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    胃癌組織中B7-H1的表達(dá)及臨床意義研究

    2016-12-24 02:38:05王戰(zhàn)偉趙輝韓少良
    浙江醫(yī)學(xué) 2016年1期
    關(guān)鍵詞:陰性胃癌淋巴結(jié)

    王戰(zhàn)偉 趙輝 韓少良

    胃癌組織中B7-H1的表達(dá)及臨床意義研究

    王戰(zhàn)偉 趙輝 韓少良

    目的 檢測人體胃癌組織中B7-H1的表達(dá),探討其與患者臨床病理特征的關(guān)系及對預(yù)后的影響。方法 采用免疫組化染色法檢測胃癌組織中B7-H1的表達(dá),分析其在胃癌組織中的陽性表達(dá)率與患者臨床病理特征之間的關(guān)系,并繪制患者術(shù)后生存曲線,評價B7-H1表達(dá)對預(yù)后的影響。結(jié)果 65例胃癌組織中癌細(xì)胞的細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)以及部分腫瘤組織浸潤的淋巴管及淋巴細(xì)胞中均有檢測到B7-H1的陽性表達(dá),陽性率為36.9%。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移或脈管內(nèi)有癌栓的患者B7-H1陽性率較高(均P<0.05)。B7-H1陽性表達(dá)的胃癌患者術(shù)后5年生存率(25.0%)低于陰性表達(dá)的患者(56.1%)(P<0.05)。結(jié)論 B7-H1陽性表達(dá)的胃癌患者易發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移,預(yù)后較差,B7-H1可作為評價胃癌患者預(yù)后的指標(biāo)之一。

    B7-H1蛋白 胃癌 臨床病理特征 預(yù)后

    B7-H1又稱CD274或程序性死亡配體,是近年來發(fā)現(xiàn)的一種免疫共刺激分子,主要表達(dá)在抗原遞呈細(xì)胞上,它與受體結(jié)合后誘導(dǎo)特異性T細(xì)胞凋亡,介導(dǎo)人類腫瘤免疫逃逸進(jìn)而參與腫瘤的發(fā)生及轉(zhuǎn)移[1-2]。目前多種人類實性腫瘤組織中都有發(fā)現(xiàn)B7-H1,其已成為腫瘤免疫治療的新熱點(diǎn)。本研究運(yùn)用免疫組化方法研究胃癌組織中B7-H1的表達(dá),結(jié)合患者臨床資料分析B7-H1與臨床病理特征和預(yù)后的關(guān)系,旨在探索B7-H1在胃癌發(fā)生過程中的免疫作用機(jī)制及其對患者預(yù)后的影響。

    1 資料和方法

    1.1 一般資料 本研究胃癌組織標(biāo)本為溫州醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院普外科2005年4月至2006年7月因胃癌行手術(shù)治療的65例患者。所有患者術(shù)前未行放療或化療,且均有完整的臨床及隨訪資料。其中男51例,女14例;年齡30~81(61.8±10.8)歲;有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者41例,有種植轉(zhuǎn)移或其他臟器轉(zhuǎn)移者9例,脈管內(nèi)有癌栓者29例;胃癌TNM分期Ⅰ期16例,Ⅱ期17例,Ⅲ期23例,Ⅳ期9例。

    1.2 方法

    1.2.1 免疫組化染色 采用SP三步法。主要試劑:小鼠抗人B7-H1(美國eBioscience公司)、羊抗小鼠二抗、山羊血清、DAB顯色劑、過氧化氫封閉液(北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司)。取石蠟標(biāo)本3μm厚連續(xù)切片,二甲苯脫蠟,梯度乙醇水化,PBS洗3次(每次5min,下同),抗原修復(fù)液微波熱抗原修復(fù)(中低火15min),PBS洗3次,3%過氧化氫室溫孵育10min抑制內(nèi)源性過氧化物酶的活性,PBS洗3次,山羊血清封閉37℃恒溫箱孵育20min,傾去血清后直接加一抗(B7-H1稀釋濃度為1∶40,陰性對照用抗體稀釋液代替一抗),置于4℃冰箱過夜,PBS洗3次,加羊抗小鼠二抗37℃恒溫箱孵育30min后PBS洗3次,DAB顯色,蘇木素核染,脫水,封片。

    1.2.2 檢測結(jié)果判斷 每張切片在×200倍顯微鏡下隨機(jī)選擇5個腫瘤區(qū)域進(jìn)行細(xì)胞計數(shù)。細(xì)胞核被染成藍(lán)色或淡藍(lán)色,而在細(xì)胞膜或細(xì)胞質(zhì)有淡黃色、棕黃色或者褐色顆粒的細(xì)胞為陽性表達(dá)細(xì)胞,細(xì)胞膜及細(xì)胞質(zhì)無著色為陰性細(xì)胞。染色結(jié)果評分標(biāo)準(zhǔn):(1)無著色為0分,淡黃色為1分,棕黃色為2分,棕褐色為3分;(2)陽性細(xì)胞占比<5%為0分,5%~25%為1分,26%~50%為2分,51%~75%為3分,>75%為4分。標(biāo)本檢測結(jié)果判斷:兩項評分相加<2分為陰性(-),2~3分為弱陽性(+),4~5分為中度陽性(++),6~7分為強(qiáng)陽性(+++);結(jié)果≥2分設(shè)為陽性組,<2分設(shè)為陰性組。

    1.3 隨訪 所有患者術(shù)后均按常規(guī)診療規(guī)范定期治療和隨診,采用電話隨訪的方式。生存時間從手術(shù)日開始算起至死亡日或最后隨訪日(2012年1月),以月為單位計算。

    1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS15.0統(tǒng)計軟件;計數(shù)資料以構(gòu)成比表示,兩組間比較采用χ2檢驗或Fisher確切概率法;采用Kaplan-Meier法繪制兩組患者生存曲線,兩組間中位生存時間的比較采用log-rank檢驗。

    2 結(jié)果

    2.1 胃癌組織中B7-H1的表達(dá)情況 見圖1。

    圖1 胃癌組織中B7-H1的表達(dá)情況(SP三步法染色,×400)

    由圖1可見,胃癌組織中B7-H1主要表達(dá)于細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì),呈棕黃色顆粒或褐黃色粗顆粒。

    2.2 兩組患者胃癌組織中B7-H1的表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系 見表1。

    由表1可見,65例標(biāo)本中有陽性標(biāo)本24例(陽性率36.9%),陽性組患者脈管內(nèi)癌栓及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移發(fā)生率均高于陰性組患者。

    2.3 兩組患者術(shù)后5年生存情況的比較 截止隨訪終止日,本研究患者中位生存時間47個月(1~79個月);兩組患者術(shù)后生存曲線見圖2,陽性組患者術(shù)后5年中位生存時間短于陰性組患者(P<0.05);其5年生存率亦低于陰性組患者,見表2。

    圖2 兩組患者術(shù)后生存曲線的比較

    表2 兩組患者術(shù)后5年生存率的比較[例(%)]

    3 討論

    B7-H1是第3個被發(fā)現(xiàn)的B7家族成員,屬于負(fù)性共刺激分子,主要表達(dá)在細(xì)胞質(zhì)及細(xì)胞膜上,且受到多種細(xì)胞因子及腫瘤抗原的調(diào)節(jié)。B7-H1在正常胃黏膜組織中幾乎不表達(dá)[3],本研究檢測到B7-H1在胃癌組織中呈高表達(dá),且在伴有脈管內(nèi)癌栓及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的胃癌患者中的陽性表達(dá)率較高。這可能與B7-H1介導(dǎo)的腫瘤細(xì)胞免疫逃逸有關(guān),提示B7-H1可能參與了胃癌的發(fā)生,且與腫瘤浸潤淋巴細(xì)胞及淋巴結(jié)中B7-H1及其受體PD-1的特異性高表達(dá)有關(guān)[4]。本研究亦發(fā)現(xiàn)陽性組患者術(shù)后5年中位生存時間短于陰性組患者,其術(shù)后5年生存率低于陰性組患者,可能是由于B7-H1高表達(dá)患者抗腫瘤免疫功能發(fā)生障礙,更容易發(fā)生腫瘤轉(zhuǎn)移,預(yù)后較差,這從側(cè)面反映出B7-H1的高表達(dá)可能是影響胃癌患者預(yù)后的危險因素。

    目前公認(rèn)抗腫瘤免疫功能障礙是胃癌形成機(jī)制之一,而B7-H1/PD-1信號通路在該過程中起到重要的作用,其參與調(diào)節(jié)人體細(xì)胞及體液免疫,尤其是細(xì)胞免疫。在人類多種免疫細(xì)胞及腫瘤細(xì)胞表面已檢測到B7-H1的表達(dá),并發(fā)現(xiàn)其與人類腫瘤免疫逃逸有著密切的關(guān)系。腫瘤細(xì)胞及腫瘤浸潤細(xì)胞上高表達(dá)的B7-H1通過與受體PD-1結(jié)合,傳遞抑制信號,調(diào)節(jié)Fas/FasL信號通路使激活的T細(xì)胞凋亡、失活或發(fā)生功能耗竭,并誘導(dǎo)具有抗腫瘤作用的特異性細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞發(fā)生凋亡;B7-H1也可抑制穿孔素的產(chǎn)生,阻礙CD8+T細(xì)胞對腫瘤細(xì)胞的特異性殺傷;其還可通過抑制細(xì)胞毒性T細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞溶解作用及限制自然殺傷細(xì)胞的作用,使腫瘤細(xì)胞躲過人體免疫系統(tǒng)的監(jiān)視,發(fā)生免疫逃逸,促進(jìn)腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移[5-7]。

    綜上所述,B7-H1介導(dǎo)的腫瘤免疫逃逸參與了腫瘤的發(fā)生及轉(zhuǎn)移,根據(jù)本研究結(jié)果推測B7-H1可作為評估胃癌患者預(yù)后的指標(biāo)之一,同時B7-H1介導(dǎo)的免疫逃逸機(jī)制研究有可能成為一項具有良好前景的抗腫瘤研究方向。

    [1]Zou W,Chen L.Inhibitory B7-family molecules in the tumour microenvironment[J].Nature Reviews Immunology,2008,8(6):467-477.

    [2]Seliger B,Quandt D.The expression,function,and clinical relevance of B7 family members in cancer[J].Cancer Immunology Immunotherapy Cii,2012,61(8):1327-1341.

    [3]Wu C,Zhu Y,Jiang J,et al.Immunohistochemical localization of programmed death-1 ligand-1(PD-L1)in gastric carcinoma and its clinicalsignificance[J].Acta histochemica,2006,108(1):19-24.

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    Expression of B7-H1 protein in gastric cancer and its clinical significance


    WANG Zhanwei,ZHAO Hui,HAN Shaoliang.Department of General Surgery,the First Affiliated Hospital of Wenzhou Medical University,Wenzhou 325000,China

    Objective To investigate the expression ofB7-H1 in gastric carcinoma and its clinicopathological significance. Methods Immunohistochemical staining was used to detect the expression of B7-H1 protein in gastric cancer.The relationship between the B7-H1 protein expression and clinicopathological parameters was analyzed. Results Immunohistochemical staining revealed that B7-H1 was expressed on membrane,cytoplasm of cancer cells and tumor infiltrating lymphocytes.B7-H1 protein in gastric cancer was correlated with lymph node metastasis and vessel infiltration(P<0.05).The postoperative 5-year survival rate of patients with negative B7-H1 expression(25.0%)was lower than that of those with positive B7-H1 expression (56.1%,P<0.05). Conclusion Gastric cancer patients with B7-H1 positive expression are likely to have lymph node metastasis and poor prognosis,indicating that it might be used as an indicator ofprognosis for gastric cancer patients.

    B7-H1 protein Gastric cancer Clinicopathologic feature Prognosis

    2015-09-24)

    (本文編輯:李媚)

    325000 溫州醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院胃腸外科(王戰(zhàn)偉為研究生,現(xiàn)在湖州市中心醫(yī)院工作)

    韓少良,E-mail:SLhan88@hotmail.com

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