音樂電針頭穴透刺法對缺血性腦卒中后抑郁大鼠行為學及腦組織NE、5-HT含量的影響*

梅 成,趙晶媛，段國相,章一鳴,鄒天雨

(黑龍江省中醫(yī)藥科學院，黑龍江 哈爾濱 150040)

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音樂電針頭穴透刺法對缺血性腦卒中后抑郁大鼠行為學及腦組織NE、5-HT含量的影響*

梅 成,趙晶媛，段國相,章一鳴,鄒天雨

(黑龍江省中醫(yī)藥科學院，黑龍江 哈爾濱 150040)

目的：對比研究音樂電針頭部透穴針刺法對缺血性卒中后抑郁(PSD)大鼠腦內(nèi)去甲腎上腺素(NE)及5-羥色胺(5-HT)表達的影響，為臨床治療卒中后抑郁患者提供診療思路。方法：選取健康大鼠，隨機分為針刺組、西藥組、模型組和空白組。應用線栓法聯(lián)合孤養(yǎng)和慢性應激刺激制備復合型卒中后抑郁大鼠模型。針刺組采用百會透刺太陽連接音樂電針治療。西藥組采用鹽酸氟西汀溶液灌胃治療。治療3周后處死，進行指標檢測，觀察各處理方法對模型大鼠NE、5-HT的影響。結果：治療前各PSD模型組大鼠神經(jīng)功能評價無明顯差異。治療后檢測大鼠腦內(nèi)5-羥色胺、去甲腎上腺素含量均改善明顯，針刺組與模型組對比具有顯著性差異(P<0.05)，且針刺組與西藥組對比無明顯差異(P>0.05)。結論：本實驗中兩種治療方法均能夠調(diào)節(jié)PSD模型大鼠腦內(nèi)去甲腎上腺素與5-羥色胺之間的平衡,證明音樂電針頭部透穴針刺療法對腦卒中后抑郁癥模型大鼠具有確定療效。

缺血性腦卒中;抑郁；音樂電針；頭穴透刺法

卒中后抑郁癥(Poststrokedepression，PSD)屬于腦血管意外后經(jīng)常出現(xiàn)的癥狀。這種癥狀在腦血管意外后出現(xiàn)率為20%～50%。PSD的發(fā)生可以使神經(jīng)功能恢復的速度減緩，提高病患的死亡率，嚴重影響腦卒中患者的生存質(zhì)量。有研究證明，PSD的出現(xiàn)與去甲腎上腺素(NE)、5-羥色胺(5-HT)兩者之間的平衡失調(diào)有關[1]。卒中后抑郁動物模型的制備技術逐步完善，為精確研究卒中后認知功能損害奠定了基礎。

本研究通過線栓法聯(lián)合孤養(yǎng)和慢性應激刺激制備復合型卒中后抑郁(PSD)大鼠模型。模型制備成功后對PSD模型大鼠的行為學變化以及腦內(nèi)海馬區(qū)NE和5-HT含量變化進行觀察。經(jīng)儀器測出含量變化后，對比觀察通過音樂電針頭穴透刺處理對于PSD大鼠的作用，為臨床治療提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

選取健康的雄性清潔級SD大鼠80只，體質(zhì)量(200±20)g，合格證編號：SCXK(魯)2014-0019。將新購進的SD大鼠飼養(yǎng)于恒溫飼養(yǎng)室內(nèi)。調(diào)整溫度區(qū)間(18℃～25℃)、濕度區(qū)間(35±2)%。采用自然光，允許大鼠自由食水。觀察飼養(yǎng)7天，各籠大鼠反應正常，準備開始實驗。為提高術后存活率，各組大鼠于手術前后12h內(nèi)禁食不禁水。

1.2 模型制備

參照相關文獻，采用線栓法[2]聯(lián)合孤養(yǎng)和慢性應激刺激制備復合型卒中后抑郁(PSD)大鼠模型。應用濃度為10%的水合氯醛(體質(zhì)量10ml/kg)，將麻醉藥物注射于腹腔內(nèi)，麻醉成功后開始制備大鼠局灶性腦缺血模型。

復合模型制備方法：將成功制備的局灶性腦缺血大鼠模型轉入小鼠籠內(nèi)，繼續(xù)為期16天的單獨飼養(yǎng)。在術后7天內(nèi)相繼給予中度不可預測應激處理。刺激方法包括：電擊足底，熱、冰刺激，鉗尾，斷食、水，晝夜顛倒，搖擺，以制備腦卒中后抑郁大鼠復合模型[3]。模型評定標準：Longa5分法[4]。評定完畢后，依據(jù)評分結果，對模型動物低于2分者進行篩選剔除。將符合實驗標準的模型大鼠進行隨機分組。分為針刺組、西藥組、模型組、空白組，每組各20例。

1.3 實驗材料

安迪牌針灸針：規(guī)格：0.25mm×25mm。音樂電針儀：ZJ-12H型音樂電針儀,中國針灸學會，哈爾濱致厚醫(yī)療器械有限公司[5]。鹽酸氟西汀膠囊:百優(yōu)解,國藥準字J20080016,禮來蘇州制藥有限公司分裝。多樣品超聲波細胞粉碎機：寧波新藝超聲設備有限公司。高效液相色譜儀：Waters510，WATERS公司。電化學檢測器測定儀：Waters464，WATERS公司。

1.4 治療方法

針刺組采用“百會”穴透刺“太陽”穴。穴位選擇根據(jù)《大鼠穴位圖譜》[6]確定，“百會”穴位于大鼠頂骨中點、“太陽”穴位于大鼠眼外眥與耳之間連線近1/3處。將模型大鼠置于固定器中，單手扶住大鼠背部，使大鼠處于安靜、清醒狀態(tài)，不加束縛帶固定[7]。去除大鼠穴位周圍體毛，消毒，用毫針由“百會”穴向“太陽”穴方向斜刺5～10mm，完成另外一側針刺后將兩支針柄通過導線與音樂電針儀相連接，選取抗抑郁音樂處方。刺激強度以針灸針柄微微顫動、大鼠不嘶叫、掙扎，保持安靜為度，每日1次，每次20min。

西藥組給予藥物灌胃治療[8]，將鹽酸氟西汀膠囊生理鹽水溶液按2mg/kg·d-1劑量給藥，每日1次；模型組給予等量生理鹽水灌胃，每日1次；空白組不做任何處置[1]。

1.5 療效評價

1.5.1 糖水消耗實驗 訓練各組大鼠飲用蔗糖水，濃度10g/L，初始48h用10g/L蔗糖水替換自來水，接著禁食、水20h，繼而予10g/L蔗糖水飲用后計算24h飲用量。神經(jīng)功能評價時間：腦卒中后第7、14、21天[9]。

1.5.2 敞箱實驗 評價各組大鼠在5min中的活動情況。評價項目選擇：中央格內(nèi)停留的時間。方格間穿行次數(shù)標準：3足以上踏入鄰格。起立修飾次數(shù)標準：雙前肢離開地面1cm以上。評價時間：模型制備成功后第7、14、21天。

1.5.3NE和5-HT的含量測定 各組大鼠處理3周后用斷頭法處死。冰盤上迅速分離腦組織，提取左側海馬[10]，稱重后加入0.1mol/LHClO4300μL(4℃預冷)，應用超聲粉碎器在冰浴條件下超聲勻漿30s，轉速為11 000轉/min，完畢取上清液20μL進樣。采用Waters510泵高效液相色譜系統(tǒng)、Waters464電化學檢測器測定NE和5-HT含量。

1.6 統(tǒng)計學處理

2 結果

模型組大鼠各個時間點對比，糖水攝入減少，證明造模成功。西藥組和針刺組與模型組比較，糖水攝入增多，有差異性(P<0.05)，證明治療方法有效。針刺組與西藥組比較治療效果無明顯差異(P>0.05)。見表1。

表1 各組大鼠蔗糖水消耗量的變化

模型組大鼠各個時間點對比，運動量減少，證明造模成功。西藥組和針刺組與模型組比較，水平、垂直運動增多，有差異性(P<0.05)，證明治療方法有效。針刺組與西藥組比較治療效果無明顯差異(P>0.05)。見圖1。

圖1 各組大鼠運動能力評分的比較

模型組大鼠與空白組對比，具有差異性(P<0.05)，證明造模成功。西藥組與針刺組與模型組比較，NE含量具有差異(P<0.05)，證明治療方法有效。針刺組與西藥組比較NE含量無明顯差異(P>0.05)。見表2。

表2 各組大鼠腦組織NE含量的比較

模型組大鼠與空白組對比，具有差異性(P<0.05)，證明造模成功。西藥組與針刺組與模型組比較，5-HT含量具有差異(P<0.05)，證明治療方法有效。針刺組與西藥組比較5-HT含量無明顯差異(P>0.05)。見表3。

表3 各組大鼠腦組織5-HT含量的比較

治療前各PSD模型組大鼠量化分級評分無明顯差異，治療后檢測去甲腎上腺素、5-羥色胺含量，各治療組大鼠均有明顯改善，針刺組與模型組對比有顯著性差異(P<0.05)，且針刺組與西藥組對比無明顯差異(P>0.05)。

3 討論

現(xiàn)代醫(yī)學認為大腦神經(jīng)突觸間的遞質(zhì)濃度相對或絕對不足，而導致整體精神活動和心理功能的全面性低下狀態(tài)[11]。本研究通過對大鼠經(jīng)過21天的應激刺激后制備出的抑郁癥模型大鼠海馬NE、5-HT的測定，發(fā)現(xiàn)其NE、5-HT及代謝產(chǎn)物總量減少。

電針療法以傳統(tǒng)針刺療法為基礎，加入電極刺激。現(xiàn)在常用的脈沖電針儀能夠形成周期性波形，電刺激機體，以增強針感。但在臨床治療中后期，患者機體會因?qū)﹄娽槾碳ゎl率逐漸適應而出現(xiàn)療效衰減。音樂電針療法通過將電針治療與音樂治療結合起來，把音樂的節(jié)律轉化為不停變化的頻率和波形。故音樂電針效果穩(wěn)定，無療效衰減的現(xiàn)象。而且由音樂電刺激產(chǎn)生的針感舒適、療效顯著，患者樂于接受。將音樂從被動欣賞轉化為生理效應的主動治療。通過音樂電波激發(fā)穴內(nèi)和經(jīng)上的經(jīng)氣，使之沿經(jīng)而行，配合透刺療法，使氣至病所達到更佳的治療目的。

本實驗采用音樂電針結合頭穴透刺法治療中風后抑郁癥，其機理可能是電流形成的電場、磁場，通過興奮5-HT能神經(jīng)元上行纖維，激活“邊緣系統(tǒng)-中腦功能環(huán)路”[12]，使該環(huán)路形成一個良性循環(huán)，使杏仁核、下丘腦、海馬、前額葉皮質(zhì)等與情緒相關部位的5-HT持續(xù)釋放增加，達到了改善抑郁狀態(tài)的目的。本研究證實了音樂電針透刺療法治療中風后抑郁癥模型大鼠具有確定療效，這對以后臨床治療疾病、提高療效具有重要參考意義。

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黑龍江中醫(yī)藥中青年科技攻關項目，編號：ZQG-008(2014年)。

梅成(1970-)，男，主任醫(yī)師，從事神經(jīng)系統(tǒng)疾病康復研究。

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2016-05-15