潘立衛(wèi) 羅澤萍 韋志巧 何燕
(1.河池學(xué)院 化學(xué)與生物工程學(xué)院, 廣西 宜州 546300; 2.廣西大學(xué) 農(nóng)學(xué)院, 廣西 南寧 530000)
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遍山紅總黃酮的含量測(cè)定
潘立衛(wèi)1羅澤萍1韋志巧2何燕1
(1.河池學(xué)院 化學(xué)與生物工程學(xué)院, 廣西 宜州 546300; 2.廣西大學(xué) 農(nóng)學(xué)院, 廣西 南寧 530000)
目的:建立遍山紅中總黃酮含量的測(cè)定方法,為其研究開發(fā)提供科學(xué)依據(jù)。方法:總黃酮的含量采用紫外分光光度法進(jìn)行測(cè)定,以楊梅苷為對(duì)照品,在最大吸收波長500 nm處測(cè)定吸光度。結(jié)果:遍山紅總黃酮的線性范圍為20~120 μg (r=0.999 7),加樣回收率為100.96%,RSD為2.29%;葉子的總黃酮含量略高于莖的總黃酮含量。結(jié)論:該方法簡便、準(zhǔn)確、靈敏度高,可用于遍山紅藥材的質(zhì)量控制參考。
遍山紅;總黃酮;楊梅苷;紫外分光光度法
遍山紅(Oxysporapaniculata(Don) DC.)為野牡丹科植物尖子木的根或全株,又名大葉朝天罐,分布于廣西、貴州、云南、西藏等地[1]。民間常用于治療濕熱瀉痢,風(fēng)濕痛,吐血,尿血,月經(jīng)過多,產(chǎn)后血崩,帶下,外傷出血,跌打腫痛,瘡腫,腹瀉和痢疾等癥[2-4],現(xiàn)代藥理研究報(bào)道遍山紅具有可抑制結(jié)核桿菌的作用[5]。此外,遍山紅可做為一種蔬菜食用[6],其主要化學(xué)成分含有β-谷甾醇、胡蘿卜苷、齊墩果酸、熊果酸、沒食子酸、楊梅苷、山奈酚、槲皮素等[5]。目前,國內(nèi)外對(duì)遍山紅的研究主要集中在植物分類學(xué)、園林景觀學(xué)和資源學(xué)等領(lǐng)域[7-9],但對(duì)其化學(xué)成分和藥理作用的研究甚少,質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)控制方面也未見報(bào)道。本文首次建立了紫外分光光度法測(cè)定遍山紅中總黃酮含量的測(cè)定方法,該方法簡單、快捷,為進(jìn)一步研究遍山紅的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)控制和藥用植物資源深度開發(fā)利用提供科學(xué)依據(jù)。
1.1 儀器
Agilent 8453型紫外可見分光光度計(jì);AR224CN電子分析天平;Millipore D-Q3超純水器;KQ250DE型超聲波清洗器。
1.2 材料
楊梅苷對(duì)照品由河池學(xué)院化學(xué)與生物工程學(xué)院制藥工程實(shí)驗(yàn)室提供,經(jīng)HPLC檢測(cè),楊梅苷含量>98%;超純水;其他試劑均為分析純。遍山紅藥材于2015年7-8月份在廣西河池市5個(gè)縣市采集,經(jīng)河池學(xué)院化學(xué)與生物工程學(xué)院植物學(xué)鄧晰朝副教授鑒定為野牡丹科尖子木Oxysporapaniculata(Don) DC.的干燥莖葉。
2.1 對(duì)照品溶液的制備
精密稱取干燥至恒重的楊梅苷對(duì)照品10.0 mg,置于50 mL量瓶中;加入70%乙醇使其溶解,定容,得對(duì)照品溶液(每1 mL含楊梅苷0.20 mg)。
2.2 供試品溶液的制備
遍山紅藥材地上莖,用鍘刀切成3-5 mm薄片后,自然干燥,對(duì)角線法取樣,粉碎,過2號(hào)篩。精密稱取藥材粉末1 g,置具塞錐形瓶中,精密加入70%乙醇25 mL,密塞,稱定質(zhì)量,設(shè)定溫度30 ℃,超聲提取(功率: 250 W,頻率: 40 kHz) 40 min,冷卻至室溫稱質(zhì)量,補(bǔ)足損失的溶劑質(zhì)量,搖勻,濾過,取續(xù)濾液10 mL,定容至100 mL,即得。
2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制
圖1 楊梅苷線性關(guān)系圖
精密吸取對(duì)照品溶液1.0, 2.0, 3.0, 4.0, 5.0, 6.0和0 mL(空白),分別置于10 mL容量瓶中,加入70%乙醇至7 mL,加5%亞硝酸鈉溶液0.3 mL,混勻,放置10 min,加10%三氯化鋁溶液0.3 mL,混勻,放置10 min,加1 mol/L氫氧化鈉溶液2 mL,加70%乙醇至刻度,搖勻,靜置10 min,在最大吸收波長500 nm處測(cè)定吸收度。以吸收度(A)為縱坐標(biāo),濃度(C)為橫坐標(biāo)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,得回歸方程為A=0.434 2C-0.000 2(r=0.999 7,n=6)。結(jié)果表明,楊梅苷在20~120 μg范圍內(nèi)與吸收度呈良好的線性關(guān)系(見圖1)。
2.4 精密度試驗(yàn)
精密移取對(duì)照品溶液1 mL,按“2.3”項(xiàng)的方法,自“加入70%乙醇至7 mL”起,依次顯色,測(cè)定6次,結(jié)果對(duì)照品平均吸光度值為0.047 6,RSD為1.44%,表明儀器精密度良好。
2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)
精密移取供試品溶液1 mL,按“2.3”項(xiàng)的方法,自“加入70%乙醇至7 mL”起,依次顯色,每隔20 min測(cè)其吸收度,連測(cè)12次,每次平行測(cè)定3次取平均值,結(jié)果供試品平均吸光度值為0.154 6,RSD為2.61%,表明樣品在3 h內(nèi)穩(wěn)定,滿足測(cè)定要求。
2.6 重復(fù)性試驗(yàn)
精密稱取同一批(BHS-1)遍山紅藥材粉末共6份,每份1 g,按“2.2”項(xiàng)的方法制備樣品溶液,按“2.3”項(xiàng)的方法測(cè)定,自“加入70%乙醇至7 mL”起,依次顯色,測(cè)定吸光值,結(jié)果平均吸光度值為0.155 8,RSD為1.06%,表明方法重復(fù)性良好。
2.7 加樣回收率試驗(yàn)
取已知遍山紅藥材粉末共6份,每份0.5 g,精密稱定,再分別精密加入5.3 mg/mL楊梅苷對(duì)照液1 mL,按“2.2”項(xiàng)的方法操作,得到供試品溶液后,照“2.3”項(xiàng)的方法,自“加入70 %乙醇至7 mL”起,依次顯色,測(cè)定吸光度,結(jié)果見表1。
表1 加樣回收率實(shí)驗(yàn)(n=6)
編號(hào)樣品重/g樣品含量/mg加入量/g測(cè)得量/mg回收率/%平均值/%RSD/%105022563460005310894499242050235635800053112238105433050285641400053109522100204050245636900053109453100155050235635800053110069101346050515667200053109348993810096229
2.8 樣品測(cè)定
精密稱取5批遍山紅莖和葉的藥材粉末各5份,每份1 g,按“2.2”項(xiàng)的方法制備樣品溶液,按“2.3”項(xiàng)的方法測(cè)定,自“加入70 %乙醇至7 mL”起,依次顯色,測(cè)定吸光值,同一批次藥材平行測(cè)定3份,取平均值計(jì)算總黃酮含量,結(jié)果5批不同產(chǎn)地遍山紅藥材的測(cè)定結(jié)果見表2。
表2 5批不同產(chǎn)地遍山紅藥材及其楊梅苷含量測(cè)定結(jié)果
編號(hào)產(chǎn)地批號(hào)葉含量/mg·g-1莖含量/mg·g-11保 安BSH-1108710722大 興BSH-210499973地 蘇BSH-39809374大 化BSH-48618185七百弄BSH-510801056
楊梅苷是具有多酚羥基的黃酮苷類物質(zhì),多存在于楊梅、藤茶、龍眼葉和蛇葡萄屬等植物中[9-11],具有多種藥理活性,表現(xiàn)出抗氧化、抗擴(kuò)張血管、抗炎鎮(zhèn)痛的作用[12],還具有降壓、降血糖、抑菌作用[13-15]。本實(shí)驗(yàn)研究表明楊梅苷做為主要的黃酮類成分存在于遍山紅中,含量達(dá)到1%左右。目前,2015版藥典尚未收錄有關(guān)遍山紅的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn),本研究首次采用紫外分光光度法對(duì)遍山紅中的莖葉總黃酮含量進(jìn)行測(cè)定,發(fā)現(xiàn)其葉子含量略高于莖的含量,為合理選擇藥用部位、深度開發(fā)利用藥材提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
目前,總黃酮的含量測(cè)定方法有:紫外區(qū)直接測(cè)定法、可見區(qū)絡(luò)合法、液相色譜法等,其中前兩種方法較為常見,且方法成熟快速,而液相色譜主要應(yīng)用于單一黃酮化合物的測(cè)定;另外,紫外區(qū)直接測(cè)定總黃酮的方法易受測(cè)液的基底(苯類,共軛烯烴等)影響產(chǎn)生誤差。絡(luò)合法與直接測(cè)定法不同,其原理為:金屬離子與酮羰基、鄰位羥基形成配位化合物,使吸收帶發(fā)生位移,從而克服了被測(cè)液基底的影響,故本文選擇使用紫外可見區(qū)絡(luò)合法測(cè)定藥材總黃酮含量。
本文建立了紫外分光光度法檢測(cè)遍山紅中總黃酮的方法,該法快速,簡單,準(zhǔn)確,可為該藥材的質(zhì)量控制和定量分析提供一定科學(xué)依據(jù)。
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[責(zé)任編輯 劉景平]
Determination of Total Flavones ofOxysporaPaniculata(Don) DC.
PAN Liwei1, LUO Zeping1, WEI Zhiqiao2, HE Yan1
(1.School of Chemistry and Biological Engineering, Hechi University, Yizhou, Guangxi 546300; 2.Agriculture College, Guangxi Unicersity, Nangning, Guangxi 530000, China)
Objective: To establish the method for determining the content of total flavonoids ofOxysporapaniculataand provide scientific basis for the development and utilization of this plant. Method: The total flavonoids are analyzed by spectrophotometry at the maximum absorption wavelength 500 nm with myricitrin as reference substance. Result: The linear range of total flavonoids is 20~120 μg (r=0.999 7), and its average recovery is 100.96%, RSD = 2.29%. The content of total flavonoids in the extract from the lea-ves is higher than that of the aerial parts. Conclusion: The method is simple, sensitive and accurate, and can be used for the quality control of Oxyspora paniculata.
Oxysporapaniculata(Don) DC.; total flavonoids; myricitrin; UV
R284.1
A
1672-9021(2016)05-0019-04
潘立衛(wèi)(1987-),男,廣西都安人,河池學(xué)院化學(xué)與生物工程學(xué)院實(shí)驗(yàn)師,主要研究方向:中草藥有效成分。
廣西教育廳高??茖W(xué)技術(shù)研究基金資助項(xiàng)目(KY2015LX367);河池學(xué)院青年科研基金資助課題(XJ2015QN010);“廣西高等教育創(chuàng)優(yōu)計(jì)劃”本科教學(xué)項(xiàng)目(桂教高教〔2015〕93號(hào))。
2016-06-21