彭澤鯽F1、F2代雌雄魚(yú)Vtg B和ZP2表達(dá)及卵黃蛋白原含量差異研究

鄭 堯，陳家長(zhǎng)，邴旭文，王在照

( 1. 中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院 淡水漁業(yè)研究中心，農(nóng)業(yè)部淡水魚(yú)類遺傳育種與養(yǎng)殖生物學(xué)重點(diǎn)開(kāi)放實(shí)驗(yàn)室，農(nóng)業(yè)部長(zhǎng)江下游漁業(yè)資源環(huán)境科學(xué)觀測(cè)實(shí)驗(yàn)站，中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院內(nèi)陸漁業(yè)生態(tài)環(huán)境與資源重點(diǎn)開(kāi)放實(shí)驗(yàn)室，南京農(nóng)業(yè)大學(xué)漁業(yè)學(xué)院，無(wú)錫 江蘇 214081； 2. 西北農(nóng)林科技大學(xué) 動(dòng)物科技學(xué)院，陜西省農(nóng)業(yè)分子生物學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，楊凌 陜西 712100 )

彭澤鯽F1、F2代雌雄魚(yú)Vtg B和ZP2表達(dá)及卵黃蛋白原含量差異研究

鄭 堯1，陳家長(zhǎng)1，邴旭文1，王在照2

( 1. 中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院 淡水漁業(yè)研究中心，農(nóng)業(yè)部淡水魚(yú)類遺傳育種與養(yǎng)殖生物學(xué)重點(diǎn)開(kāi)放實(shí)驗(yàn)室，農(nóng)業(yè)部長(zhǎng)江下游漁業(yè)資源環(huán)境科學(xué)觀測(cè)實(shí)驗(yàn)站，中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院內(nèi)陸漁業(yè)生態(tài)環(huán)境與資源重點(diǎn)開(kāi)放實(shí)驗(yàn)室，南京農(nóng)業(yè)大學(xué)漁業(yè)學(xué)院，無(wú)錫 江蘇 214081； 2. 西北農(nóng)林科技大學(xué) 動(dòng)物科技學(xué)院，陜西省農(nóng)業(yè)分子生物學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，楊凌 陜西 712100 )

雌核發(fā)育彭澤鯽后代理論上應(yīng)為全雌群體，前期研究發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)室養(yǎng)殖彭澤鯽F1代(相比池塘養(yǎng)殖)和實(shí)驗(yàn)室高密度養(yǎng)殖F2代(1.28尾/L, 相比低密度0.64尾/L)組中出現(xiàn)了高比例的雄魚(yú)。之前研究認(rèn)為Vtg B和ZP2基因是雌性特異性表達(dá)的基因，本試驗(yàn)對(duì)F1、F2代雌雄魚(yú)Vtg B和ZP2表達(dá)及卵黃蛋白原含量差異進(jìn)行研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn),實(shí)驗(yàn)室養(yǎng)殖F1代雄魚(yú)性腺中Vtg B和ZP2的表達(dá)分別極顯著和顯著高于雌魚(yú)(P<0.01,P<0.05)；池塘養(yǎng)殖F1代雄魚(yú)性腺中Vtg B和ZP2的表達(dá)分別極顯著高于和低于雌魚(yú)(P<0.01)；F2代低密度養(yǎng)殖組中雄魚(yú)性腺中ZP2的表達(dá)極顯著高于雌魚(yú)(P<0.01)。實(shí)驗(yàn)室養(yǎng)殖F1代雄魚(yú)肝胰臟中Vtg B和ZP2的表達(dá)分別極顯著高于和低于雌魚(yú)(P<0.01)；池塘養(yǎng)殖F1代雄魚(yú)肝胰臟Vtg B和ZP2的表達(dá)均極顯著低于雌魚(yú)(P<0.01)；F2代雄魚(yú)肝胰臟中Vtg B和ZP2的表達(dá)極顯著高于雌魚(yú)(P<0.01)。F1代實(shí)驗(yàn)室養(yǎng)殖雄魚(yú)全魚(yú)卵黃蛋白原含量極顯著低于雌魚(yú)(P<0.01)；F1代池塘養(yǎng)殖雄魚(yú)性腺、肝胰臟中卵黃蛋白原含量分別極顯著高于和低于雌魚(yú)(P<0.01)；F2代雄魚(yú)性腺、肝胰臟中卵黃蛋白原含量極顯著高于雌魚(yú)(P<0.01)。本研究表明,彭澤鯽Vtg B和ZP2基因并非雌性特異性表達(dá)，且不同的養(yǎng)殖方式、密度影響雌雄魚(yú)Vtg B和ZP2表達(dá)及卵黃蛋白原含量。

雌核發(fā)育；彭澤鯽；卵黃蛋白原；透明帶蛋白；基因表達(dá)

卵黃蛋白原(Vtg)即卵黃蛋白的前體，是一種大分子量的磷酸酯糖蛋白。在雌二醇刺激下，卵黃蛋白原能在肝臟中合成，通過(guò)血液運(yùn)輸，最后被運(yùn)送到卵巢中作為胚胎發(fā)育的營(yíng)養(yǎng)源[1]。透明帶蛋白(ZP)包含四種亞型：ZP1(ZPB)、ZP2(ZPA)、ZP3(ZPC)和ZPX。在硬骨魚(yú)類中，對(duì)ZPB和ZPC基因及其功能的研究相對(duì)較多。一般說(shuō)來(lái)，卵母細(xì)胞能夠合成透明帶蛋白，且在體內(nèi)無(wú)卵母細(xì)胞存在時(shí)，機(jī)體也能夠合成透明帶蛋白[2]。在硬骨魚(yú)中，透明帶蛋白主要在肝臟和卵巢中合成，其表達(dá)模式分為卵巢特異性表達(dá)、肝臟特異性表達(dá)或在卵巢和肝臟組織中共同表達(dá)[3]。透明帶蛋白基因的表達(dá)與卵細(xì)胞的發(fā)生有重要的關(guān)系，青鳉(Oryziaslatipes)中卵巢特異性表達(dá)的透明帶蛋白基因在卵細(xì)胞直徑達(dá)到45 μm時(shí)才可檢測(cè)到表達(dá)；雄性青鳉肝臟特異性表達(dá)的透明帶蛋白基因在正常情況下幾乎不表達(dá)，當(dāng)受到雌激素影響時(shí)，透明帶蛋白會(huì)被誘導(dǎo)有較高的表達(dá)[4-5]。雌激素能夠調(diào)控青鳉肝臟中透明帶蛋白的合成[6]；但斑馬魚(yú)(Daniorerio)卵巢透明帶蛋白表達(dá)則較為靈活，受雌激素的調(diào)控影響較小[7-8]。在魚(yú)類中，一般認(rèn)為卵黃蛋白原和透明帶蛋白是雌魚(yú)的特異蛋白，且都能被雌激素雌二醇誘導(dǎo)，但是雄魚(yú)的肝胰臟中也有卵黃原蛋白和透明帶蛋白基因的存在[9]。

目前有研究表明雄激素也能誘導(dǎo)卵黃原蛋白和透明帶蛋白基因的表達(dá)[10]，且不同的內(nèi)分泌干擾物對(duì)雌雄魚(yú)卵黃原蛋白和透明帶蛋白基因的誘導(dǎo)機(jī)制不同[11]，而目前卵黃蛋白原是環(huán)境激素污染檢測(cè)試劑盒中使用最為成功的生物標(biāo)志物[12-13]，也有觀點(diǎn)認(rèn)為需要將卵黃蛋白原和透明帶蛋白聯(lián)合起來(lái)使用更能增加鑒定的準(zhǔn)確度[9]。本研究將比較F1、F2代雌核發(fā)育彭澤鯽(Carassiusauratusvar. Pengze)雌雄魚(yú)特定器官(性腺和肝胰臟)中Vtg B和ZP2基因的表達(dá)差異，同時(shí)采用ELISA檢測(cè)性腺和肝胰臟中卵黃蛋白原的含量，探究Vtg B和ZP2基因及卵黃蛋白原含量在不同養(yǎng)殖方式、密度下的表達(dá)模式，為雌核發(fā)育物種卵黃發(fā)生機(jī)制研究提供基礎(chǔ)性資料。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

人工雌核發(fā)育彭澤鯽F1代(Pcc)操作于2011年4月20日在湖北荊州窯灣養(yǎng)殖基地進(jìn)行(水溫18 ℃)，父本選擇基地養(yǎng)殖池中3～5齡興國(guó)紅鯉(Cyprinuscarpiovar. red style) (1600 ± 175) g，母本選擇2齡經(jīng)雌核發(fā)育繁殖的彭澤鯽成魚(yú)(450 ± 15) g (n=300)，雌雄魚(yú)采用腹部檢查法分辨，本研究中試驗(yàn)用魚(yú)采用1雄1雌進(jìn)行繁殖并重復(fù)2次，人工催產(chǎn)雌魚(yú)采用絨毛膜促性腺激素(400 IU/kg)、魚(yú)用促黃體素釋放激素類似物(6 μg/kg)和鯉垂體干粉(1 mg/kg, 用0.7%NaCl溶解)劑量配合進(jìn)行，兩次注射間隔時(shí)間為6～8 h，雄魚(yú)減半。

人工雌核發(fā)育彭澤鯽F2代操作按文獻(xiàn)[14]于2013年4月10日進(jìn)行，母本選擇2齡彭澤鯽F1代雌魚(yú)，父本選擇、催產(chǎn)與彭澤鯽F1代操作相同。彭澤鯽的受精卵是以紅鯉的精子來(lái)激活彭澤鯽成熟卵細(xì)胞得到的，然后轉(zhuǎn)入約20 ℃的孵化桶中。子代約3～4 d出膜，半月齡彭澤鯽F2代帶回實(shí)驗(yàn)室采用125 L大玻璃缸養(yǎng)殖(600尾，120 cm×40 cm×80 cm)，將彭澤鯽F2代按不同養(yǎng)殖密度分兩個(gè)密度組進(jìn)行養(yǎng)殖，分別在低密度養(yǎng)殖組，高密度養(yǎng)殖組各放置80，160尾彭澤鯽F2代，養(yǎng)殖時(shí)間直至能鏡檢分出雌雄為止(約7個(gè)月，雌雄魚(yú)分別處于性腺發(fā)育的Ⅱ期)。1月齡內(nèi)喂食蛋黃，1月齡—2月齡按0.1% (m/m)喂食鹵蟲(chóng)(Artemia)，之后選擇商品化的魚(yú)用飼料。鹵蟲(chóng)孵化方法按NaCl質(zhì)量濃度10～15 g/L，pH為7.5～8.5，水溫為28 ℃，充氧培養(yǎng)第2 d收卵，喂食之前用清水洗凈。彭澤鯽養(yǎng)殖條件：水溫(25 ± 1) ℃；光周期14 h∶10 h；pH 7.1 ± 0.5; 溶解氧(7.16 ± 0.16) mg/L; 總磷(2.16 ± 0.17) mg/L; 總氮(0.52 ± 0.15) mg/L; 氨氮(0.44 ± 0.06) mg/L; 總硬度(194.3 ± 13.0) mg/L(按CaCO3算)。

1.2 彭澤鯽 F1、F2代雌雄魚(yú)性腺、肝胰臟中總RNA的提取、質(zhì)量檢測(cè)及反轉(zhuǎn)錄試驗(yàn)

分別取實(shí)驗(yàn)室和池塘養(yǎng)殖F1代(雌雄魚(yú)分別處于各自性腺發(fā)育的Ⅱ期)，低、高密度養(yǎng)殖組中的彭澤鯽F2代雌、雄魚(yú)(雌雄魚(yú)分別處于各自性腺發(fā)育的Ⅱ期，各n=10)進(jìn)行解剖，參照文獻(xiàn)[14]進(jìn)行性腺總RNA提取、質(zhì)量檢測(cè)及反轉(zhuǎn)錄操作。

1.3 彭澤鯽F1、F2代雌雄魚(yú)性腺、肝胰臟中Vtg B和ZP2基因表達(dá)

按文獻(xiàn)[15]對(duì)內(nèi)參基因進(jìn)行篩選，本研究中內(nèi)參基因采用tubulin，檢測(cè)彭澤鯽F1、F2代雌雄魚(yú)性腺、肝胰臟中Vtg B和ZP2基因的表達(dá)。參照文獻(xiàn)[14]進(jìn)行熒光實(shí)時(shí)定量PCR的操作，前期研究獲得了Vtg B(KF373229)和ZP2(KF373231)基因完整編碼區(qū)，定量引物見(jiàn)表1。

表1 定量引物

1.4 彭澤鯽F1、F2代雌雄魚(yú)卵黃蛋白原含量測(cè)定

采取每尾魚(yú)性腺、肝胰臟組織(實(shí)驗(yàn)室養(yǎng)殖彭澤鯽F1代因個(gè)體小取全魚(yú)組織)，用于卵黃蛋白原含量測(cè)定。用于卵黃蛋白原含量測(cè)定試驗(yàn)的組織先稱量質(zhì)量置于冰箱中80 ℃凍存，第2 d按照1∶20(m/V)添加0.1 mol/L磷酸鹽緩沖液(pH 7.4)，用塑料研磨棒在冰上研磨充分，4 ℃，3000 r/min離心10 min，取上清液分裝后一份待檢測(cè)，其余于冰箱中80 ℃凍存?zhèn)溆??？贵w采用純化的銀鯽卵黃蛋白原抗體包被微孔板，檢測(cè)按照上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，檢測(cè)限為3～150 ng/mL。

1.5 數(shù)據(jù)分析

應(yīng)用SPSS 18.0軟件對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行整理分析。試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用相對(duì)表達(dá)量的計(jì)算方法，即相對(duì)表達(dá)量=2-ΔΔCt方法[15]，數(shù)據(jù)結(jié)果均用“平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差”的表示方法?；虮磉_(dá)和卵黃蛋白原含量測(cè)定使用t檢驗(yàn)，P<0.05表明差異顯著，用1個(gè)星號(hào)表示，P<0.01表明差異極顯著用2個(gè)星號(hào)表示。

2 結(jié) 果

2.1 實(shí)驗(yàn)室、池塘養(yǎng)殖彭澤鯽F1代雌雄魚(yú)性腺中Vtg B和ZP2基因表達(dá)差異

彭澤鯽F1代實(shí)驗(yàn)室養(yǎng)殖精、卵巢中Vtg B相對(duì)表達(dá)量(與內(nèi)參相比，下同)分別為35.08±11.76和3.97±2.77，精、卵巢中ZP2相對(duì)表達(dá)量分別為30.24±2.08和10.61±0.96，彭澤鯽F1代實(shí)驗(yàn)室養(yǎng)殖精巢Vtg B和ZP2表達(dá)分別極顯著和顯著高于卵巢中的表達(dá)(P<0.01,P<0.05)(圖1a)。彭澤鯽F1代池塘養(yǎng)殖精、卵巢中Vtg B相對(duì)表達(dá)量分別為1.68±0.37和0.65±0.18，精、卵巢中ZP2相對(duì)表達(dá)量分別為1.69±0.20和1.94±0.48，彭澤鯽F1代池塘養(yǎng)殖精巢Vtg B和ZP2表達(dá)分別顯著高于和低于卵巢中的表達(dá)(圖1b)(P<0.05)。彭澤鯽F2代實(shí)驗(yàn)室養(yǎng)殖精、卵巢中ZP2相對(duì)表達(dá)量分別為2.39±0.13和1.73±0.11，彭澤鯽F2代實(shí)驗(yàn)室高、低密度養(yǎng)殖卵巢ZP2表達(dá)極顯著低于高密度養(yǎng)殖組精巢中的表達(dá)(P<0.01)(圖1c)。

圖1 彭澤鯽F1、F2代雌雄魚(yú)性腺中vtgB和ZP2基因表達(dá)差異比較

注：a,實(shí)驗(yàn)室養(yǎng)殖彭澤鯽F1代; b,池塘養(yǎng)殖彭澤鯽F1代; c,實(shí)驗(yàn)室養(yǎng)殖彭澤鯽F2代. 1個(gè)星號(hào)表示差異顯著(P<0.05), 2個(gè)星號(hào)表示差異極顯著(P<0.01).下同.

2.2 實(shí)驗(yàn)室高、低密度養(yǎng)殖組彭澤鯽F2代雌雄魚(yú)肝胰臟中Vtg B和ZP2基因表達(dá)差異

彭澤鯽F1代實(shí)驗(yàn)室養(yǎng)殖雄、雌魚(yú)肝胰臟中Vtg B相對(duì)表達(dá)量分別為5592.27±314.24和148.42±17.16，雄、雌魚(yú)肝胰臟中ZP2相對(duì)表達(dá)量分別為11.33±2.91和75.12±9.59，彭澤鯽F1代實(shí)驗(yàn)室養(yǎng)殖雄魚(yú)肝胰臟中Vtg B和ZP2表達(dá)分別極顯著高于和低于雌魚(yú)中的表達(dá)(P<0.01)(圖2a)。彭澤鯽F1代池塘養(yǎng)殖雄、雌魚(yú)肝胰臟中Vtg B相對(duì)表達(dá)量分別為0.15±0.33和99.06±16.00，雄、雌魚(yú)肝胰臟中ZP2相對(duì)表達(dá)量分別為0.98±0.11和25.16±4.60，彭澤鯽F1代池塘養(yǎng)殖雄魚(yú)肝胰臟中Vtg B和ZP2表達(dá)分別極顯著低于雌魚(yú)中的表達(dá)(P<0.01)(圖2b)。彭澤鯽F2代實(shí)驗(yàn)室養(yǎng)殖雄、雌魚(yú)肝胰臟中Vtg B相對(duì)表達(dá)量分別為1.45±0.21和0.61±0.13，雄、雌魚(yú)肝胰臟中ZP2相對(duì)表達(dá)量分別為2.60±0.23和0.82±0.10，彭澤鯽F2代實(shí)驗(yàn)室養(yǎng)殖雄魚(yú)肝胰臟中Vtg B和ZP2表達(dá)均極顯著高于雌魚(yú)中的表達(dá)(P<0.01)(圖2c)。

圖2 彭澤鯽F1、F2代雌雄魚(yú)肝胰臟中vtgB和ZP2基因表達(dá)差異比較

a，實(shí)驗(yàn)室養(yǎng)殖F1代; b,池塘養(yǎng)殖F1代; c,實(shí)驗(yàn)室養(yǎng)殖F2代.

2.3 彭澤鯽F1、F2代雌雄魚(yú)卵黃蛋白原含量差異

卵黃蛋白原的標(biāo)準(zhǔn)曲線為y=67.574x-6.5429(r2=0.9981)，可以用于后續(xù)試驗(yàn)的計(jì)算。實(shí)驗(yàn)室養(yǎng)殖彭澤鯽F1代雄、雌魚(yú)全魚(yú)組織中卵黃蛋白原含量分別為(127.38±23.71) ng/mL，(139.32±20.70) ng/mL，雌魚(yú)卵黃蛋白原含量極顯著高于雄魚(yú)中的表達(dá)(P<0.01)(圖3a)。池塘養(yǎng)殖彭澤鯽F1代精、卵巢組織中卵黃蛋白原含量分別為(140.16±17.26) ng/mL，(130.93±26.03) ng/mL，池塘養(yǎng)殖彭澤鯽F1代卵巢中的卵黃蛋白原含量極顯著低于精巢中的表達(dá)(P<0.01)(圖3b)；但是池塘養(yǎng)殖彭澤鯽F1代雄、雌魚(yú)肝胰臟組織中卵黃蛋白原含量分別為(111.44±8.34) ng/mL，(127.19±4.26) ng/mL，雌魚(yú)肝胰臟中卵黃蛋白原含量極顯著高于雄魚(yú)中的表達(dá)(P<0.01)。實(shí)驗(yàn)室養(yǎng)殖彭澤鯽F2代精、卵巢組織中卵黃蛋白原含量分別為(141.51±5.82) ng/mL，(129.57±9.89) ng/mL，彭澤鯽F2代雄、雌魚(yú)肝胰臟組織中卵黃蛋白原含量分別為(144.10±7.93)ng/mL，(111.78±8.46) ng/mL，彭澤鯽F2代雄魚(yú)性腺、肝胰臟組織中卵黃蛋白原含量極顯著高于雌魚(yú)中的表達(dá)(P<0.01)(圖3c)。

圖3 彭澤鯽F1、F2代雌雄魚(yú)卵黃蛋白原含量差異比較

a,實(shí)驗(yàn)室養(yǎng)殖F1代全魚(yú)組織; b,池塘養(yǎng)殖F1代性腺、肝胰臟組織; c,實(shí)驗(yàn)室養(yǎng)殖F2代性腺、肝胰臟組織.

3 討 論

Vtg B和ZP2都是在肝胰臟中合成并運(yùn)送到性腺中發(fā)揮作用的[1]。本研究中池塘養(yǎng)殖彭澤鯽F1代雌魚(yú)肝胰臟中的Vtg B和ZP2表達(dá)極顯著高于雄魚(yú)，與實(shí)驗(yàn)室養(yǎng)殖彭澤鯽F1代不同，原因可能在于魚(yú)卵母細(xì)胞成熟程度不同，對(duì)卵黃蛋白原的需求不同。

實(shí)驗(yàn)室養(yǎng)殖彭澤鯽F1代雌魚(yú)全魚(yú)組織和池塘養(yǎng)殖彭澤鯽F1代雌魚(yú)肝胰臟中卵黃蛋白原均極顯著高于雄魚(yú)較為容易理解：未發(fā)育成熟的雌魚(yú)需要累積卵黃蛋白原為性腺發(fā)育提供能量供應(yīng)[16]；池塘養(yǎng)殖雌魚(yú)采集樣品時(shí)間正好是繁殖季節(jié)，肝胰臟中卵黃蛋白原較多可能與產(chǎn)卵有關(guān)。但池塘養(yǎng)殖彭澤鯽F1代，實(shí)驗(yàn)室養(yǎng)殖彭澤鯽F2代卵巢卵黃蛋白原極顯著低于精巢，且彭澤鯽F2代雌魚(yú)肝胰臟卵黃蛋白原極顯著低于雄魚(yú)肝胰臟，原因可能在于雄魚(yú)沒(méi)有像雌魚(yú)一樣的卵巢用來(lái)儲(chǔ)存卵黃蛋白原和透明帶蛋白[17]，造成了合成的蛋白在肝臟中的積累。本研究中實(shí)驗(yàn)室養(yǎng)殖彭澤鯽F1代卵黃蛋白原水平采用全魚(yú)組織，主要是因?yàn)轸~(yú)太小無(wú)法分離組織(<10 g)，之前也有研究采用全魚(yú)組織證實(shí)全魚(yú)卵黃蛋白原含量和激素相關(guān)[18]。除不同發(fā)育時(shí)期對(duì)卵黃蛋白原需求不一致之外，這說(shuō)明卵黃蛋白原跟血液循環(huán)到肝胰臟和性腺中的雌二醇濃度有關(guān)[19]。本研究表明彭澤鯽Vtg B和ZP2基因并非雌性特異性表達(dá)，且不同的養(yǎng)殖方式、密度影響雌雄魚(yú)Vtg B和ZP2表達(dá)及卵黃蛋白原含量。

繁殖彭澤鯽F2代是為了驗(yàn)證密度是否跟雄魚(yú)過(guò)多有關(guān)，不管是從彭澤鯽F1、F2代性腺、肝胰臟中Vtg B表達(dá)還是從卵黃蛋白原水平來(lái)看，雄魚(yú)都要高于雌魚(yú)，這說(shuō)明實(shí)驗(yàn)室養(yǎng)殖雄魚(yú)肝胰臟積累較多的卵黃蛋白原導(dǎo)致雄魚(yú)精巢出現(xiàn)異常，肝臟腫大。除雌性卵生動(dòng)物外，雄性及幼魚(yú)[如斑馬魚(yú)、劍尾魚(yú)(Xiphophorushehelleri)、孔雀魚(yú)(Poeciliareticulata)等]肝臟也存在卵黃蛋白原基因，但只有在環(huán)境雌激素化學(xué)物的作用下才可以產(chǎn)生卵黃蛋白原[1,4,7,10,12-13]。因此，雄魚(yú)或幼魚(yú)經(jīng)誘導(dǎo)產(chǎn)生的卵黃蛋白原可作為一個(gè)敏感的環(huán)境雌激素暴露標(biāo)記物。而卵黃蛋白原的合成將消耗體內(nèi)一定的能量，因而使原本應(yīng)該用在性腺發(fā)育的能量大部分轉(zhuǎn)向合成卵黃蛋白原，而致使性腺出現(xiàn)明顯滯后現(xiàn)象[20]。也有研究表明孔雀魚(yú)雄魚(yú)性腺系數(shù)的下降幅度與卵黃蛋白原生成量呈負(fù)相關(guān)[21]。這些結(jié)果均表明體內(nèi)激素含量可能影響Vtg B和ZP2表達(dá)，提示著實(shí)驗(yàn)室和池塘養(yǎng)殖的彭澤鯽雌、雄魚(yú)體內(nèi)激素含量上存在差異，這在之前的研究中得到證實(shí)[22]。

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AnalysisofDifferenceinVtgBandZP2TranscriptsandVtgContentbetweenMaleandFemaleF1andF2OffspringsinPengzeCrucianCarp

ZHENG Yao1, CHEN Jiazhang1, BING Xuwen1, WANG Zaizhao2

( 1.Key Open Laboratory of Ecological Environment and Resources of Inland Fisheries, Freshwater Fisheries Research Center, Chinese Academy of Fishery Sciences; Key Laboratory of Genetic Breeding and Aquaculture Biology of Freshwater Fishes, Scientific Observing and Experimental Station of Fishery Resources and Environment in the Lower Reaches of the Changjiang River, Ministry of Agriculture, Wuxi Fisheries College, Nanjing Agricultural University, Wuxi 214081, China; 2. Shaanxi Key Laboratory of Molecular Biology for Agriculture, College of Animal Science and Technology, Northwest A&F University, Yangling 712100, China )

The offsprings of gynogenic Pengze crucian carp (Carassiusauratusvar. Pengze) (Pcc) is mono-female groups theoretically. The previous studies showed that a high proportion of gynogenic male Pcc fish occurred in F1progenies in laboratory culture compared with pond culture condition, and this phenomenon has been demonstrated in the high density groups of F2progenies later. In the present study, the different gene expression of Vtg B, and ZP2 as female-specific gene and Vtg contents were detected between male and female F1and F2progenies. Results showed that testical Vtg B and ZP2 transcripts of F1progenies were significantly higher than those in ovary under laboratory culture condition; testical Vtg B and ZP2 transcripts of F1progenies were significantly higher, lower than those in ovary under pond culture condition; and testical ZP2 transcript of F2progenies was very significantly higher than those in ovary under laboratory culture condition. Male hepatic Vtg B and ZP2 transcripts of F1progenies were very significantly higher, lower than those in ovary under laboratory culture condition; male hepatic Vtg B and ZP2 transcripts of F1progenies were very significantly lower than those in ovary under pond culture condition; and male hepatic Vtg B and ZP2 transcript of F2progenies was very significantly higher than those in ovary under laboratory culture. Male Vtg content of F1progenies was very significantly lower than those in ovary under laboratory culture; male gonadal and hepatic Vtg content of F1progenies were very significantly higher, lower than those in ovary under pond culture condition respectively; and male gonadal, hepatic Vtg content of F2progenies was very significantly higher than those in ovary under laboratory culture condition. The findings referred that Vtg B and ZP2 were not female-specific, and Vtg B, ZP2 transcripts and Vtg contents have been affected in various culture condition and stocking density.

gynogenic; Pengze crucian carp; vitellogenin; zona pellucida; gene expression

S965.199

A

1003-1111(2016)04-0370-06

10.16378/j.cnki.1003-1111.2016.04.010

2015-09-26；

2016-01-11.

國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(31270547).

鄭堯(1986—), 男, 助理研究員，博士；研究方向：水產(chǎn)品質(zhì)量安全及分子毒理學(xué). E-mail: zhengy@ffrc.cn.通訊作者:王在照(1969—), 教授, 博士生導(dǎo)師；研究方向：魚(yú)類內(nèi)分泌干擾物. E-mail: zzwang@nwsuaf.edu.cn.