中風(fēng)通腑泄熱顆粒的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

董 晗，趙建軍，何 蕊，方春雪，婁婷婷，位 鴻*

(1.吉林大學(xué)第一醫(yī)院老年病科，長春 130021；2.長春中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院，長春 130021)

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·方藥研究·

中風(fēng)通腑泄熱顆粒的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

董 晗1，趙建軍2，何 蕊2，方春雪2，婁婷婷2，位 鴻2*

(1.吉林大學(xué)第一醫(yī)院老年病科，長春 130021；2.長春中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院，長春 130021)

目的 建立中風(fēng)通腑泄熱顆粒的質(zhì)量評價方法。方法 采用薄層色譜法(TLC)對厚樸、大黃、枳實進(jìn)行定性鑒別，以厚樸酚與和厚樸酚作為指標(biāo)成分，采用高效液相色譜法(HPLC)對樣品進(jìn)行含量測定。結(jié)果 薄層色譜鑒別特征斑點(diǎn)清晰，專屬性強(qiáng);厚樸酚進(jìn)樣量在0.101 2～1.012 0 μg范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好，r=1.000 0，計算其平均回收率為97.39%,RSD為1.72%，和厚樸酚進(jìn)樣量在0.105 2～1.052 0 μg范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好，r=1.000 0，計算其平均回收率為95.75%，RSD為2.60%。結(jié)論 本試驗建立的定性及定量方法簡單可行，重復(fù)性好，能有效地控制中風(fēng)通腑泄熱顆粒的質(zhì)量。

中風(fēng)通腑泄熱顆粒；薄層色譜法；高效液相色譜法；質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

中風(fēng)通腑泄熱顆粒是由厚樸、大黃、枳實等多味中藥制成，具有通腑泄熱，軟堅化痰之功。用于中風(fēng)痰熱腑實證，癥見半身不遂，口舌歪斜，伴腹脹，便秘，頭暈?zāi)垦＃┨?，舌質(zhì)紅，苔黃膩。本品厚樸為方中主藥，主要含有酚類成分，以厚樸酚、和厚樸酚為主，約占原藥材的5%～12%。厚樸中的酚類成分藥效作用確切,且性質(zhì)穩(wěn)定，常作為藥材及制劑的含量測定指標(biāo)。為了有效控制本制劑的質(zhì)量,建立了薄層色譜法(TLC)對厚樸、大黃、枳實進(jìn)行定性鑒別，HPLC法同時對中風(fēng)通腑泄熱顆粒中厚樸酚與和厚樸酚的定量測定方法。

1 儀器與試藥

1．1 儀器 高效液相色譜儀日本島津LC-2010A，紫外檢測器，CLASS-VP色譜數(shù)據(jù)工作站，色譜柱：Inertsil ODS-C18(4．6 mm×250 mm，5 μm)。日本島津LC-2010高效液相色譜儀，自動進(jìn)樣系統(tǒng)，紫外檢測器，超聲波清洗機(jī)(天鵬電子新技術(shù)有限公司),DIF-6050型真空干燥箱(上海一恒實驗儀器廠),數(shù)碼照相機(jī)(索尼公司，型號DSC-RX100),硅膠G板(青島海洋化工有限公司)。

1．2 試藥 厚樸酚對照品(批號：111707-201209，供含量測定用，規(guī)格:20 mg，購于中國藥品生物制品檢定所)、和厚樸酚對照品(批號：111707-201206，供含量測定用，規(guī)格:20 mg，購于中國藥品生物制品檢定所)，供含量測定用。甲醇為色譜純，水為超純水；其他試劑均為分析純(北京化工廠)。

2 薄層色譜鑒別

2．1 對照品溶液制備[1]取厚樸酚對照品、和厚樸酚對照品，加甲醇制成每1 mL各含0．1 mg的混合溶液，作為對照品溶液1。取大黃酸對照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作為對照品溶液2。取辛弗林對照品，加甲醇制成每1 mL含0．5 mg的溶液，作為對照品溶液3。

2．2 供試品溶液制備 取批號為20130401、20130402、20130403樣品各5．0 g，依次編號為樣品1、樣品2、樣品3，研細(xì)，加甲醇20 mL，密塞，振搖30 min，濾過，取濾液作為供試品溶液1[2-3]。

取批號為20130401、20130402、20130403樣品各2．0 g,依次編號為樣品1、樣品2、樣品3，加甲醇20 mL，浸泡1 h，濾過，取濾液5 mL，蒸干，殘渣加水10 mL使溶解，再加鹽酸1 mL，加熱回流30 min，立即冷卻，用乙醚分2次振搖提取，每次20 mL，合并乙醚液，蒸干，殘渣加三氯甲烷1 mL使溶解，作為供試品溶液2[4-5]。

取批號為20130401、20130402、20130403樣品各5．0 g，研成細(xì)粉，依次編號為樣品1、樣品2、樣品3，加甲醇20 mL，超聲處理20 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇0．5 mL使溶解，作為供試品溶液3[6-7]。

2．3 對照藥材溶液制備[1]另取厚樸對照藥材0．5 g，按照供試品溶液1的制備方法制成對照藥材溶液1。另取大黃對照藥材0．1 g，按照供試品溶液2的制備方法制成對照藥材溶液2。另取枳實對照藥材0．5 g，按照供試品溶液3的制備方法制成對照藥材溶液3。

2．4 陰性對照液制備 按處方和制備工藝分別制備除去厚樸、大黃、枳實的陰性樣品，按上述供試品溶液制備方法操作，分別得厚樸陰性對照溶液、大黃陰性對照溶液、枳實陰性對照溶液。

2．5 薄層色譜鑒別

2．5．1 厚樸 按照薄層色譜法實驗，吸取上述4種溶液各 5 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-甲醇(17∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以1%香草醛硫酸溶液，在100 ℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰[1]。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。陰性樣品相應(yīng)位置無干擾。

2．5．2 大黃 吸取上述4種溶液各4 μL，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉 為黏合劑的硅膠 H 薄層板上，以石油醚(30～60℃)-甲酸乙酯-甲酸(15∶5∶1)的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365 nm)下檢視[1]。層析結(jié)果：供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的橙黃色熒光主斑點(diǎn)，陰性樣品相應(yīng)位置無干擾。

2．5．3 枳實 吸取上述2種溶液各2 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以正丁醇-冰醋酸-水(4∶1∶5)的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以0．5%茚三酮乙醇溶液，在105 ℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰[1]。供試品色譜中,在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。陰性樣品相應(yīng)位置無干擾。

3 含量測定

本方法參考《中國藥典》2010年版1部厚樸“含量測定”項下方法，以厚樸酚與和厚樸酚為檢測指標(biāo)，采用高效液相色譜法對供試品進(jìn)行含量測定[8-10]。結(jié)果見表1。

表1 厚樸酚、和厚樸酚回收率試驗結(jié)果

4 結(jié)論

本試驗依照《中國藥典》“厚樸”項下的方法，以厚樸酚與和厚樸酚為檢測指標(biāo)，采用TLC、HPLC對中風(fēng)通腑瀉熱顆粒進(jìn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究。

在TLC色譜中，中風(fēng)通腑瀉熱顆粒與對照藥材顯示相同的斑點(diǎn)，檢驗呈陽性。

《中國藥典》規(guī)定，按干燥品計算，含厚樸酚(C18H18O2)與和厚樸酚(C18H18O2)的總量不得少于2．0%。根據(jù)本品3批樣品含量測定結(jié)果，厚樸酚及和厚樸酚總含量測定數(shù)據(jù)平均為5．009 mg/g，考慮實際生產(chǎn)中的損失，將上述結(jié)果下浮20%為4．008 mg/g，經(jīng)測定3批中試樣品的含量均大于4．008 mg/g，故暫定“本品每袋(15．0 g)含厚樸以含厚樸酚(C18H18O2)與和厚樸酚(C18H18O2)的總量計，不得少于60．00 mg/袋”。

以上結(jié)果表明，本方法科學(xué)準(zhǔn)確，可以作為中風(fēng)通腑瀉熱顆粒的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。

[1]中華人民共和國藥典委員會.中國藥典[M].北京:中國醫(yī)藥出版社,2010:345.

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Quality standard of stroke Tongfu Xiere particles

DONG Han1,ZHAO Jianjun2,HE Rui2,FANG Chunxue2,LOU Tingting2,WEI Hong2*

(1.Department of Geriatrics,First Hospital of Jilin University,Changchun 130021,China;2.The Affiliated Hospital to Changchun University of Chinese Medicine,Changchun 130021,China)

Objective To establish the quality evaluation of stroke Tongfu Xiere particles.Methods By TLC on Magnolia,rhubarb,citrus aurantium qualitative identification,using high performance liquid phase chromatography of samples were used to determine the content,Honokiol phenol and Honokiol phenol as an index component.Results TLC characteristics spots were clear,with strong specificity;Honokiol phenol in 0.101 2-1.012 0 μg range and peak area had good linear relation,r=1.000 0.The calculation of the average recovery rate was 97.39%,relative standard deviation was 1.72%.and Honokiol phenol in 0.105 2-1.052 0 μg range and peak area had good linear relation,r=1.000 0.The calculation of the average recovery rate was 95.75%,relative standard deviation was 2.60%.Conclusion In this study,a qualitative and quantitative method is simple and feasible,good repeatability,effectively control the quality of stroke Tongfu Xiere particles.

stroke Tongfu Xiere particles;TLC;HPLC;quality standard

10.13463/j.cnki.cczyy.2016.06.011

吉林省科技支撐計劃項目“治療中風(fēng)病新藥中風(fēng)通腑泄熱顆粒的臨床前研究”(20130206069YY)。

董 晗(1986-)，女，碩士研究生，醫(yī)師，主要從事腦血管病、癡呆研究。

R248.2

A

2095-6258(2016)06-1132-04

輯：張海洋

2015-11-26)

*通信作者：位 鴻，男，主任藥師，電話-13514412139,電子信箱-641538498@qq.com