xì)胞活性, 因此在藥物作用的短時(shí)間內(nèi), 無(wú)法通過MTT實(shí)驗(yàn)統(tǒng)計(jì)結(jié)果說(shuō)明藥物是否開始誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡, 因此, 拉曼成像法對(duì)研究單細(xì)胞凋亡過程具有獨(dú)特的優(yōu)勢(shì).

    3 結(jié) 論

    通過拉曼成像技術(shù)研究了順鉑誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡過程中, 細(xì)胞內(nèi)相關(guān)生物分子的含量變化與分布形態(tài). 拉曼成像結(jié)果表明, 宮頸癌CaSki細(xì)胞與順鉑作用后, 細(xì)胞色素c會(huì)從線粒體中釋放到細(xì)胞質(zhì)中, 且隨著作用時(shí)間的延長(zhǎng), 細(xì)胞色素c的含量逐漸減少, 脂質(zhì)發(fā)生氧化和聚集, 驗(yàn)證了順鉑誘導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)生活性氧而導(dǎo)致細(xì)胞凋亡的藥物機(jī)制. 在順鉑與宮頸癌Caski細(xì)胞作用短時(shí)間后, 細(xì)胞色素c與細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)的拉曼信號(hào)強(qiáng)度比會(huì)減小, 因此將細(xì)胞色素c作為細(xì)胞凋亡的標(biāo)記分子, 可以獲得細(xì)胞凋亡早期的分子變化信息. 傳統(tǒng)細(xì)胞活性實(shí)驗(yàn)(MTT法)結(jié)果表明, 順鉑作用CaSki細(xì)胞24 h后的IC50值為4 mmol/L, 但順鉑誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡早期(8 h內(nèi)), 作用時(shí)間與存活率時(shí)間相關(guān)性較差. 與MTT法的結(jié)果相比, 拉曼成像在研究藥物與細(xì)胞作用過程中具有更高的時(shí)空分辨率, 可以更靈敏地反映細(xì)胞凋亡早期生物分子的變化規(guī)律, 為研究藥物與細(xì)胞的作用機(jī)制提供了分子水平上的信息.

    [1] Alvarez-Barrientos A., Arroyo J., Canton R., Nombela C., Sanchez-Perez M.,Clin.Microbiol.Rev., 2000, 13(2), 167—195

    [2] Davey H. M., Kell D. B.,Microbiol.Rev., 1996, 60(4), 641—696

    [3] Winson M. K., Davey H. M.,Methods, 2000, 21(3), 231—240

    [4] Hansma H. G.,Proc.Natl.Acad.Sci., 1999, 96(26), 14678—14680

    [5] Barer M. R., Harwood C. R.,Adv.Microb.Physiol., 1999, 41, 93—137

    [6] Yao Z., Rut C. L.,Annu.Rev.Microbiol., 2014, 68, 459—476

    [7] Chidananda S. M., Satyamoorthy K., Rai L., Manjunath A. P., Kartha V. B.,Int.J.Cancer, 2006, 119(1), 139—145

    [8] Ostrowska K. M., Garcia A., Meade A. D., Malkin A., Okewumi I.,leary J. J., Martin C., Byrne H. J., Lyng F. M.,Analyst, 2011, 136(7), 1365—1373

    [9] Diao M. K., Liu C. Y., Liu H. W., Li J. T., Li F., Mehryar M. M., Wang Y. J., Zhan S. B., Zhou Y. B., Zhong R. G., Zeng Y.,LifeSci., 2015, 127, 46—52

    [10] Bedford S.,Br.J.Nurs., 2009, 18(2), 80—84

    [11] Zhang H. P., Zheng C., Lu L., Zou Y. B., Wang C. H., Xu S. P., Xu W. Q., Fan Z. M., Lu L. J., Han B.,Chem.J.ChineseUniversities, 2014, 35(9), 1877—1882(張海鵬, 鄭超, 路璐, 鄒亞斌, 王翠花, 徐抒平, 徐蔚青, 范志民, 路來(lái)金, 韓冰. 高等學(xué)?;瘜W(xué)學(xué)報(bào), 2014, 35(9), 1877—1882

    [12] Gonzalez V. M., Fuertes M. A., Alonso C., Perez J. M.,Mol.Pharmacol., 2001, 59(4), 657—663

    [13] Kelland L.,Nat.Rev.Cancer, 2007, 7(8), 573—584

    [14] Natile G., Coluccia M.,Top.Biol.Inorg.Chem., 1999, 1, 73—98

    [15] Xie F., Zhang J. W., Pan T. T., Zhou C., Ren H., Jin Q. H., Mu Y.,ChemJ.ChineseUniversities, 2014, 35(1), 30—36(解飛, 張金偉, 潘婷婷, 周超, 任昊, 金欽漢, 牟穎. 高等學(xué)校化學(xué)學(xué)報(bào), 2014, 35(1), 30—36)

    [16] Matthaus C., Chernenko T., Newmark J. A., Warner C. M., Diem M.,Biophys.J., 2007, 93(2), 668—673

    [17] Novakova O. K., Jana M., Jaroslav N., Giovanni B.,NucleicAcidsRes., 2003, 31(22), 6450—6460

    [18] Okada M., Smith N. I., Palonpon A. F., Endo H., Kawata S., Sodeoka M., Fujita K.,Proc.Natl.Acad.Sci., 2012, 109(1), 28—32

    [19] Miyajima J. N., Yoshioka K., Tachibana M., Tazaki H., Murai M.,Br.J.Cancer, 1997, 76(2), 206—210

    [20] Robert S., Marullo R., Werner E., Degtyareva N., Moore B., Altavilla G., Ramalingam S. S., Doetsch P. W.,PlosONE, 2013, 8(11), 81162

    [21] Berndtsson M., Hagg M., Panaretakis T., Havelka A. M., Shoshan M. C., Linder S.,Int.J.Cancer, 2007, 120(1), 175—180

    [22] Bragado P., Armesilla A., Silva A., Porras A.,Apoptosis, 2007, 12(9), 1733—1742

    [23] Hamada K., Fujita K., Smith N. I., Kobayashi M., Inouye Y., Kawata S.,J.Biomed.Opt., 2008, 13(4), 044024—044027

    [24] Zheng J. W., Gu R. A., Lu T. H.,Chem.J.ChineseUniversities, 2002, 23(1), 42—45(鄭軍偉, 顧仁敖, 陸天虹. 高等學(xué)?;瘜W(xué)學(xué)報(bào), 2002, 23(1), 42—45

    (Ed.: S, Z, M)

    Study on Apoptosis Process of CaSkiviaFast Line-scanning Raman Imaging?

    ? Supported by the National Basic Research Program of China(No.2013CB933703).

    ZHANG Jinliang, MA Xin, XU Mengxi, ZONG Cheng*, REN Bin*

    (StateKeyLaboratoryofPhysicalChemistryofSolidSurfaces,CollegeofChemistryandChemicalEngineering,XiamenUniversity,Xiamen361005,China)

    Cisplatin-induced apoptosis of CaSki cell was studiedviaRaman imaging technique. Fast line-scanning Raman imaging method could reveal the high temporal and spatial information of biomolecules including cytochrome c, protein and lipid during the apoptosis process. The results indicate that the relative intensity of cytochrome c to protein(I750/I1660) could reflect the stage of apoptosis. Compared with the traditional methylthiazoletetrazolium(MTT) method, Raman imaging could investigate the apoptosis of single living cell at a much higher temporal resolution and provide the molecular fingerprint information for revealing the cell-drug interaction.

    Cervical cancer; Cytochrome c; Apoptosis; Raman spectroscopy; Raman imaging; Methylthiazoletetrazolium(MTT) method

    2016-04-20.

    日期: 2016-06-27.

    國(guó)家重點(diǎn)基礎(chǔ)研究計(jì)劃項(xiàng)目(批準(zhǔn)號(hào): 2013CB933703)資助.

    10.7503/cjcu20160265

    O657.37; O644

    A

    聯(lián)系人簡(jiǎn)介: 任 斌, 男, 博士, 教授, 主要從事拉曼光譜、 電化學(xué)和單細(xì)胞研究. E-mail: bren@xmu.edu.cn

    宗 鋮, 男, 博士, 主要從事拉曼光譜、 電化學(xué)和單細(xì)胞研究. E-mail: czong@xmu.edu.cn

    猜你喜歡
    拉曼脂質(zhì)色素
    賊都找不到的地方
    娃娃樂園·綜合智能(2022年9期)2022-08-16 02:00:08
    “聽話”的色素
    基于單光子探測(cè)技術(shù)的拉曼光譜測(cè)量
    復(fù)方一枝蒿提取物固體脂質(zhì)納米粒的制備
    中成藥(2018年9期)2018-10-09 07:18:36
    白楊素固體脂質(zhì)納米粒的制備及其藥動(dòng)學(xué)行為
    中成藥(2018年1期)2018-02-02 07:19:53
    馬錢子堿固體脂質(zhì)納米粒在小鼠體內(nèi)的組織分布
    中成藥(2017年4期)2017-05-17 06:09:26
    甜油的生產(chǎn)及色素控制
    基于相干反斯托克斯拉曼散射的二維溫度場(chǎng)掃描測(cè)量
    天然色素及紅色素的研究進(jìn)展
    欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 亚洲最大成人手机在线| 长腿黑丝高跟| 久久婷婷人人爽人人干人人爱| 国产高清视频在线观看网站| 国产精品爽爽va在线观看网站| 精品免费久久久久久久清纯| 毛片一级片免费看久久久久 | 久久久精品大字幕| 亚洲人成网站高清观看| av在线亚洲专区| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 身体一侧抽搐| 动漫黄色视频在线观看| 久久精品人妻少妇| 午夜影院日韩av| 18禁黄网站禁片免费观看直播| 悠悠久久av| 全区人妻精品视频| 女同久久另类99精品国产91| 日韩精品中文字幕看吧| 免费av不卡在线播放| 小说图片视频综合网站| 1000部很黄的大片| 大型黄色视频在线免费观看| 亚洲精品一区av在线观看| 日本色播在线视频| 免费av毛片视频| 床上黄色一级片| av在线天堂中文字幕| 精品免费久久久久久久清纯| 在线观看午夜福利视频| 国产欧美日韩一区二区精品| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 午夜福利成人在线免费观看| 国产在线精品亚洲第一网站| 麻豆一二三区av精品| 看免费成人av毛片| 亚洲成人免费电影在线观看| 久久精品影院6| 久久午夜亚洲精品久久| 国产伦精品一区二区三区四那| 国产高潮美女av| 亚州av有码| 久久午夜福利片| 欧美色欧美亚洲另类二区| 夜夜夜夜夜久久久久| 国产精品伦人一区二区| 精品久久久久久久久久久久久| 成人一区二区视频在线观看| 看黄色毛片网站| 婷婷亚洲欧美| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 午夜免费成人在线视频| 在线观看一区二区三区| 99在线人妻在线中文字幕| 制服丝袜大香蕉在线| 最后的刺客免费高清国语| 国产麻豆成人av免费视频| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看| 国产精品电影一区二区三区| 国内精品一区二区在线观看| 午夜福利在线观看免费完整高清在 | 91在线精品国自产拍蜜月| 中出人妻视频一区二区| 国产精品亚洲一级av第二区| 国产亚洲91精品色在线| 国产麻豆成人av免费视频| 看片在线看免费视频| 日本免费一区二区三区高清不卡| 深爱激情五月婷婷| 色尼玛亚洲综合影院| 国产精品1区2区在线观看.| 国产主播在线观看一区二区| 俺也久久电影网| 久久人妻av系列| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 亚洲av.av天堂| 久久久久九九精品影院| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 极品教师在线免费播放| 亚洲男人的天堂狠狠| 在线观看舔阴道视频| 日本-黄色视频高清免费观看| 国语自产精品视频在线第100页| 少妇丰满av| 嫩草影院入口| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 亚洲第一区二区三区不卡| 亚洲av免费在线观看| 亚洲四区av| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 午夜福利在线观看免费完整高清在 | 国模一区二区三区四区视频| 精品一区二区三区视频在线| 老司机福利观看| 韩国av一区二区三区四区| 深夜a级毛片| 日韩av在线大香蕉| 国产色爽女视频免费观看| 国产极品精品免费视频能看的| 亚洲精品色激情综合| av女优亚洲男人天堂| 日韩一区二区视频免费看| 日韩精品青青久久久久久| 国产一区二区三区在线臀色熟女| 美女高潮的动态| 少妇熟女aⅴ在线视频| 男人舔女人下体高潮全视频| 99久久精品国产国产毛片| 联通29元200g的流量卡| 国产男靠女视频免费网站| 搡老妇女老女人老熟妇| 亚洲天堂国产精品一区在线| 又粗又爽又猛毛片免费看| av在线天堂中文字幕| 欧美成人免费av一区二区三区| 成年版毛片免费区| 天堂动漫精品| 欧美3d第一页| 99视频精品全部免费 在线| 国产精品一区二区三区四区久久| 最新在线观看一区二区三区| 99视频精品全部免费 在线| 免费高清视频大片| 欧美色欧美亚洲另类二区| 日本熟妇午夜| 欧美黑人欧美精品刺激| 美女 人体艺术 gogo| 欧美日韩国产亚洲二区| 久久精品久久久久久噜噜老黄 | 国产乱人视频| 亚洲黑人精品在线| 欧美最黄视频在线播放免费| 最好的美女福利视频网| 性插视频无遮挡在线免费观看| 乱码一卡2卡4卡精品| 日本黄大片高清| or卡值多少钱| 国产大屁股一区二区在线视频| 国内精品美女久久久久久| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 免费看av在线观看网站| 永久网站在线| 欧美日韩乱码在线| 在线看三级毛片| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 不卡一级毛片| www日本黄色视频网| 天堂√8在线中文| 亚洲精华国产精华精| 蜜桃亚洲精品一区二区三区| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 日本黄色视频三级网站网址| 日韩中字成人| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 99久久精品国产国产毛片| 校园春色视频在线观看| 国产成人一区二区在线| 精品人妻偷拍中文字幕| 精品乱码久久久久久99久播| av视频在线观看入口| 麻豆av噜噜一区二区三区| 国产精品野战在线观看| av国产免费在线观看| 国模一区二区三区四区视频| 欧美日韩国产亚洲二区| 波多野结衣高清作品| 两人在一起打扑克的视频| 一个人看的www免费观看视频| 国产高清视频在线观看网站| 欧美另类亚洲清纯唯美| 日本免费一区二区三区高清不卡| 午夜福利在线观看吧| 欧美最黄视频在线播放免费| 久久这里只有精品中国| xxxwww97欧美| 熟女电影av网| 91在线精品国自产拍蜜月| 日本一本二区三区精品| 亚洲欧美日韩无卡精品| 在线免费十八禁| 国产精品亚洲美女久久久| 日日撸夜夜添| 99久国产av精品| 精品一区二区三区视频在线观看免费| 精品免费久久久久久久清纯| 亚洲人成网站高清观看| 黄片wwwwww| 国产亚洲精品久久久com| 色综合婷婷激情| 男人舔女人下体高潮全视频| 国产日本99.免费观看| h日本视频在线播放| 国产黄a三级三级三级人| 成人二区视频| 日本-黄色视频高清免费观看| 99九九线精品视频在线观看视频| 99久久成人亚洲精品观看| 又粗又爽又猛毛片免费看| 色播亚洲综合网| 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 国产精品无大码| 亚洲va在线va天堂va国产| 欧美日本视频| 91麻豆精品激情在线观看国产| aaaaa片日本免费| 免费av不卡在线播放| 色综合站精品国产| 久久精品国产亚洲av天美| 午夜福利高清视频| 性色avwww在线观看| 亚洲成av人片在线播放无| 99久久精品热视频| 干丝袜人妻中文字幕| 婷婷亚洲欧美| 国产精品久久久久久精品电影| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 在线观看舔阴道视频| 国产亚洲欧美98| 老女人水多毛片| 亚洲色图av天堂| 亚洲精品一区av在线观看| 美女黄网站色视频| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 精品无人区乱码1区二区| av专区在线播放| 国产精品综合久久久久久久免费| 十八禁网站免费在线| 亚洲欧美清纯卡通| 中文字幕久久专区| 日韩在线高清观看一区二区三区 | 午夜免费成人在线视频| 色综合站精品国产| aaaaa片日本免费| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看| 亚洲精品亚洲一区二区| 国产高清视频在线观看网站| 一区二区三区免费毛片| 色av中文字幕| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 黄色欧美视频在线观看| 一级黄色大片毛片| 91麻豆精品激情在线观看国产| 欧美成人性av电影在线观看| 亚洲欧美精品综合久久99| 少妇高潮的动态图| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆| 久久午夜福利片| 国产 一区 欧美 日韩| 日本免费一区二区三区高清不卡| 欧美成人一区二区免费高清观看| 少妇高潮的动态图| 我要看日韩黄色一级片| av专区在线播放| 嫁个100分男人电影在线观看| 俄罗斯特黄特色一大片| av黄色大香蕉| 无遮挡黄片免费观看| 国产精品嫩草影院av在线观看 | 国产亚洲91精品色在线| 老女人水多毛片| 黄片wwwwww| 午夜激情福利司机影院| 国产老妇女一区| 超碰av人人做人人爽久久| 精品久久久噜噜| 99久久精品热视频| 免费看av在线观看网站| 亚洲精品一区av在线观看| 最近在线观看免费完整版| 国产精品国产高清国产av| a级毛片a级免费在线| 九色国产91popny在线| 久久精品国产自在天天线| 国内精品久久久久久久电影| ponron亚洲| 亚洲精品久久国产高清桃花| 亚洲最大成人中文| 国产精品女同一区二区软件 | 天美传媒精品一区二区| 中文资源天堂在线| 丰满乱子伦码专区| 美女被艹到高潮喷水动态| 香蕉av资源在线| 99久国产av精品| 神马国产精品三级电影在线观看| 欧美xxxx性猛交bbbb| 一区二区三区激情视频| 一个人观看的视频www高清免费观看| 人人妻人人看人人澡| 88av欧美| 观看免费一级毛片| 免费av毛片视频| 老司机福利观看| 免费看a级黄色片| 成人性生交大片免费视频hd| 国产熟女欧美一区二区| 日韩高清综合在线| 一级黄色大片毛片| 日韩欧美精品免费久久| 黄色日韩在线| 日本 欧美在线| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| or卡值多少钱| 91在线观看av| 国产精品精品国产色婷婷| 日日夜夜操网爽| 久久久成人免费电影| 久久草成人影院| 欧美+亚洲+日韩+国产| 国产欧美日韩一区二区精品| 国产精品一区二区性色av| 成人无遮挡网站| 日韩,欧美,国产一区二区三区 | 免费av不卡在线播放| 久久6这里有精品| 国产精品亚洲美女久久久| 亚洲精品国产成人久久av| 免费在线观看日本一区| 天堂√8在线中文| 久久久久久久亚洲中文字幕| 国产91精品成人一区二区三区| 欧美极品一区二区三区四区| 婷婷色综合大香蕉| 韩国av在线不卡| 在线观看免费视频日本深夜| 国产精品一区二区三区四区久久| 毛片女人毛片| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 亚洲精品影视一区二区三区av| 又爽又黄a免费视频| 欧美精品啪啪一区二区三区| 天堂动漫精品| 国内精品久久久久久久电影| 久久久久久久久中文| 色哟哟哟哟哟哟| 我的女老师完整版在线观看| 久久午夜福利片| 亚洲三级黄色毛片| 精品人妻偷拍中文字幕| 天美传媒精品一区二区| 真实男女啪啪啪动态图| 又粗又爽又猛毛片免费看| 99国产精品一区二区蜜桃av| 精品久久久噜噜| 亚洲成人精品中文字幕电影| 久久午夜福利片| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 黄片wwwwww| 最近在线观看免费完整版| 欧美日韩瑟瑟在线播放| 国产精品一及| 亚洲成a人片在线一区二区| 麻豆成人av在线观看| 欧美一区二区亚洲| 九色国产91popny在线| 国产一区二区三区av在线 | 麻豆久久精品国产亚洲av| 国产伦人伦偷精品视频| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 亚洲成人免费电影在线观看| 黄色日韩在线| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 免费看日本二区| 国产黄片美女视频| 久久这里只有精品中国| 国产成人aa在线观看| 成人永久免费在线观看视频| avwww免费| 啪啪无遮挡十八禁网站| 99久久成人亚洲精品观看| 亚洲 国产 在线| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频 | 成人av一区二区三区在线看| 丝袜美腿在线中文| 午夜免费男女啪啪视频观看 | 少妇的逼好多水| 精品日产1卡2卡| 午夜福利高清视频| 精品久久久久久久末码| 亚洲精华国产精华液的使用体验 | 欧美精品啪啪一区二区三区| 床上黄色一级片| 久久精品国产亚洲av天美| 神马国产精品三级电影在线观看| 嫁个100分男人电影在线观看| 久久精品国产亚洲av涩爱 | 国内精品美女久久久久久| 久久久色成人| 国产三级中文精品| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 国产精品福利在线免费观看| 99久国产av精品| 午夜福利欧美成人| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 国产在视频线在精品| 免费电影在线观看免费观看| 淫妇啪啪啪对白视频| 国产男人的电影天堂91| 国产伦精品一区二区三区四那| 淫秽高清视频在线观看| 不卡视频在线观看欧美| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频 | 91麻豆av在线| 中文亚洲av片在线观看爽| 色综合站精品国产| 男人狂女人下面高潮的视频| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 精品久久国产蜜桃| 久久久久久久久久久丰满 | 精品免费久久久久久久清纯| 成人欧美大片| 亚洲综合色惰| 91精品国产九色| 成人毛片a级毛片在线播放| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 亚洲无线观看免费| 亚洲自偷自拍三级| 国产久久久一区二区三区| 自拍偷自拍亚洲精品老妇| 真人一进一出gif抽搐免费| 伦理电影大哥的女人| 我要看日韩黄色一级片| 国产成人a区在线观看| 男女下面进入的视频免费午夜| 久久精品国产亚洲网站| 999久久久精品免费观看国产| 亚洲黑人精品在线| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片 | 中文在线观看免费www的网站| 国产三级中文精品| 最近在线观看免费完整版| 精品不卡国产一区二区三区| 91久久精品国产一区二区成人| 赤兔流量卡办理| 中文字幕熟女人妻在线| 欧美日韩瑟瑟在线播放| 一本久久中文字幕| ponron亚洲| 日本黄色片子视频| 草草在线视频免费看| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 国产精品人妻久久久影院| 免费一级毛片在线播放高清视频| 我要搜黄色片| 国产高清不卡午夜福利| 成人性生交大片免费视频hd| 观看美女的网站| 国产精品人妻久久久久久| 69人妻影院| 变态另类成人亚洲欧美熟女| 国产淫片久久久久久久久| 日日啪夜夜撸| 精品99又大又爽又粗少妇毛片 | 成人欧美大片| 一夜夜www| 在线a可以看的网站| 毛片女人毛片| 免费看a级黄色片| 99热这里只有精品一区| 久久久久久久久久黄片| 中文字幕高清在线视频| 丝袜美腿在线中文| 三级国产精品欧美在线观看| 亚洲一区高清亚洲精品| 国产伦精品一区二区三区视频9| 午夜精品一区二区三区免费看| 国国产精品蜜臀av免费| 欧美激情久久久久久爽电影| 午夜精品在线福利| 精品人妻1区二区| 亚洲男人的天堂狠狠| 精品午夜福利在线看| 91在线观看av| 午夜福利在线观看吧| 国产高清视频在线播放一区| 欧美丝袜亚洲另类 | 免费观看精品视频网站| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 国产精品98久久久久久宅男小说| 国产真实乱freesex| 精品久久久久久,| 级片在线观看| 亚洲最大成人av| 国产精品一区二区三区四区免费观看 | 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 22中文网久久字幕| 中出人妻视频一区二区| 国产精品人妻久久久影院| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看| 午夜福利在线观看吧| 久久热精品热| 欧美另类亚洲清纯唯美| 九色成人免费人妻av| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 春色校园在线视频观看| av中文乱码字幕在线| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 久久精品影院6| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 99久久精品国产国产毛片| 精品人妻1区二区| 色尼玛亚洲综合影院| 国产一区二区激情短视频| 黄色配什么色好看| 国内精品宾馆在线| 深夜a级毛片| 九色国产91popny在线| 最近视频中文字幕2019在线8| 欧美不卡视频在线免费观看| 好男人在线观看高清免费视频| 国产真实伦视频高清在线观看 | 九九热线精品视视频播放| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 日本欧美国产在线视频| 亚洲国产精品sss在线观看| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| a级毛片免费高清观看在线播放| 国产精品国产高清国产av| 精品一区二区三区视频在线| 日韩中字成人| 国产精品电影一区二区三区| 91久久精品国产一区二区成人| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 欧美成人免费av一区二区三区| 国产亚洲91精品色在线| 亚洲国产精品合色在线| 欧美色视频一区免费| 搡老岳熟女国产| 淫妇啪啪啪对白视频| 日本免费a在线| 欧美三级亚洲精品| 色视频www国产| 亚洲av.av天堂| 中文资源天堂在线| 午夜福利视频1000在线观看| 亚洲美女黄片视频| 国产成人a区在线观看| 天美传媒精品一区二区| 三级国产精品欧美在线观看| 老司机福利观看| 精品久久久久久久久av| 成人国产综合亚洲| 可以在线观看的亚洲视频| 国产主播在线观看一区二区| 久久久久久久久中文| 在线观看午夜福利视频| 免费看a级黄色片| 十八禁国产超污无遮挡网站| 天美传媒精品一区二区| 免费在线观看影片大全网站| 午夜福利成人在线免费观看| 国产一区二区亚洲精品在线观看| 波野结衣二区三区在线| 韩国av在线不卡| 国产精品,欧美在线| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 最近在线观看免费完整版| 少妇丰满av| 午夜视频国产福利| 欧美成人一区二区免费高清观看| 最好的美女福利视频网| 天堂网av新在线| 99国产精品一区二区蜜桃av| 国产乱人视频| av黄色大香蕉| 我要搜黄色片| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 日韩强制内射视频| 亚洲国产高清在线一区二区三| 久久草成人影院| 亚洲精品粉嫩美女一区| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 一级黄片播放器| 久久久久久久久久黄片| 黄色配什么色好看| 午夜激情福利司机影院| 在线免费观看的www视频| 久久精品国产亚洲av涩爱 | 嫁个100分男人电影在线观看| 成人三级黄色视频| 可以在线观看毛片的网站| 中亚洲国语对白在线视频| 久久久午夜欧美精品| 国产精品一区二区免费欧美| 久久6这里有精品| 波多野结衣高清无吗| 日本一本二区三区精品| 欧美在线一区亚洲| 99国产极品粉嫩在线观看| 亚洲在线观看片| 男女视频在线观看网站免费| 亚洲精品一区av在线观看| 中文字幕久久专区| 精品久久久久久久末码| 国产三级中文精品| 91麻豆av在线| 在线免费观看的www视频| 九九爱精品视频在线观看| 久久精品国产亚洲av涩爱 | 国产精品98久久久久久宅男小说| 麻豆成人午夜福利视频| www日本黄色视频网| 国产色婷婷99| 亚洲av一区综合| 少妇高潮的动态图| 亚洲欧美日韩高清专用| 色在线成人网| 色尼玛亚洲综合影院| 久久久久久久午夜电影| 网址你懂的国产日韩在线|