EB病毒IgM及DNA檢測(cè)在兒童EB病毒感染相關(guān)疾病診斷中的應(yīng)用價(jià)值

王紅建 封偉

(衡水市第二人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，河北 衡水 053000)

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EB病毒IgM及DNA檢測(cè)在兒童EB病毒感染相關(guān)疾病診斷中的應(yīng)用價(jià)值

王紅建 封偉

(衡水市第二人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，河北 衡水 053000)

目的 研究EB病毒IgM及DNA檢測(cè)在兒童EB病毒感染相關(guān)疾病診斷中的應(yīng)用價(jià)值。方法 選取80例EBV感染患兒作為觀察組，100例健康兒童作為對(duì)照組，所有兒童均檢測(cè)EBV-IgM及DNA。比較兩組兒童上述指標(biāo)的陽(yáng)性率，并分析EBV-IgM及DNA檢測(cè)在兒童EB病毒感染相關(guān)疾病中的診斷價(jià)值。結(jié)果 觀察組EBV-IgM陽(yáng)性率31.25%，EBV-DNA陽(yáng)性率36.25%；對(duì)照組EBV-IgM陽(yáng)性率11.00%，EBV-DNA陽(yáng)性率15.00%，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。EBV-IgM靈敏度31.25%，特異度89.00%，約登指數(shù)0.1925；EBV-DNA靈敏度36.25%，特異度85.00%，約登指數(shù)0.2125。結(jié)論 EB病毒IgM及DNA檢測(cè)在兒童EBV感染相關(guān)疾病診斷中具有應(yīng)用價(jià)值。

EBV感染； 兒童； EB病毒IgM； EB病毒DNA

EB病毒(EBV)屬于皰疹病毒科，是小兒常見(jiàn)的感染病毒，90%以上的3～5歲兒童曾感染過(guò)EBV[1]。該病毒首先在口咽部上皮細(xì)胞內(nèi)增殖，繼而進(jìn)入呼吸道引起呼吸道感染，并可長(zhǎng)期潛伏在組織中并在機(jī)體免疫力降低時(shí)引起復(fù)發(fā)感染，感染可累及多系統(tǒng)及器官，患兒臨床表現(xiàn)復(fù)雜，容易造成誤診或漏診，給臨床治療工作帶來(lái)困難[2]。目前，臨床上多采用EBV抗體定性測(cè)定和EBV-DNA定量測(cè)定檢測(cè)EBV感染，本次研究旨在分析EB病毒IgM及EBV-DNA檢測(cè)在兒童EB病毒感染相關(guān)疾病中的診斷價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2011年12月至2015年10月期間我院收治的80例患兒作為觀察組，其中男43例，女37例，年齡6個(gè)月至14歲，平均(4.1±2.9)歲。80例患兒中，上呼吸道感染者29例，傳染性單核細(xì)胞增多癥21例，支氣管炎及肺炎17例，病毒性心肌炎13例。所有患兒均符合以下標(biāo)準(zhǔn)：(1)患兒均因不明原因發(fā)熱、咽炎、皮疹、心律失常、肝脾腫大等疑似EB病毒感染的臨床表現(xiàn)；(2)排除其他病原體感染的患兒，如肝炎病毒、人巨細(xì)胞病毒、肺炎支原體或肺炎衣原體的感染；(3)所有患兒監(jiān)護(hù)人均自愿參與本次研究，符合醫(yī)學(xué)倫理學(xué)原則。選取同一時(shí)期來(lái)我院進(jìn)行疫苗接種的健康兒100例作為對(duì)照組，其中男58例，女42例，年齡6個(gè)月至13歲，平均(3.8±3.0)歲。兩組的性別、年齡差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2 標(biāo)本采集 所有患兒在未用藥之前于清晨于清晨經(jīng)抽取空腹血5 mL，置于抗凝管中，標(biāo)記后保存于-80 ℃冰箱中，批量送檢。

1.3 觀察指標(biāo)及檢測(cè)方法 (1)EB病毒(EBV)的IgM檢查采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)，試劑盒由上?；脤?shí)業(yè)有限公司提供，操作嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。樣本的吸光度值：標(biāo)準(zhǔn)品的吸光度值≥1.1為陽(yáng)性。(2)EBV-DNA檢查采用熒光定量PCR，引物由上海生工生物工程股份有限公司合成，ABI Prism7300熒光定量PCR儀購(gòu)自上海迪普生物技術(shù)有限公司。將咽拭子或全血標(biāo)本按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行處理和DNA提取并加入26 μL的DNA檢測(cè)體系中，將反應(yīng)管放入樣品槽中進(jìn)行擴(kuò)增及檢測(cè)：循環(huán)包括50 ℃預(yù)反應(yīng)2 min，94 ℃預(yù)變性5 min，每個(gè)循環(huán)包括94 ℃ 10 s，60 ℃ 40 s，共進(jìn)行50個(gè)循環(huán)。標(biāo)本熒光強(qiáng)度曲線達(dá)到閾值時(shí)所需循環(huán)數(shù)(Ct值)≤39為陽(yáng)性。比較EBV-IgM及EBV-DNA檢測(cè)在不同疾病患兒中的檢出結(jié)果。

2 結(jié) 果

2.1 不同疾病EBV-IgM及DNA的檢測(cè)值 不同疾病患兒的EBV-IgM及EBV-DNA的檢測(cè)值的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表1

表1 不同疾病EBV-IgM及DNA的檢測(cè)值

注：與對(duì)照組相比，*P<0.05。

2.2 不同疾病EBV-IgM及DNA的陽(yáng)性率 不同疾病患兒的EBV-IgM及EBV-DNA陽(yáng)性率的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)?；純旱腅BV-IgM及DNA檢出率均明顯高于對(duì)照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表2。

表2 不同疾病EBV-IgM及DNA的陽(yáng)性率[n(%)]

注：與對(duì)照組相比，*P<0.05。

2.3 EBV-IgM及DNA的診斷價(jià)值 EBV-IgM診斷EB感染的靈敏度為32.25%，特異度為89.00%，約登指數(shù)0.192 5。EBV-DNA診斷EB病毒感染的靈敏度為36.25%，特異度為85.00，約登指數(shù)為0.212 5。

3 討 論

EBV病毒通過(guò)空氣-飛沫途徑在人群中傳播，感染者以兒童多見(jiàn)，患者癥狀較為多樣，預(yù)后多良好，但免疫力低下者可出現(xiàn)嚴(yán)重并發(fā)癥[3]。

目前，臨床上最常用的EBV檢測(cè)方法是血清學(xué)抗體檢測(cè)，具有簡(jiǎn)便、快捷的優(yōu)點(diǎn)，其中EBV-IgM是EB病毒感染的患兒在感染后早期即可表現(xiàn)為陽(yáng)性，一般持續(xù)4～8周，是急性感染的可靠指標(biāo)[4]。熒光定量PCR檢測(cè)EBV-DNA是近些年來(lái)發(fā)展的技術(shù)，可以定量反應(yīng)體內(nèi)的EBV-DNA水平，并準(zhǔn)確反應(yīng)EB病毒感染和病毒的復(fù)制情況。EBV-DNA的載量與器官損害程度及疾病種類、疾病的嚴(yán)重程度及病死率呈正相關(guān)，臨床上可以根據(jù)EB-DNA拷貝數(shù)大小來(lái)判斷病情嚴(yán)重程度，從而進(jìn)行更好的用藥量的控制，達(dá)到理想的治療效果；且其擴(kuò)增及產(chǎn)物檢測(cè)一步完成，整個(gè)檢測(cè)過(guò)程處于全密封環(huán)境中，避免產(chǎn)物污染等因素造成的檢測(cè)偏差[5-6]。

本次研究分別采取ELISA和熒光定量PCR的方法檢測(cè)患兒的EBV-IgM及EBV-DNA水平，結(jié)果表明，EBV-IgM表達(dá)量及EBV-DNA的Ct值在上呼吸道感染、傳染性單核細(xì)胞增多癥、支氣管肺炎及病毒性心肌炎的患兒間存在顯著差異；患兒上述指標(biāo)的陽(yáng)性率明顯高于對(duì)照組，不同疾病患兒的EBV-IgM及EBV-DNA陽(yáng)性率無(wú)顯著差異，其中上呼吸道感染及支氣管炎肺炎患兒上述指標(biāo)的陽(yáng)性率高于傳染性單核細(xì)胞增多癥，而病毒性心肌炎患兒EBV-IgM及EBV-DNA陽(yáng)性率較低。針對(duì)不同疾病的患兒，EBV-IgM及EBV-DNA檢測(cè)的陽(yáng)性率無(wú)明顯差異，二者靈敏度相近，EBV-DNA檢測(cè)略優(yōu)于EBV-IgM檢測(cè)，但EBV-IgM特異度高于EBV-DNA。

對(duì)上述指標(biāo)的診斷價(jià)值進(jìn)行分析： IgM是EBV急性感染的早期指標(biāo)，但持續(xù)時(shí)間較短，導(dǎo)致患兒窗口期出現(xiàn)和診斷結(jié)果假陰性，且小兒免疫系統(tǒng)尚未完善，病毒不能刺激機(jī)體產(chǎn)生相應(yīng)的能夠達(dá)到檢測(cè)下限的病毒抗體[7]。不同疾病EBV-DNA的陽(yáng)性率均明顯高于IgM，其原因可能是部分EBV為條件感染，不能引起足夠強(qiáng)度的免疫反應(yīng)，而DNA檢測(cè)可以檢出這部分感染的患兒[8]。

本次研究結(jié)果提示EB病毒IgM及DNA檢測(cè)在兒童EBV感染相關(guān)疾病診斷中具有應(yīng)用價(jià)值，早期進(jìn)行上述指標(biāo)檢測(cè)可以減少小兒EBV相關(guān)疾病的漏診、誤診，尤其是EBV-DNA在部分疾病的診斷中更為敏感。

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[2] 段巧艷.EB病毒感染臨床應(yīng)用研究進(jìn)展[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床,2012,9(10):1232-1233.

[3] 陳佳紅,萬(wàn)言珍.480例住院患兒EB病毒相關(guān)抗體檢測(cè)及結(jié)果分析[J].中國(guó)婦幼保健,2015,30(14):2214-2215.

[4] 劉春梅,田文君,張玥,等.EBV DNA檢測(cè)在小兒EBV感染相關(guān)疾病診斷中的意義[C].第一次全國(guó)中西醫(yī)結(jié)合檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文集，2014:401-404.

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