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    正交設(shè)計法探討橘皮多糖的提取

    2016-12-23 16:18:40張星和張珊珊
    青春歲月 2016年22期
    關(guān)鍵詞:橘皮酶法

    張星和+張珊珊

    【摘要】用正交實驗法討論從橘皮中提取多糖的最佳實驗條件,探討了不同提取時間、酶解溫度、pH和料液比(酶用量)等條件對提取得率的影響,結(jié)果表明,在酶解時間75min,料液比1:60g/mL,酶解溫度45℃,pH為5.0時多糖的提取率最高。

    【關(guān)鍵詞】酶法;橘皮;正交實驗設(shè)計

    多糖又叫多聚糖(polysaceharides,Ps),是由多個相同或不相同的單糖以糖苷鍵相連而成的極性復(fù)雜大分子,分子量為數(shù)萬,數(shù)十萬到數(shù)百萬,甚至有的達(dá)上千萬。多糖有促進(jìn)免疫調(diào)節(jié)、抗心肌缺血、抑制腫瘤、抗癌及降低血糖等生物活性。目前多糖的提取有熱水提醇沉法、水浸提法、酶解提取法、微波輔助提取法和超聲波輔助提取法等。結(jié)合試驗室條件,試驗采用纖維素酶法對橘皮中的多糖進(jìn)行提取,并以多糖得率為指標(biāo)通過正交設(shè)計優(yōu)選最佳提取工藝。

    一、材料與方法

    1、材料與設(shè)備

    橘子購于保山集市,購回后將橘皮取下,洗凈,切小,將其置于陽光充足的地方曬干;纖維素酶(BR,30U/mg,上海博奧生物科技有限公司);其他試劑均為分析純。

    HH-S26s數(shù)顯恒溫水浴鍋;GUO HUA 800低數(shù)離心機(jī);JH-14-07 A-14-07-161型可見分光光度計;DFT-200型手提式高速萬能粉碎機(jī);DHG-9075A型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱等。

    2、多糖含量的測定

    目前,多糖的測定方法主要有蒽酮硫酸法和苯酚硫酸法,本實驗采用第二種方法,以干燥至恒重的葡萄糖為標(biāo)準(zhǔn)品。

    3、橘皮多糖的制備

    準(zhǔn)確稱取過60目篩的橘皮若干于圓底燒瓶中,加少量蒸餾水浸泡24h,加入一定量的酶溶液并調(diào)pH值,放入恒溫水浴鍋中酶解一段時間后取出,離心得上清液。再將剩余沉淀重復(fù)酶解兩次,合并上清液。放入90℃的水浴鍋中滅活10min,冷卻。用80%乙醇沉淀,離心得粗多糖,待顯色后于490nm出測定吸光度A。

    4、粗多糖提取率計算

    多糖得率(%)=(多糖含量/原料重量)*100%

    5、酶法提取的正交實驗

    影響多糖提取率的因素很多,如酶的添加量,反應(yīng)時間,反應(yīng)溫度及其pH值。針對這些因素,采用四因素三水平的正交實驗確定橘皮多糖酶解法提取的最佳條件,具體參數(shù)見表1。

    表1:因素水平表

    二、結(jié)果與討論

    1、葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線

    由實驗得出的結(jié)果以葡萄糖濃度為橫坐標(biāo)(x),吸光度(y)為縱坐標(biāo)繪制葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖1所示。

    圖1:葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線

    標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程為y=0.5021x+0.0163,R2=0.994,線性關(guān)系良好。

    2、酶法提取條件的優(yōu)化

    取樣品每份0.500g,按照L9(34)分9組實驗,得到的數(shù)據(jù)如表2所示。

    表2:正交表和實驗分析結(jié)果

    由直觀分析可知,RC>RA>RB>RD,四個影響多糖提取率的因素主次順序,分別是C>A>B>D,即酶的添加量>酶解溫度>pH>酶解時間,最佳參數(shù)為A2B2C3D2,即以料液比1:60,在pH為5.0的緩沖溶液中,回流提取75min,提取溫度定為45℃,反復(fù)提取三次,多糖提取率最高。按照最佳反應(yīng)條件進(jìn)行三次驗證實驗,結(jié)果橘皮多糖的提取率為27.10%,較最高5號樣26.94%略高。

    三、結(jié)論

    本文采用纖維素酶解新方法提取橘皮多糖,該工藝通過酶水解破壞植物細(xì)胞壁的作用,可以使細(xì)胞內(nèi)的多糖物質(zhì)充分溶出,從而顯著提高了橘皮多糖提取率。

    為進(jìn)一步優(yōu)化酶解法提取多糖實驗條件,本實驗用L9(34)正交表考察了酶添加量(液料比)、酶解溫度酶解時間以及pH4個因素對提取率的影響。在最佳條件下,纖維素酶法提取橘皮多糖的提取率為27.10%。

    【參考文獻(xiàn)】

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    [2] 趙 ?宇, 彭曉霞. 多糖類化合物提取工藝研究[J]. 醫(yī)藥衛(wèi)生, 2006,35(2):223-224.

    [3] 劉曉涵. 蒽酮硫酸法與苯酚硫酸法測定枸杞子中多糖含量的比較[J]. 食品科技, 2009,34(9):270-272.

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