紅花提取工藝篩選考察

金玉翠，張惠惠，尹 雷，王少平，代 龍，李凌軍*

(1.山東中醫(yī)藥大學(xué)，濟(jì)南 250355；2.安徽生物肽產(chǎn)業(yè)研究院有限公司，安徽 蕪湖 241000)

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紅花提取工藝篩選考察

金玉翠1，張惠惠1，尹 雷2，王少平1，代 龍1，李凌軍1*

(1.山東中醫(yī)藥大學(xué)，濟(jì)南 250355；2.安徽生物肽產(chǎn)業(yè)研究院有限公司，安徽 蕪湖 241000)

目的 采用不同方式對紅花藥材進(jìn)行提取，得出最佳提取工藝，并對藥液進(jìn)行純化考察，得出最佳參數(shù)。方法 采用水提取，乙醇提取，醇提水沉等方式對紅花進(jìn)行提取，以羥基紅花黃色素A提取率作為指標(biāo)，比較不同提取方式的抗凝血作用，得出最佳提取方式。并對藥液進(jìn)行濃縮條件和醇沉條件考察，得出最佳工藝參數(shù)。結(jié)果 對紅花有效成分提取時采用水提取效果最佳，羥基紅花黃色素A提取率可以達(dá)到86.11%，可明顯延長大鼠血漿凝血酶時間、凝血酶原時間、活化部分凝血活酶時間,得出當(dāng)加水8倍量,每次煎煮0.5 h，煎煮2次，紅花提取液中有效成分提取最好。同時紅花藥液采用醇沉處理時，70%乙醇進(jìn)行沉淀，除雜率最佳，成分保留率最好，采用減壓濃縮時，溫度控制為65 ℃，壓力在-0.07 MPa時，濃縮效果最佳。有效成分破壞率最小。結(jié)論 紅花采用水作為溶劑進(jìn)行提取，方法簡便易行，適合大生產(chǎn)操作。

紅花；提取率；除雜率；羥基紅花黃色素A

紅花為菊科植物紅花CarthamustinctoriusL.的干燥花。具有活血通經(jīng)，散瘀止痛等功效，用于經(jīng)閉，痛經(jīng)，惡露不行，癥瘕痞塊等疾病的治療[1]。現(xiàn)代研究[2-4]表明其有效成分為羥基紅花黃色素A,具有擴(kuò)張血管、抑制血小板聚集、抗炎等多種藥理作用，主治缺血性腦血管疾病、冠心病等。羥基紅花黃色素A在提取過程中易破壞造成分解，因此造成其提取率低[5-8]。筆者主要考察不同提取與處理方式對羥基紅花黃色素A的提取效果，得出最佳工藝以用于大生產(chǎn)。

1 材料

1.1 儀器 R1002型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(上海申順生物科技有限公司)；LC-2010A型高效液相色譜儀(日本島津)；KQ-500E型超聲波提取器(昆山市超聲儀器有限公司)；AB135-S十萬分之一型天平(瑞士梅特勒-托利多儀器有限公司)；AL-204型萬分之一天平(瑞士梅特勒-托利多儀器有限公司)；PK-S24型電熱恒溫水浴鍋(上海精宏實驗設(shè)備有限公司)。

1.2 試劑 羥基紅花黃色素A對照品：購自中國藥品生物制品檢定所(批號：20120809，供含量測定用)，無水乙醇為分析純，去離子水，甲醇、乙腈(德國MERCK公司)、磷酸(美國TEDIA公司)、乙酸(美國TEDIA公司)等為色譜純，凝血酶原時間(PT)測定試劑盒、凝血酶時間(TT)測定試劑盒、活化部分凝血活酶時間(APTT)測定試劑盒(上海通蔚生物科技有限公司)，戊巴比妥鈉、枸櫞酸鈉(上海西唐生物公司)。紅花藥材(購于亳州，經(jīng)山東中醫(yī)藥大學(xué)生藥學(xué)教授周鳳琴老師鑒定為道地藥材)。

1.3 實驗動物 SD小鼠，體質(zhì)量18～20 g，購于山東中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物中心。

2 方法

2.1 不同提取方式的考察 水溫浸直接提取：取紅花藥材100 g，加水8倍量，溫浸2 次，溫度60 ℃，每次0.5 h。合并藥液，高速離心5 min(4 500 r/min)。量取50 mL，蒸干。25%甲醇超聲30 min，稱重，25%甲醇補重，定容至50 mL，作為樣品1。

50%乙醇提?。喝〖t花藥材100 g，加50%乙醇8倍量，60 ℃回流2次，每次0.5 h，合并乙醇液，減壓回收乙醇至無醇味，蒸干，取干膏適量，加甲醇溶解定容至50 mL，作為樣品2。

醇提水沉提?。喝〖t花藥材100 g，加90%乙醇回流提取，合并乙醇液，加水至70%乙醇。放置過夜，過濾；沉淀蒸干。取沉淀適量，加甲醇定容至50 mL，作為樣品3。

2.2 含量測定結(jié)果

2.2.1 色譜條件 色譜柱：kromasl C18硅膠柱；檢測波長：403 nm；流速1.0 mL/min；柱溫：30 ℃；流動相：甲醇-0.5%磷酸溶液(25∶75)。

2.2.2 對照品溶液配制 取羥基紅花黃色素A對照品適量，精密稱定，加25%甲醇制成每1 mL含0.13 mg的溶液，即得。

2.2.3 樣品實驗數(shù)據(jù) 分別向高效液相中注入樣品1、2、3和對照品溶液各10 μL。分析實驗數(shù)據(jù)得出見表1。

表1 樣品數(shù)據(jù)

注:按照中國藥典紅花藥材項下含量測定方法，紅花藥材中羥基紅花黃色素A含量為1.56%，符合藥典規(guī)定。提取率=實際提取量/相應(yīng)成分在樣品中的含量

由表1數(shù)據(jù)可知，采用3種不同提取方式對紅花藥材進(jìn)行提取時，采用水溫浸直接提取時，羥基紅花黃色素A提取率最高。2.3 抗凝血試驗 取SD小鼠40只,每組10只，隨機(jī)分為空白對照組、水溫浸提取組、50%乙醇提取組、醇提水沉組。采用灌胃給藥的方式。空白對照組給予1 g/kg生理鹽水，其余各組動物給予1.5 g/kg(生藥/體質(zhì)量)紅花提取液，連續(xù)灌胃5 d，第5天給藥1 h后，各鼠腹腔注射戊巴比妥鈉40 mg/kg麻醉，心臟取血，置入含3.8%枸櫞酸鈉的離心管中，動物血與抗凝劑的比例嚴(yán)格控制為9∶1，混勻后以3 000 r/min離心15 min，得血小板血漿，置冰浴中備用，用凝固比濁法[9]測定凝血酶時間(TT)、凝血酶原時間(PT)、活化部分凝血活酶時間(APTT)。結(jié)果見表2。

表2 不同提取方式抗凝血實驗結(jié)果(n=10) s

注:與空白對照組比較,#P<0.05，##P<0.01

結(jié)果可知，采用水溫浸直接提取時，提取液的抗凝效果最佳，結(jié)合羥基紅花黃色素A的提取率，采用水溫浸方法對紅花藥材進(jìn)行提取。

2.4 正交設(shè)計優(yōu)選條件 試驗中采用水溫浸對紅花藥材進(jìn)行提取，但是羥基紅花黃色素A長時間受熱易分解，同時水提取過程中加水量，時間都會對提取造成很大影響。因此采用正交實驗對紅花水溫浸提取進(jìn)行考察。

2.4.1 因素水平表的設(shè)計 見表3。

表3 紅花提取工藝因素水平

2.4.2 正交試驗結(jié)果 見表4，表5。

表4 紅花提取工藝正交試驗結(jié)果

表5 正交試驗方差分析結(jié)果

注:#P<0.05

由以上數(shù)據(jù)分析可知:A、B、C三因素影響羥基紅花黃色素A提取率的主次順序為：A>B>C，即提取時間>提取次數(shù) >溶劑倍量，結(jié)果證明了羥基紅花黃色素A久煎被破壞，則最佳提取工藝為：A1B2C2，即加8倍量水，提取2次，每次0.5 h。羥基紅花黃色素A提取率可以達(dá)到85.27%。

2.4.3 提取工藝驗證試驗結(jié)果 結(jié)果表明：水溫浸最佳工藝可行，可以作為紅花的提取工藝。

2.5 濃縮工藝考察結(jié)果 結(jié)果表明：減壓濃縮方式對羥基紅花黃色素A基本沒有破壞，而常壓較大，考慮到受熱時間長會造成有效成分損失，則采用減壓濃縮方式。

2.6 醇沉純化工藝參數(shù)優(yōu)選 結(jié)果表明:對紅花濃縮液進(jìn)行不同濃度醇沉處理，可以降低得膏率，但是對羥基紅花黃色素A轉(zhuǎn)移率基本無影響，當(dāng)乙醇濃度到70%以上得膏率變化不明顯，同時考慮到節(jié)省物料，選擇醇沉到乙醇濃度為70%即可。

3 結(jié)論

采用不同提取工藝對紅花藥材進(jìn)行提取考察，結(jié)果顯示采用直接水溫浸時，紅花中的有效成分提取率和保留率最高，同時對各種提取方法得到的提取液進(jìn)行抗凝實驗[9]。得出水溫浸方法提取紅花時，抗凝效果優(yōu)于其他組別，因此采用直接水溫浸方法對紅花進(jìn)行處理。在實驗過程中也對紅花提取液做濃縮處理。得出最佳濃縮條件。為藥物提取后的純化處理提供了便利。水溫浸直接提取紅花中的有效成分，提取條件容易控制，節(jié)約成本。操作簡單。因此對藥廠大規(guī)模提取提供了方向。

[1]中華人民共和國藥典委員會.中國藥典[M].北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2010.

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Extraction process of safflower screening study

JIN Yucui1,ZHANG Huihui1,YIN Lei2,WANG Shaoping1,DAI Long1,LI Lingjun1*

(1.Shandong University of Traditional Chinese Medicine,Jinan 250355,China;2.Anhui Biological Peptide Industry Research Institute co.,LTD,Wuhu 241000,Anhui Province,China)

Objective To adopt different extraction methods for extraction of safflower medicinal,the extraction process,and liquid purification study,get the optimum parameters.Methods Using water extraction,ethanol extraction,water sedimentation,etc.to extract the safflower medicinal;regard HSYA A extraction rate as indicator to get the optimum extraction method.Concentrated liquid conditions and alcohol precipitation conditions investigated,get optimum process parameters.Results Water extract active of safflower is the best method,the HSYA A extraction rate can reach 86.11%,when using the water eight times the amount of 0.5 hours each boiling,2 times,safflower extract active ingredients is the best.Using alcohol precipitation of the safflower liquid,and precipitated with 70% ethanol,rate of impurity is the best,retention of ingredients is the best.When using concentrated under reduced pressure,the temperature controlled to 65 ℃,the pressure in the -0.07 MPa,and results of concentrated is the best.The rate of the active ingredient damage is the minimum.Conclusion Safflower using water as solvent to extract,the method is simple and easy,suitable for mass production.

safflower;extraction rate;purification rate;HSYA A

10.13463/j.cnki.cczyy.2016.06.013

“十二五”國家科技重大專項課題“四味中藥有效組分治療缺血性中風(fēng)的新藥成藥性研究”(20132X09103002-021)。

金玉翠(1990-)，女，碩士研究生，主要從事中藥新制劑、新劑型研究。

R284.2

A

2095-6258(2016)06-1139-03

輯：張海洋

2016-06-16)

*通信作者：李凌軍，男，副教授，碩士研究生導(dǎo)師，電話-15953176976，電子信箱-lljun66@yahoo.com