小黃魚親魚培育和催產(chǎn)技術(shù)的初步試驗

陳睿毅，樓 寶，詹 煒，徐冬冬，陳 琳，劉 峰，王立改，孫 琛

( 1. 浙江省海洋水產(chǎn)研究所，浙江省海水增養(yǎng)殖重點實驗室，浙江 舟山 316021；2. 象山縣海洋與漁業(yè)局，浙江 象山 315700； 3. 浙江海洋學(xué)院，浙江 舟山 316022 )

小黃魚親魚培育和催產(chǎn)技術(shù)的初步試驗

陳睿毅1，樓 寶1，詹 煒1，徐冬冬1，陳 琳2，劉 峰3，王立改3，孫 琛2

( 1. 浙江省海洋水產(chǎn)研究所，浙江省海水增養(yǎng)殖重點實驗室，浙江 舟山 316021；2. 象山縣海洋與漁業(yè)局，浙江 象山 315700； 3. 浙江海洋學(xué)院，浙江 舟山 316022 )

2014—2015年對野生小黃魚在人工養(yǎng)殖條件下的繁育技術(shù)進(jìn)行了相關(guān)試驗研究，主要包括親魚的室內(nèi)越冬、強化培育和人工催產(chǎn)技術(shù)。選取2000尾小黃魚，體質(zhì)量平均為67.24 g，分別飼養(yǎng)于4 m×8 m×1.5 m的越冬池，越冬池水溫10～11 ℃，投喂少量配合飼料，進(jìn)行親魚營養(yǎng)強化，親魚使用促黃體素釋放激素A2和人絨毛膜促性腺激素催產(chǎn)。經(jīng)52 d營養(yǎng)強化，小黃魚體質(zhì)量增至88.30 g，營養(yǎng)強化組的卵巢質(zhì)量和性腺指數(shù)均顯著高于對照組(P<0.05)，表明通過投喂冰鮮餌料并添加維生素C和維生素E，可顯著促進(jìn)小黃魚的性腺發(fā)育和成熟，提高其性腺指數(shù)和相對懷卵量；使用1.2 μg/kg促黃體素釋放激素A2搭配500 IU/kg人絨毛膜促性腺激素對雌魚進(jìn)行催產(chǎn)，催產(chǎn)效果最佳，人工受精率和孵化率分別為23.35%和80.56%。

小黃魚；親魚培育；人工催產(chǎn)

小黃魚(Pseudosciaenapolyactis)，屬鱸形目、石首魚科、黃魚屬，俗稱黃花魚、小黃花，廣泛分布于我國東海、黃海和渤海以及朝鮮半島西岸海域。其肉質(zhì)細(xì)嫩鮮美，頗受廣大消費者喜愛，是我國重要的海產(chǎn)經(jīng)濟(jì)魚類。小黃魚與大黃魚(P.crocea)、帶魚(Trichiuruslepturus)和曼氏無針烏賊(Sepiellamaindroni)并稱為我國“四大海產(chǎn)”，在我國海洋漁業(yè)中具有舉足輕重的地位。據(jù)資料記載，小黃魚最高年產(chǎn)量曾達(dá)到1957年的1.02×105t[1]，但20世紀(jì)60年代以后，由于捕撈強度逐漸增大，小黃魚資源開始衰退[2]。因此，開展小黃魚的人工繁育研究，不僅可滿足日趨擴(kuò)大的市場消費需求，也為其野生資源保護(hù)提供技術(shù)保障和物質(zhì)基礎(chǔ)。目前，有關(guān)小黃魚的研究報道多集中在資源和生物學(xué)特征研究方面，如林龍山等[3]對黃海南部和東海小黃魚的產(chǎn)卵場分布及環(huán)境特征開展了研究，程家驊等[4]對東海區(qū)小黃魚伏季休漁效果及資源合理利用進(jìn)行了探討，張國政等[5]研究了黃海中南部小黃魚生物學(xué)特征的變化，鮮有小黃魚繁育相關(guān)的報道，僅見江蘇省海洋水產(chǎn)研究所繁育出3.2～4.8 cm的魚苗86尾[6]。

2014年6月至2015年5月，浙江省海洋水產(chǎn)研究所從寧波象山收集野生活體小黃魚，對其進(jìn)行親魚人工馴養(yǎng)和育苗試驗，成功培育體長5 cm的小黃魚苗種3萬尾。親魚培育和人工催產(chǎn)是海水魚類人工繁殖的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，本文主要探討小黃魚親魚的培育及催產(chǎn)等環(huán)節(jié)中的關(guān)鍵技術(shù)參數(shù)，以期為小黃魚親魚培育和人工催產(chǎn)提供參考依據(jù)，為今后小黃魚規(guī)?；斯び绲於ɑA(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 親魚來源

2014年6月，從寧波象山石浦港灣海域收集野生親魚，養(yǎng)殖于當(dāng)?shù)仞B(yǎng)殖網(wǎng)箱，經(jīng)生物學(xué)鑒定后確認(rèn)為小黃魚，共2000余尾，在網(wǎng)箱養(yǎng)至12月份轉(zhuǎn)移到浙江省海洋水產(chǎn)研究所試驗場進(jìn)行越冬養(yǎng)殖。

1.2 親魚越冬管理及營養(yǎng)強化

越冬池為4 m×8 m×1.5 m水泥池，小黃魚從網(wǎng)箱轉(zhuǎn)移至室內(nèi)車間，初期由于環(huán)境的巨大改變，產(chǎn)生“應(yīng)激”反應(yīng)，會出現(xiàn)跳躍和類似“浮頭”的現(xiàn)象，采用加蓋遮陽網(wǎng)和保持養(yǎng)殖車間安靜的方法，經(jīng)過一段時間馴化，即可恢復(fù)正常，健康小黃魚會在水面集群游弋。采用加熱棒維持水體溫度在10～11 ℃，最低不低于 9 ℃，越冬期間可投喂少量配合飼料。

2015年3月初氣溫開始回升，水溫至12 ℃時開始對親魚進(jìn)行營養(yǎng)強化試驗。試驗從3月4日開始，至4月26日結(jié)束，共52 d。設(shè)置營養(yǎng)強化組(以下簡稱強化組)和配合餌料對照組(以下簡稱對照組)，每組300尾，分別置于4 m×5 m×1.2 m的水泥池中飼養(yǎng)。強化組每天投喂冰鮮牡蠣肉和魷魚塊，并輔以3‰的維生素C和維生素E，日投喂量2.0～2.5 kg，約為親魚體質(zhì)量的7%～8%；對照組投喂配合飼料，飼料為日本林兼產(chǎn)業(yè)株式會社生產(chǎn)的“魚耀4號”(粗蛋白含量超過52%、粗脂肪含量超過12%)，日投喂量1.8～2.0 kg，約為親魚體質(zhì)量的6%～7%。試驗期間，光照度200 lx，鹽度25～30，水深約0.8 m，以防止小黃魚跳出培育池而死亡，日換水量保持200%。

1.3 親魚的人工催產(chǎn)與產(chǎn)卵

4月下旬，水溫13 ℃時開始對親魚性腺進(jìn)行抽樣檢查，觀察到70%親魚的性腺發(fā)育處于V期時(圖1)，開始對親魚進(jìn)行人工催產(chǎn)試驗。分別從強化組和對照組中挑選腹部柔軟、生殖孔紅腫的小黃魚160尾進(jìn)行催產(chǎn)試驗，此時雄魚輕壓腹部即會有精液流出。催產(chǎn)素使用促黃體素釋放激素A2和人絨毛膜促性腺激素，由寧波第二激素廠生產(chǎn)，用復(fù)方氨基酸注射液配成試劑溶液后，對雌魚行胸鰭基部注射，雄魚不注射。

產(chǎn)卵池水溫為14～15 ℃，鹽度為28，將催產(chǎn)后的親魚按雌雄比2∶1的比例放進(jìn)水池，水池上方用遮陽網(wǎng)覆蓋，由于小黃魚敏感易驚，應(yīng)多布?xì)馐?，減小充氣量，小黃魚一般次日晚上開始產(chǎn)卵，效應(yīng)時間為36～48 h。小黃魚的卵為浮性卵，用80目篩絹網(wǎng)直接在產(chǎn)卵池中拉網(wǎng)，收集水中受精卵。將收集的受精卵置于20 L的桶中，用玻璃棒沿順時針方向攪拌，靜置10 min后用虹吸法將沉卵吸出，重復(fù)此操作2～3次，獲得浮性卵，計數(shù)后移入孵化池。

圖1 性成熟小黃魚的性腺注：左側(cè)為卵巢，右側(cè)為精巢.

1.4 數(shù)據(jù)的采集與處理

1.4.1 生長和性腺指數(shù)

越冬前和強化后，隨機選取30尾小黃魚測量其全長和體質(zhì)量，解剖觀察其性腺發(fā)育情況，稱量卵巢質(zhì)量，計算其性腺指數(shù)，利用SPSS 19.0單因素分析進(jìn)行差異顯著性分析。

性腺指數(shù)/%=(m1/m2)×100%

式中，m1，卵巢質(zhì)量，m2，體質(zhì)量。

1.4.2 懷卵量

挑選腹部柔軟的雌魚解剖，取其性腺，觀察其發(fā)育時期，挑選Ⅳ期或Ⅴ期的卵巢進(jìn)行懷卵量檢測。分別測量小黃魚左右側(cè)卵巢的質(zhì)量為m1和m2，從左側(cè)卵巢的頭部、中部和尾部剪取一小塊性腺，稱質(zhì)量為m3、m4和m5，用酒精固定后置于玻璃皿中放在解剖鏡下用解剖針數(shù)出每塊性腺懷卵量為a1、a2和a3，則左側(cè)卵巢懷卵量為：

同理，計算出右側(cè)卵巢懷卵量N2，則單條小黃魚懷卵量為N=N1+N2。

1.4.3 受精率和孵化率

采用溢出法收集受精卵，將收集的受精卵置于20 L的水桶中，加入15 L的沙濾海水，用玻璃棒沿順時針方向攪拌10圈，靜置10 min，虹吸法吸出沉底的死卵和差卵，加水，攪拌，如此重復(fù)2～3次，收集上層浮性卵，統(tǒng)計受精率和孵化率。

2 結(jié) 果

2.1 生物學(xué)鑒定

小黃魚與大黃魚同屬石首魚科、黃魚屬，在體長15～20 cm時，兩者在外部形態(tài)上極為相似，隨機選取了30尾小黃魚進(jìn)行形態(tài)學(xué)鑒定，發(fā)現(xiàn)魚體側(cè)線上鱗均為5片或6片；尾柄長與尾柄高之比為2.2～2.5；上下頜等長。解剖小黃魚，觀察其鰾支管的最后一個分叉，發(fā)現(xiàn)前后兩支不等，前長后短。顯微鏡下觀察小黃魚受精卵和初孵仔魚，受精卵卵徑大小為1.324～1.539 mm，初孵仔魚全長2.412 mm，解剖鏡下觀察20日齡仔魚，全長5.661 mm，體高2.435 mm(圖2)。

圖2 小黃魚受精卵、出膜仔魚和20日齡仔魚

2.2 親魚培育與懷卵量檢測

經(jīng)過營養(yǎng)強化培育，小黃魚生長指標(biāo)和性腺發(fā)育情況較越冬前有了大幅提高。越冬前小黃魚均質(zhì)量67.24 g，經(jīng)過營養(yǎng)強化，體質(zhì)量增至88.30 g，增幅31.32%，兩者差異顯著(P<0.05)；強化組體質(zhì)量雖略高于對照組(85.45 g)，但差異不顯著(P>0.05)。而從性腺發(fā)育方面看，強化組的卵巢質(zhì)量、性腺指數(shù)和懷卵量均比對照組大，且兩者差異顯著(P<0.05)(表1)。試驗結(jié)果表明，營養(yǎng)強化培育可以顯著促進(jìn)小黃魚親魚的性腺發(fā)育，提高其性腺指數(shù)和懷卵量。

表1 小黃魚生長與懷卵量測量結(jié)果

注：同一列字母不同，表示差異顯著(P<0.05).

2.3 親魚催產(chǎn)與產(chǎn)卵情況

親魚催產(chǎn)的效果一方面體現(xiàn)在親魚的產(chǎn)卵量上，另一方面受精率和孵化率也是檢驗催產(chǎn)效果的重要指標(biāo)。分別對強化組和對照組的小黃魚進(jìn)行了催產(chǎn)試驗，試驗結(jié)果見表2。由表2可知，強化組的總受精卵量、受精率和孵化率均高于對照組；強化組-Ⅱ的受精率和孵化率均高于其他強化組。試驗結(jié)果表明，在相同的催產(chǎn)條件下，經(jīng)過營養(yǎng)強化的親魚催產(chǎn)效果明顯升高；促黃體素釋放激素A2搭配人絨毛膜促性腺激素的催產(chǎn)效果好于單純使用促黃體素釋放激素A2，且劑量控制在1.2 μg/kg和500 IU/kg最佳。

表2 小黃魚人工催產(chǎn)效果(T=13 ℃，n=40)

注：表中僅為雌魚的催產(chǎn)試驗結(jié)果.

3 討 論

親魚培育和人工催產(chǎn)是大多數(shù)魚類人工繁育的必經(jīng)之路。親魚培育的目的為了減少野生魚類由于捕獲所誘發(fā)的壓力和加強產(chǎn)卵親魚的營養(yǎng)需求，以期獲得最好的繁殖效果[7-8]；而人工催產(chǎn)則是為了解決在人工飼養(yǎng)環(huán)境下因魚類生殖功能紊亂導(dǎo)致不能自然產(chǎn)卵的問題[9-10]。試驗前期，對小黃魚進(jìn)行了生物學(xué)鑒定，其特征與朱元鼎等[11]關(guān)于小黃魚分類研究的表述一致。小黃魚受精卵、初孵仔魚和20日齡仔魚的特征觀察，與劉家富[12]關(guān)于大黃魚的相關(guān)描述存在很大差異，也從側(cè)面證實了產(chǎn)卵親魚不是大黃魚的可能，因此，可以確認(rèn)本試驗的研究對象為小黃魚無疑。

3.1 親魚營養(yǎng)強化

人工育苗，親魚是關(guān)鍵，“好種才能育出好苗”，為了獲得大量的優(yōu)質(zhì)苗種，親魚的培育顯得尤為重要。而調(diào)控親魚性腺發(fā)育，促使親魚性腺成熟則是親魚強化培育的主要目標(biāo)。魚類性腺發(fā)育除受光照和水溫影響外，營養(yǎng)也是至關(guān)重要，親魚的營養(yǎng)對提高產(chǎn)卵量、卵和仔魚質(zhì)量以及仔稚魚生長與存活等具有重要作用。大量研究表明，對親魚的營養(yǎng)強化有助于提高其繁殖性能。羅琳等[13]對硬頭鱒(Oncorhynchusmykiss)親魚進(jìn)行營養(yǎng)強化培育，發(fā)現(xiàn)飼料中補充二十碳五烯酸和二十二碳六烯酸對親魚繁殖性能有改善和促進(jìn)作用。劉付永忠等[14]對斜帶石斑魚(Epinepheluscoioides)的研究證實，餌料中搭配高質(zhì)魚油和維生素能顯著促進(jìn)親魚的性腺發(fā)育。蔣宏雷等[15]對大黃魚的研究表明，在大黃魚親魚培育階段采用營養(yǎng)強化方法可有效提高親魚培育存活率、單尾產(chǎn)卵量及卵子受精率。本試驗中，通過對小黃魚親魚進(jìn)行強化培育，其生長和性腺指數(shù)明顯高于對照組，后期的催產(chǎn)效果也好于對照組，表明通過光控和搭配維生素C與維生素E，可以促進(jìn)小黃魚的性腺發(fā)育，提高催產(chǎn)效果。

3.2 相對懷卵量

親體的懷卵量及生殖力的變動是繁殖生物學(xué)特性的主要內(nèi)容，了解小黃魚懷卵量的變化，掌握其生殖腺成熟時間，對培育本地優(yōu)良品種，不斷提高小黃魚規(guī)?；庇夹g(shù)和保護(hù)野生小黃魚資源有著重要的現(xiàn)實意義[16]。不同個體的懷卵量因生活環(huán)境和生長狀況的變化而存在較大的差異。李城華[17]對東海區(qū)帶魚的個體繁殖力進(jìn)行了研究，發(fā)現(xiàn)帶魚的相對懷卵量個體之間差異很大，為108～467粒，且第一次產(chǎn)卵量隨體質(zhì)量增長而提高?？紫橛甑萚18]對岱巨洋大黃魚的研究表明，岱巨洋春季大黃魚個體相對懷卵量為288～1024粒，6齡以前，相對懷卵量隨著年齡的提高而增長。本試驗中，小黃魚的相對懷卵量為550～640粒，個體間差異小，分析原因可能是所取樣品均為同一年齡組，處于相同生活環(huán)境和生長狀態(tài)，其性腺成熟度差異相對較小。

3.3 催產(chǎn)素種類與劑量

人工育苗生產(chǎn)中，親魚的產(chǎn)卵量主要與懷卵量和催產(chǎn)方法相關(guān)。與大黃魚[19]相似，小黃魚在人工繁育過程中，也需要用外源激素進(jìn)行人工催產(chǎn)才能產(chǎn)卵。目前，魚類人工催產(chǎn)激素多采用促黃體素釋放激素或其類似物和注射用人絨毛膜促性腺激素等。嚴(yán)正凜等[20]對大黃魚進(jìn)行人工催產(chǎn)，發(fā)現(xiàn)使用促黃體素釋放激素類似物-A3配合人絨毛膜促性腺激素比單一使用促黃體素釋放激素類似物-A3催產(chǎn)效果更好。李明云等[21]使用劑量為0.8～1.8 μg/kg 促黃體素釋放激素-A3對魚(Miichthysmiiuy)進(jìn)行人工催產(chǎn)，獲得96.83%的催產(chǎn)率、52%的受精率和70%的孵化率。張美昭等[22]開展了花鱸(Lateolabraxjaponicus)親魚人工培育與催產(chǎn)技術(shù)的研究，發(fā)現(xiàn)對雌魚注射外源激素人絨毛膜促性腺激素(700～1500 IU/kg)和促黃體素釋放激素-A3(2～5 μg/kg)，雄魚減半注射，受精卵平均孵化率為85.7%。本試驗中，使用促黃體素釋放激素-A2(1.2 μg/kg)搭配人絨毛膜促性腺激素(500 IU/kg)對小黃魚進(jìn)行催產(chǎn)，獲得最好的受精率和孵化率，分別為23.35%和80.56%。魚卵的受精率和孵化率在很大程度上取決于卵子的質(zhì)量[23]，質(zhì)量高的魚卵呈橙黃色，大小比較均勻飽滿，且彈性強，受精率高，卵裂整齊；不熟或過熟的卵子顏色較淡，大小不均且不圓，受精率低，卵裂不規(guī)則。在小黃魚人工育苗過程中發(fā)現(xiàn)，采集的魚卵里“差卵”占相當(dāng)大的比例，顯微鏡下觀察到受精卵在原腸期的大量“死亡”，分析其原因可能為該批小黃魚年齡較小(1齡)，為首次性成熟，卵子本身質(zhì)量較差。

本試驗針對小黃魚的室內(nèi)越冬、親魚強化培育和催產(chǎn)技術(shù)進(jìn)行了初步試驗，弄清了人工養(yǎng)殖條件下1齡小黃魚的繁殖水溫、懷卵量和催產(chǎn)素及劑量的相關(guān)參數(shù)，并于2015年7月成功繁育出平均全長5 cm的小黃魚苗種3萬余尾。下一步試驗將開展小黃魚性腺發(fā)育、胚胎發(fā)育、大規(guī)模苗種培育和養(yǎng)殖等方面研究，以完善小黃魚的基礎(chǔ)生物學(xué)研究。

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BroodstockCultivationandSpawningInductionTechniquesinSmallYellowCroakerPseudosciaenapolyactis

CHEN Ruiyi1, LOU Bao1, ZHAN Wei1, XU Dongdong1, CHEN Lin2, LIU Feng3,WANG Ligai3, SUN Chen2

( 1. Key Lab of Mariculture and Enhancement, Marine Fisheries Research Institute of Zhejiang, Zhoushan 316021, China; 2. Xiangshan Ocean Fisheries Bureau, Xiangshan 315700, China; 3. Zhejiang Ocean University, Zhoushan 316022, China )

The experiment was conducted to establish the technique of indoor overwintering, broodstock cultivation and spawning induction for small yellow croakerPseudosciaenapolyactisbased on biological identification from 2014 to 2015. The results showed that there were significantly higher ovary weight and gonado-somatic index (GSI) in the experimental group than those in the control group (P<0.05), indicating that the GSI and relative fecundity of small yellow croaker were enhanced by feeding high-protein diet with VCand VE. The optimum fertilization rate of 23.35% and hatching rate of 80.56%, were observed by injection of LHRH-A2and 500 IU/kg HCG at a dose of 1.2 μg/kg.

Pseudosciaenapolyactis; broodstock cultivation; spawning induction

10.16378/j.cnki.1003-1111.2016.03.010

S965.399

A

1003-1111(2016)03-0250-05

2015-10-28；

2015-12-21.

浙江省科技計劃項目(2015F50006；2015F10001)；舟山市科技計劃項目(2014C31061)；象山縣科技計劃項目(2015C0001).

陳睿毅(1987-)，男，助理工程師，碩士；研究方向：魚類遺傳育種. E-mail：xx_cry@163.com.通訊作者：樓寶(1969-)，男，教授；研究方向：魚類遺傳育種. E-mail：loubao6577@163.com.