直腸巨大絨毛狀腺瘤患者環(huán)氧酶-2、p53的表達及臨床意義

鄭建濤 陳 輝 周俊峰 張 琳

(福建醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院胃腸外科，福建 福州 350005)

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直腸巨大絨毛狀腺瘤患者環(huán)氧酶-2、p53的表達及臨床意義

鄭建濤 陳 輝 周俊峰 張 琳

(福建醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院胃腸外科，福建 福州 350005)

目的 探討環(huán)氧酶(Cox)-2、p53的表達對直腸絨毛狀腺瘤經(jīng)內(nèi)鏡黏膜下剝離術(ESD)后復發(fā)的意義。方法 回顧性分析內(nèi)鏡黏膜下剝離術后經(jīng)病理證實為直腸絨毛狀腺瘤的老年患者90例的臨床資料，標本于病理科制作石蠟包塊，根據(jù)術后隨訪情況是否復發(fā)分組，復發(fā)組39例，未復發(fā)組51例，另選取直腸癌及正常直腸標本各10例作為對照，通過免疫組織化學方法檢測Cox-2、p53在各組織中的表達，探討其表達水平對于腺瘤復發(fā)的意義。結果 各組Cox-2、p53表達存在差異。Cox-2表達水平在瘤體直徑大小、是否復發(fā)分組中存在差異，p53表達水平在是否復發(fā)分組中存在差異(P<0.05)。Cox-2與p53的表達呈高度正相關，且為直腸絨毛狀腺瘤復發(fā)的獨立危險因素。結論 Cox-2與p53蛋白高表達與直腸絨毛狀腺瘤的發(fā)生發(fā)展相關，對其表達水平的監(jiān)測可能對預測腫瘤的復發(fā)具有重要意義。

直腸絨毛狀腺瘤；環(huán)氧酶(Cox)-2；p53；免疫組織化學

絨毛狀腺瘤屬于一種消化道常見的癌前病變，好發(fā)于直腸及乙狀結腸，多發(fā)于老年患者，40歲以下患者較少〔1〕。直腸絨毛狀腺瘤的癌變率可達到4%～40%，早期腸鏡活檢極難發(fā)現(xiàn)是否出現(xiàn)癌變，直腸指診常出現(xiàn)遺漏〔2,3〕。有報道稱瘤體大于2 cm時癌變率可達50%以上，但是其具體機制尚不清楚，對于其與生長因子、癌基因的關系是目前研究的熱點〔4,5〕。前列腺素內(nèi)過氧化物合成酶環(huán)氧酶(Cox)-2可將花生四烯酸代謝為各種產(chǎn)物，參與機體的炎癥、發(fā)熱等多種病理過程〔6〕。抑癌基因p53可維持機體細胞基因組的穩(wěn)定，當致癌因素出現(xiàn)，p53會出現(xiàn)缺失突變，從而導致細胞的無限增殖〔7〕。Cox-2及p53均在癌前病變過程中扮演重要角色，本研究對Cox-2及p53在直腸絨毛狀腺瘤術后復發(fā)中的意義進行探討。

1 材料與方法

1.1 臨床材料 回顧性分析我院2011年1月至2014年1月行內(nèi)鏡黏膜下剝離術后經(jīng)病理證實為直腸絨毛狀腺瘤的老年患者(≥60歲)90例的臨床資料，其中男性47例，女性43例，平均年齡(71.39±11.05)歲，瘤體直徑<2 cm 48例，≥2 cm 42例。根據(jù)術后1年內(nèi)隨訪是否復發(fā)分組，復發(fā)組39例，未復發(fā)組51例。另選取年齡、性別匹配的病理科直腸癌標本及正常直腸組織標本各10例作為對照。本次研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學倫理委員批準，標本獲取者家屬知情同意。標本均經(jīng)10%甲醛固定、脫水，常規(guī)石蠟包埋、切片，烤箱烘干備用。

1.2 儀器試劑 低溫冰箱(BCD-272，博西華家電器)，電熱恒溫培養(yǎng)箱(DH-250，中興偉業(yè)儀器)，微量移液器(10～1 000 μl，Gilson)，微波爐(EM-F2108MS1，Sanyo)，生物顯微鏡(ECLIPSE80i，Nikon)。兔抗人Cox-2單克隆抗體、羊抗人p53單克隆抗體、SP免疫組化試劑盒、內(nèi)源性生物素阻斷試劑盒(Boehringer Mannheim)，二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色試劑盒、磷酸鹽緩沖液(PBS)、檸檬酸鹽抗原修復緩沖液(康為世紀)。

1.3 免疫組織化學方法測定Cox-2、p53在各組織中的表達 所有蠟塊4 μm連續(xù)切片，60℃烤箱恒溫干燥，二甲苯脫蠟10 min，梯度酒精脫水5 min，沖洗后PBS浸泡5 min。微波爐加熱檸檬酸鹽組織抗原修復液進行修復，pH6.0，750 W 5 min，150 W 15 min，PBS沖洗甩干。50 μl內(nèi)源性生物素阻斷劑室溫孵育10 min，PBS沖洗3 min。滴加一抗(兔抗人Cox-2單克隆抗體或羊抗人p53單克隆抗體)，4℃冰箱孵育過夜，PBS沖洗；滴加二抗，室溫孵育40 min，PBS沖洗。最后DAB顯色，Nikon顯微鏡下觀察顯色反應。

1.4 鏡下觀察結果判定 Cox-2定位于上皮細胞的胞質、包膜及間質組織，棕黃色為陽性表達。參照相關文獻〔6〕，統(tǒng)計Cox-2在每個標本組織中的表達情況，包括上皮細胞、淺部間質(腺體周邊間質)及深部間質(組織內(nèi)部間質)中的表達。上皮細胞表達評分標準：無表達為0分；0%～25%為1分；26%～50%為2分；≥51%為3分。0～1分為低表達，≥2分為高表達。p53定位于上皮細胞核中，棕黃色為陽性表達。無表達為0分；局部上皮表達為1分；2個高倍鏡異型增生上皮細胞表達；多于2個高倍鏡異型增生上皮細胞表達為3分。0～1分為低表達，≥2分為高表達。

1.5 統(tǒng)計學方法 采用SPSS20.0統(tǒng)計學軟件進行χ2檢驗、Spearman等級相關分析及Logistic多元回歸分析。

2 結 果

2.1 Cox-2、p53在不同標本組織中的表達 Cox-2在腺瘤組織中高表達率顯著高于正常組織(P<0.05)，與癌組織不存在差異(P>0.05)。p53在腺瘤組織中高表達率顯著低于癌組織(P<0.05)，與正常組織不存在差異(P>0.05)。見表1。

表1 Cox-2、p53在不同標本組織中的表達(n)

與正常組織比較：1)P<0.05；與癌組織比較：2)P<0.05

2.2 Cox-2表達與直腸腺瘤臨床特征的關系 Cox-2表達水平在瘤體直徑大小、是否復發(fā)分組中存在差異(P<0.01)，在性別、年齡、瘤體數(shù)目、瘤體部位不存在差異(P>0.05)。見表2。

2.3 p53表達與直腸腺瘤臨床特征的關系 p53表達水平在是否復發(fā)分組中存在差異(P<0.05)，在性別、年齡、瘤體數(shù)目、瘤體部位、瘤體直徑不存在差異(P>0.05)。見表2。

2.4 Cox-2與p53表達相關性 Cox-2與p53在直腸絨毛狀腺瘤中的表達呈高度正相關(r=0.241,P=0.022)。

2.5 Logistic多元回歸分析 Cox-2、p53的高表達均為直腸絨毛膜腺瘤術后復發(fā)的獨立危險因素。見表3。

表2 Cox-2、p53高表達與直腸腺瘤臨床特征的關系(n,n=90)

表3 Logistic多元回歸分析

3 討 論

結直腸癌主要起源于腺瘤，早期發(fā)現(xiàn)腺瘤并進行手術治療是預防癌變的有效手段〔8〕。直腸絨毛狀腺瘤被認為是直腸癌的癌前病變〔9〕。瘤體表面呈絲絨或海綿狀，質軟易碎，高于正常黏膜表面，呈廣基型生長，可單發(fā)可多發(fā)〔10〕，其治療主要以手術治療為主。細胞因子、癌基因提示可能在腺瘤的生長及復發(fā)中起一定作用〔11〕。Cox-2被公認為促進結直腸腫瘤的發(fā)生、發(fā)展，在幾乎所有的腫瘤中也可發(fā)現(xiàn)p53表達水平的增高，Cox-2、p53一般不表達于正常組織中〔12〕，相關文獻也提及腫瘤大小及上皮內(nèi)瘤變等均可上調Cox-2、p53的表達水平，且與腺瘤的復發(fā)也高度相關〔13〕。Cox-2不僅表達于上皮細胞，也可表達于巨噬細胞及成纖維細胞中，該類細胞的積聚可導致正常組織基質的炎性反應，從而導致直腸早期腫瘤的發(fā)生，p53的陽性表達也預示著腫瘤細胞的高增殖性，兩者相互作用促進了腫瘤的產(chǎn)生，本次研究也證實了Cox-2與p53的表達水平具有高度正相關性〔14，15〕。

直腸絨毛狀腺瘤的復發(fā)率極高，本次研究中隨訪的所有患者復發(fā)率與國外相關文獻報道的20%～50%相一致。Cox-2及p53的高表達與結直腸腺瘤的復發(fā)具有高度相關性，Cox-2通過調節(jié)血管生長、細胞凋亡及腫瘤細胞的轉移促進了細胞癌變的過程，其在正常環(huán)境下表達可被嚴格控制，但由于炎性反應等高危因素刺激卻可使其表達迅速升高〔16〕。p53基因的突變使其具有了癌基因活性，使細胞惡性增殖具有抗凋亡的能力，編碼的相關蛋白也喪失了移植細胞增殖的作用，導致腫瘤細胞的無限制生長，對腫瘤的產(chǎn)生、發(fā)展起到促進作用〔17〕，即使手術治療后，該兩類蛋白的表達仍處于失調水平，也不可避免地導致腫瘤的復發(fā)。

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〔2015-01-19修回〕

(編輯 杜 娟)

福建省衛(wèi)生計生委面向農(nóng)村和城市社區(qū)推廣適宜技術項目(No.2015018)

鄭建濤(1967-)，男，副主任醫(yī)師，主要從事胃腸癌研究。

R735.3+7

A

1005-9202(2016)22-5608-03；

10.3969/j.issn.1005-9202.2016.22.051