急、慢性咽炎動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究概況△

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（內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院呼和浩特010110）

急、慢性咽炎動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究概況△

薛淑媛朱丹姚興鳳賈琦王冬睿李春燕*

（內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院呼和浩特010110）

動(dòng)物模型是藥物療效評(píng)價(jià)的良好實(shí)驗(yàn)載體，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究可為臨床合理治療提供依據(jù)，因此，建立一個(gè)適宜的實(shí)驗(yàn)性急、慢性咽炎動(dòng)物模型是十分重要的。本文對(duì)近年來(lái)實(shí)驗(yàn)性急、慢性咽炎動(dòng)物模型的研究現(xiàn)狀做一綜述，以期為廣大研究者探索研究藥物作用機(jī)制及各種治療方法提供理論指導(dǎo)。

急性咽炎 慢性咽炎 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究 動(dòng)物模型

1　引言

咽炎是一種常見(jiàn)的上呼吸道疾病，按照病程長(zhǎng)短和病理改變程度分為急性與慢性咽炎，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究表明急性咽炎是由流感病毒、副流感病毒、柯薩奇病毒、腺病毒、鼻病毒、葡萄球菌、甲型鏈球菌、肺炎雙球菌等病毒和細(xì)菌感染或高溫、粉塵、煙霧等物理或化學(xué)因素刺激而引起的咽部黏膜的急性炎癥[1～3]；慢性咽炎可能因急性咽炎多次復(fù)發(fā)或上呼吸道慢性炎癥、反流性食管炎、慢性支氣管炎等誘發(fā)，也可能由于長(zhǎng)期受物理化學(xué)因素刺激或職業(yè)原因造成用嗓過(guò)度而引起[4～5]。急性咽炎常見(jiàn)的臨床表現(xiàn)為咽干、咽癢、咽痛、有灼熱感或異物感等局部癥狀，全身癥狀較輕；慢性咽炎臨床表現(xiàn)為咽部不適、咽癢、有異物感、灼燒感、干燥感、刺激感，有的還有微痛感等局部癥狀，咽部的分泌物不易咳出，全身癥狀不明顯。不論急性咽炎或慢性咽炎都給患者的正常生活帶來(lái)極大的困擾，因此，對(duì)于治療急、慢性咽炎的藥物研究十分必要。

研究藥物對(duì)急、慢性咽炎是否有效，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究非常關(guān)鍵。復(fù)制或建立成功的急、慢性咽炎動(dòng)物模型，將對(duì)研究治療咽炎及上呼吸道炎癥的藥物的療效及其作用機(jī)制，提供科學(xué)依據(jù)和有價(jià)值的參考。本文將急、慢性咽炎動(dòng)物模型的建立方法綜述如下，以期為研究、復(fù)制或建立急、慢性咽炎動(dòng)物模型提供參考。

2　急性咽炎動(dòng)物模型研究概況

2.1氨水直接噴霧法：采用氨水直接噴霧于大鼠咽部的方法復(fù)制急性咽炎的動(dòng)物模型，主要是利用化學(xué)物質(zhì)刺激咽部黏膜，形成炎癥。具體方法有劉雪艷等[6]采用15％的氨水溶液，給大鼠咽部進(jìn)行噴霧，3撳/次，連噴3d，以制備大鼠急性咽炎模型；劉巖等[7]采用15％的氨水溶液，給大鼠咽部進(jìn)行噴霧，2撳/次，相當(dāng)于6μL氨水溶液，連噴3d，以制備大鼠急性咽炎模型；章晨峰等[8]采用25％的氨水溶液，2次/d在大鼠咽部噴霧，散布面積為150mm2，連噴3d，制備大鼠急性咽炎模型。

采用氨水直接噴霧的方法造模開(kāi)始后，大鼠出現(xiàn)黏液分泌逐漸增多、咽部黏膜充血、腫脹呈鮮紅色等現(xiàn)象；咽部組織炎性變化明顯，黏膜下彌漫性炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)、局部潰瘍、鱗狀上皮明顯增生；使用酶聯(lián)免疫法測(cè)定模型組大鼠血清中相關(guān)細(xì)胞因子的水平，結(jié)果均明顯高于正常大鼠[6～8]。由此可見(jiàn)，采用氨水直接噴霧的方法復(fù)制急性咽炎模型，模型局部與臨床急性咽炎有一定的相似性，但該法對(duì)動(dòng)物傷害比較大，容易出現(xiàn)口腔黏膜灼傷或肺部損傷等現(xiàn)象。

2.2氨水定點(diǎn)定量涂抹法：氨水定點(diǎn)定量涂抹的方法也是利用化學(xué)物質(zhì)刺激咽部黏膜，以形成炎癥。田華潔等[9]采用戊巴比妥鈉將家兔麻醉，用擴(kuò)鼻器將家兔口腔擴(kuò)開(kāi)，用微量進(jìn)樣器對(duì)兔咽后壁上方約1cm處，滴入6％的氨水溶液50μL，1次/d，連滴2d，制備家兔急性咽炎模型。造模后，家兔出現(xiàn)黏液性分泌物增多，咽部組織呈暗紅色，無(wú)光澤，呈現(xiàn)急性充血腫脹狀態(tài)，血常規(guī)檢查顯示中性粒細(xì)胞和嗜酸性粒細(xì)胞水平明顯升高，以上改變提示造模成功。該方法建立的家兔急性咽炎模型與臨床急性咽炎相似，與氨水直接噴霧法相比，對(duì)動(dòng)物的損傷較小。

2.3細(xì)菌注射感染法：細(xì)菌注射感染的方法是利用病毒或細(xì)菌感染咽部黏膜組織，形成炎癥。具體操作有賈恩禮等[10]用戊巴比妥鈉將家兔麻醉，然后用鑷子翻開(kāi)上頜口頰，用帶金黃色葡萄球菌的注射針頭以接近水平方向點(diǎn)刺黏膜，使出血點(diǎn)感染細(xì)菌，24h后即可見(jiàn)受感染黏膜呈現(xiàn)明顯的紅腫或有點(diǎn)狀的膿性分泌物，若一次不成功可進(jìn)行二次感染，以此方法制備家兔急性咽炎模型。梁璐等[11]用帶乙型溶血性鏈球菌的注射針頭，給大鼠上頜口頰部分的口腔黏膜以接近與口腔黏膜水平方向，注入約為0.02mL細(xì)菌溶液，24h后重復(fù)感染一次，以制備大鼠急性咽炎模型。章晨峰等[8]用水合氯醛麻醉大鼠，然后翻開(kāi)大鼠上頜口頰部分的口腔黏膜，用帶金黃色葡萄球菌的注射針頭，以接近水平方向，注入約為0.1mL細(xì)菌溶液，24h后重復(fù)感染一次，以制備大鼠急性咽炎模型。

通過(guò)細(xì)菌注射感染的方法制備急性咽炎模型，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物咽部出現(xiàn)紅腫、受感染黏膜有點(diǎn)狀的膿性分泌物，或出現(xiàn)黏膜上皮角化嚴(yán)重，釘突明顯，腺體細(xì)胞肥大增生，黏膜的固有層、黏膜下層、肌層的間質(zhì)可見(jiàn)明顯的炎細(xì)胞浸潤(rùn)，但皮下出血和血管擴(kuò)張較不明顯的現(xiàn)象，血清中一氧化氮和髓過(guò)氧化物酶的水平較空白組明顯升高，IL-1β、IL-6β、TNF-α等水平較空白組明顯升高。該方法建立的急性咽炎模型，致病因素與臨床急性咽炎相同，表征也與臨床相近，說(shuō)明該方法建立的急性咽炎模型成功。

3　慢性咽炎動(dòng)物模型研究概況

3.1氨水直接噴霧法：該方法主要是利用低濃度的氨水溶液長(zhǎng)時(shí)間刺激咽部黏膜，形成慢性炎癥。具體操作有南淑玲等[12]采用2.5％的氨水溶液噴大鼠咽部，2次/d，3撳/次，連噴15d，制備大鼠慢性咽炎模型；王藝等[13]采用5％的氨水溶液噴大鼠咽部，噴霧3次/d，2撳/次，連噴21d，制備大鼠慢性咽炎模型；李雪梅等[14]采用4％的氨水溶液噴家兔咽部，噴霧2次/d，3撳/次，連噴14d，制備家兔慢性咽炎模型；李凱等[15]采用2.5％的氨水溶液給大鼠咽部噴霧，1次/d，3撳/次，連噴15d，制備大鼠慢性咽炎模型。

通過(guò)氨水直接噴霧的方法建立慢性咽炎動(dòng)物模型，大鼠出現(xiàn)咽部黏膜組織和纖維組織明顯增生，血管擴(kuò)張、炎性細(xì)胞浸潤(rùn)等現(xiàn)象；家兔出現(xiàn)體重下降、頻飲水、分泌物增多、納食和自發(fā)活動(dòng)減少，咽部充血、黏膜及其組織有不同程度出血、水腫，炎細(xì)胞浸潤(rùn)明顯，并有嚴(yán)重淤血、局部成膿腫等現(xiàn)象，TNF-α等細(xì)胞因子水平顯著升高，由此可見(jiàn)，采用氨水直接噴霧的方法可以復(fù)制慢性咽炎動(dòng)物模型。

3.2氨水+松節(jié)油復(fù)合因素法：采用氨水+松節(jié)油法復(fù)制慢性咽炎模型，其中氨水作為刺激性物質(zhì)，通過(guò)長(zhǎng)時(shí)間局部噴霧反復(fù)刺激咽部黏膜，其間將松節(jié)油注射于咽部黏膜下，對(duì)咽部組織產(chǎn)生持續(xù)性刺激，二者結(jié)合，使咽部組織逐漸形成慢性炎癥。具體方法有祁友松等[16]采用2.5％的氨水溶液，噴于兔咽部，1次/d，連噴20d，其間于d11將25％的松節(jié)油注射于兔咽部左右兩側(cè)黏膜下，每只動(dòng)物按0.2mL/kg計(jì)算，制備家兔慢性咽炎模型；張丹丹等[17]采用2.5％的氨水溶液，噴于兔咽部，2次/d，連噴16d，d8將松節(jié)油注射于兔咽部黏膜下，每只動(dòng)物0.5mL，制備家兔慢性咽炎模型。

采用本法復(fù)制慢性咽炎模型，模型動(dòng)物的咽部黏膜炎性細(xì)胞浸潤(rùn)、水腫，上皮層發(fā)生輕度增生性改變，釘突延長(zhǎng)，固有膜內(nèi)見(jiàn)散在彌漫性炎細(xì)胞浸潤(rùn)，血管擴(kuò)張明顯，黏膜下層內(nèi)黏液腺分泌較多，漿內(nèi)含大量分泌顆粒，以上改變說(shuō)明氨水+松節(jié)油法可成功復(fù)制慢性咽炎動(dòng)物模型。

3.3細(xì)菌注射感染法：梁璐[18]給每只大鼠上頜口頰部分的口腔黏膜，以接近與口腔黏膜水平方向，用注射針頭注入濃度為108cfu/mL的乙型溶血性鏈球菌溶液0.02mL，每3天重復(fù)感染一次，連續(xù)15d，以制備大鼠慢性咽炎模型。

采用本法制備慢性咽炎模型，大部分實(shí)驗(yàn)動(dòng)物從造模開(kāi)始就出現(xiàn)少納食、頻飲水、精神狀態(tài)欠佳、體重增長(zhǎng)緩慢的情況，造模結(jié)束后，大鼠咽部黏膜上皮增生明顯，存在明顯的炎細(xì)胞彌漫性浸潤(rùn)現(xiàn)象，血管擴(kuò)張和顯微組織增生現(xiàn)象明顯，且伴有黏液腺分布，和空白組比較存在顯著差異，說(shuō)明該方法可成功復(fù)制慢性咽炎動(dòng)物模型。

4　其他咽炎動(dòng)物模型研究概況

4.1去勢(shì)法：戚本明等[19]將大鼠麻醉后，切除雙側(cè)卵巢，30d后大鼠咽部黏膜發(fā)生萎縮性改變，成功制備大鼠萎縮性咽炎模型。

采用本法制備萎縮性咽炎模型，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物去勢(shì)后15d開(kāi)始，血清中的雌二醇水平顯著降低，促黃體生成素水平顯著升高；咽部黏膜組織在去勢(shì)后30d開(kāi)始發(fā)生萎縮性改變，說(shuō)明該法可以成功制備萎縮性咽炎動(dòng)物模型。

5　討論

建立動(dòng)物模型是藥物療效評(píng)價(jià)的重要環(huán)節(jié)，適宜的動(dòng)物模型不僅能反映藥物作用的效果，還能為臨床合理治療提供依據(jù)，建立成功的急、慢性咽炎動(dòng)物模型對(duì)探索研究治療咽炎的藥物作用機(jī)制及各種治療方法，具有重要意義。

采用致病菌致炎的動(dòng)物咽炎模型，與人類(lèi)發(fā)病機(jī)制較為相近，但是由于感染致病菌的動(dòng)物具有一定的傳染性，實(shí)驗(yàn)操作者會(huì)有被感染風(fēng)險(xiǎn)，對(duì)實(shí)驗(yàn)安全性要求較高，使該方法使用受限。

氨水直接噴霧法、氨水定點(diǎn)定量涂抹法、氨水+松節(jié)油法等以化學(xué)物質(zhì)刺激致炎的動(dòng)物咽炎模型，模型動(dòng)物病理?yè)p傷和血清細(xì)胞因子指標(biāo)變化與臨床指標(biāo)有一定的相似性，且操作方法簡(jiǎn)單、安全，雖然可能由于操作不當(dāng)造成實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的黏膜損傷、肺灼傷等情況，但仍然是目前使用最廣泛的模型建立方法。

去勢(shì)法制備的動(dòng)物咽炎模型，主要是使動(dòng)物體內(nèi)激素水平下降引起萎縮性咽炎，該模型對(duì)于研究治療更年期女性因激素水平降低引發(fā)的咽部不適具有一定的幫助作用。

綜上所述，廣大研究者可以根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮蜅l件選擇適當(dāng)?shù)哪Ｐ徒⒎椒ā?/p>

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△基金支持：2016內(nèi)蒙古自治區(qū)創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計(jì)劃項(xiàng)目（201610132001）；2016內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)英才培育項(xiàng)目；2016內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)室開(kāi)放基金項(xiàng)目（2016ZN05）。

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