飼料中添加抗菌肽對紅姑魚幼魚生長性能及血清激素水平的影響

鄭宗林，趙永志，Sergio Castillo

(1 西南大學(xué)榮昌校區(qū),水產(chǎn)動物繁育和健康養(yǎng)殖研究中心,重慶 402460;2 Department of Wildlife and Fisheries Sciences,Texas A&M University,College Station,Texas，77843-2258 USA；3 蘇州海特科生物科技有限公司，江蘇 蘇州 215100)

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飼料中添加抗菌肽對紅姑魚幼魚生長性能及血清激素水平的影響

鄭宗林1,2，趙永志3，Sergio Castillo2

(1 西南大學(xué)榮昌校區(qū),水產(chǎn)動物繁育和健康養(yǎng)殖研究中心,重慶 402460;2 Department of Wildlife and Fisheries Sciences,Texas A&M University,College Station,Texas，77843-2258 USA；3 蘇州海特科生物科技有限公司，江蘇 蘇州 215100)

【目的】 評價抗菌肽(Antimicrobial peptides，AMPs)對紅姑魚(Sciaenopsocellatus)幼魚生長性能和血清激素水平的影響。【方法】 在基礎(chǔ)飼料中添加不同劑量的抗菌肽(0，0.1，0.3和0.5 g/kg)作為試驗(yàn)飼料(即A0，A100，A300和A500組)，飼喂平均體質(zhì)量為(1.57±0.17) g/尾的紅姑魚8周，測定各組紅姑魚生長性能、血清激素(GH、T3、T4和IGF-I)水平，A0和A300組紅姑魚停飼后不同時間點(diǎn)的血清激素水平及肌肉和肝臟中IGF-I mRNA表達(dá)豐度?！窘Y(jié)果】 A300和A500組紅姑魚增重率、飼料效率和蛋白效率都顯著高于A0組 (P<0.05)，A100、A300和A500組的蛋白沉積率和成活率顯著高于A0組(P<0.05)。A300和A500組含肉率和魚體粗蛋白含量顯著高于A0組(P<0.05)，對形體指標(biāo)和體組成的其他指標(biāo)均無顯著影響(P>0.05)。養(yǎng)殖4,6,8周抗菌肽對血清中GH水平無顯著影響(P>0.05)；A300和A500組血清T3、T4和IGF-I含量顯著高于A0組(P<0.05)。停飼后72 h內(nèi)持續(xù)取樣發(fā)現(xiàn)，A300組的血清IGF-I在停飼后2 h時達(dá)峰值，且在2和4 h時血清IGF-I含量顯著高于A0組(P<0.05)。A300組的IGF-I mRNA在肝臟和肌肉中的表達(dá)量在4 h時達(dá)峰值(P<0.05)?！窘Y(jié)論】 飼料中添加抗菌肽0.3 g/kg可促進(jìn)紅姑魚的生長，提高飼料效率，增加含肉率?？咕呐c血清GH的分泌無顯著相關(guān)性，但可提高血清IGF-I水平及IGF-I mRNA在肌肉和肝臟中的表達(dá)量。

紅姑魚；抗菌肽；生長性能；血清激素；IGF-I mRNA

紅姑魚(Sciaenopsocellatus)屬鱸形目，石首魚科，擬石首魚屬，是我國海水網(wǎng)箱養(yǎng)殖的主要品種之一。目前對紅姑魚生物學(xué)特性[1]、人工育苗[1]、營養(yǎng)素需求[2]、養(yǎng)殖模式和環(huán)境[3-4]，及飼料功能性物質(zhì)[5]等方面已有較充分的研究。

抗菌肽(AMPs)是一類具有抗菌活性的天然小分子蛋白。自1975年瑞典科學(xué)家Boman等從蠶蛹中分離得到第一個抗菌肽天蠶素(Cecropin)以來，在昆蟲、兩棲類、水產(chǎn)動物以及包括人在內(nèi)的哺乳動物，甚至植物及細(xì)菌等廣泛的生物譜中發(fā)現(xiàn)了1 700余種抗菌肽[6]?？咕膸缀跏撬猩锓N都有的重要免疫分子，它具有廣譜抗菌、抗病毒、抗真菌、抗寄生蟲及抗腫瘤等生物活性[7]。目前，抗菌肽在凡納濱對蝦(Litopenaeusvannamei)[7-9]、錦鯉(Cyprinuscarpiokoi)[10]、花鱸(Lateolabraxjaponicus)[11]和湘云鯽(Triploidcruciancarp)[12]等中均表現(xiàn)出良好的促生長效果，并可增強(qiáng)非特異性免疫性能，但未涉及到對內(nèi)分泌機(jī)能，如血清激素水平影響的研究。本試驗(yàn)研究了抗菌肽對紅姑魚生長性能和血清激素水平的影響，通過觀察紅姑魚血清激素水平的變化，從內(nèi)分泌角度探討抗菌肽對紅姑魚生理機(jī)能的影響。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

試驗(yàn)采用單因素設(shè)計(jì)。在基礎(chǔ)飼料中添加不同劑量(0，0.1，0.3和0.5 g/kg)的AMPs(柞蠶代謝物抗菌肽，活性單位20 000 U/g，由蘇州海特科生物科技有限公司提供)，即A0、A100、A300和A500組，每組設(shè)3個重復(fù)。所有飼料組分經(jīng)過V型混合機(jī)混合20 min后，加定量魚油和約20%蒸餾水混合攪拌、制粒(3 mm)，在25 ℃陰干約24 h。飼料基本組分按AOAC(1995)[13]的方法進(jìn)行，飼料配方見表1。

表 1 試驗(yàn)飼料配方及營養(yǎng)分析(風(fēng)干物質(zhì))

1.2 試驗(yàn)方法

試驗(yàn)在美國德州農(nóng)工大學(xué)水產(chǎn)養(yǎng)殖研究中心(Texas A&M Aquacultural Research and Teaching Facility，USA)進(jìn)行。紅姑魚幼魚購于德州海洋水產(chǎn)研究中心(the Sea Center Texas Marine Aquarium)，先在室內(nèi)暫養(yǎng)2周以適應(yīng)環(huán)境。暫養(yǎng)和試驗(yàn)期間，每天早上10:00和下午16:00投喂A0組飼料至飽食。

試驗(yàn)用水族缸水容積38 L，養(yǎng)殖水經(jīng)過沉淀、曝氣、生物過濾、紫外消毒后再進(jìn)入養(yǎng)殖系統(tǒng)，水體鹽度保持在5～7 g/L。每缸中的水流速為1 L/min，溶氧飽和度為90%左右，水溫控制在(26±1.0) ℃。光照時間為12 h。每個水族缸放20尾魚，體質(zhì)量(1.57±0.17) g/尾。每天投喂相應(yīng)試驗(yàn)飼料至表觀飽食，持續(xù)8周。每周稱整缸魚的體質(zhì)量，調(diào)整投餌率，以保證飼料不浪費(fèi)。

1.3 生長性能及內(nèi)分泌指標(biāo)測定

養(yǎng)殖試驗(yàn)結(jié)束后，每缸魚整體稱體質(zhì)量。每缸隨機(jī)取3尾魚，用MS222麻醉后，解剖魚體，分離肌肉、肝臟、內(nèi)臟脂肪等組織，測量魚形體指標(biāo)和臟體質(zhì)量。試驗(yàn)魚體干物質(zhì)、粗蛋白、粗脂肪、灰分采用AOAC(1995)[13]的方法測定，水分于105 ℃烘干至恒質(zhì)量測定。

成活率=各組剩余魚(尾)/各組試驗(yàn)魚(尾)×100%；增重率(Weight gain，WG)=(末均體質(zhì)量(g)-初均體質(zhì)量(g))/初均體質(zhì)量(g)×100%；餌料系數(shù)(Feed conversion ratio，F(xiàn)CR)=攝食量(g)/(末均體質(zhì)量(g)-初均體質(zhì)量(g))；蛋白貯積率(Protein retentionefficiency，PRE)=魚體積累蛋白(g)/蛋白攝食量(g)×100%；肥滿度(Condition factor，CF)=體質(zhì)量(g)/魚體全長(cm)3×100%；含肉率(Muscle retention,MR)=肌肉質(zhì)量(g)/體質(zhì)量(g)×100%；內(nèi)臟脂肪比(Intraperitoneal fat，IPF)=內(nèi)臟脂肪質(zhì)量(g)/體質(zhì)量(g)×100%；肝胰指數(shù)(Hepatopancreas index，HSI)=肝胰臟質(zhì)量(g)/體質(zhì)量(g)×100%。

1.4 血清及基因表達(dá)分析

養(yǎng)殖試驗(yàn)第4，6和8周末投喂結(jié)束后4 h，每缸取2尾魚，從尾靜脈取血，6 000g離心12 min后，取上清液，-80 ℃保存至備用。養(yǎng)殖試驗(yàn)結(jié)束后，發(fā)現(xiàn)A300組紅姑魚的生長性能等指標(biāo)表現(xiàn)最佳，為進(jìn)一步探討抗菌肽可能的作用機(jī)理，對停飼后不同時間點(diǎn)(0，1，2，4，6，8，12，16，24，36，48，60和72 h)的A0和A300組的紅姑魚尾靜脈取血，并分離肝臟和肌肉，測定內(nèi)分泌激素水平和組織mRNA豐度。

血清甲狀腺激素三碘甲腺原氨酸(T3)和甲狀腺素(T4)含量采用放射免疫技術(shù)進(jìn)行測定，根據(jù)Loter等[14]和Cohn等[15]的方法進(jìn)行。實(shí)際檢測限為0.1 ng/mL；T3和T4含量組內(nèi)變異系數(shù)<6.0%；組間變異系數(shù)<10.0%(T3)和<17.0%(T4)。

血清生長激素(GH)采用酶聯(lián)免疫法(ELISA)測定[16]。免疫板在碳酸鹽緩沖液中用配位體包被，4 ℃孵育過夜，加入山羊血清(NGS，Sigma)繼續(xù)孵育過夜。血清樣品用緩沖液按1∶4(體積比)稀釋，與NGS和一抗(兔抗紅姑魚GH)混合。檢測限為0.2 ng/mL；組內(nèi)和組間變異系數(shù)分別為<7.0%和<10.0%。

血清類胰島素樣生長因子I(IGF-I)采用競爭性時間分辨免疫熒光法[17]測定，用羊抗兔包被的96孔板(Reacti-BindTM)進(jìn)行檢測(Pierce,Rockford, IL,USA)，其檢測限及變異系數(shù)與GH相同。IGF-I在血清中的回收率>90%。

肌肉和肝組織中IGF-I mRNA表達(dá)量的測定按Peterson等[18]的方法進(jìn)行。使用iCycleriQ RT-PCR檢測系統(tǒng)進(jìn)行定量實(shí)時多聚酶聯(lián)反應(yīng)(qPCR)，定量IGF-I和核糖體18S mRNA亞基。

1.5 統(tǒng)計(jì)分析

用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS 17.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。試驗(yàn)結(jié)果經(jīng)過一元方差分析(one-way ANOVA)后，進(jìn)行Duncan’s多重比較各試驗(yàn)組間差異的顯著性，P<0.05表示差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 抗菌肽對紅姑魚生長性能的影響

由表2可知，飼料中添加AMPs對紅姑魚增重率、餌料系數(shù)、蛋白貯積率和成活率都有顯著影響。A300和A500組紅姑魚WG和PRE都顯著高于A0組，F(xiàn)CR則顯著低于A0組(P<0.05)，A100、A300和A500組的紅姑魚成活率顯著高于A0組(P<0.05)。

2.2 抗菌肽對紅姑魚形體指標(biāo)和體組成的影響

由表3可知，AMPs對紅姑魚CF、HSI和IPF無顯著影響(P>0.05)，A300和A500組紅姑魚MR顯著高于A0組(P<0.05)。AMPs對紅姑魚全魚Moi、EE和Ash無顯著影響(P>0.05)；A300和A500組的魚體CP含量顯著高于A0及A100組(P<0.05)。

表 2 抗菌肽對紅姑魚生長性能、飼料利用和成活率的影響

注：表中數(shù)據(jù)為3個體質(zhì)量重復(fù)樣本的平均值;同列數(shù)據(jù)后標(biāo)不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)。下同。

Note:Values represent means of 3 replicate samples；Different lowercase letters within each column indicate significant difference (P<0.05).The same below.

表 3 抗菌肽對紅姑魚形體指標(biāo)和體組成的影響

2.3 抗菌肽對紅姑魚血清激素水平的影響

2.3.1 養(yǎng)殖期間 由表4可以看出，養(yǎng)殖試驗(yàn)第4，6和8周末，AMPs對紅姑魚血清生長激素(GH)水平無顯著影響(P>0.05)；除第4周A300組T4含量與A0組無顯著差異(P>0.05)外，A300和A500組血清T3、T4和IGF-I水平顯著高于A0組(P<0.05)。

2.3.2 停飼后不同時間 停飼后不同時間抗菌肽對紅姑魚血清激素水平的影響見圖1～4。

表 4 抗菌肽對紅姑魚血清激素水平的影響

圖 1 抗菌肽對紅姑魚血清中生長激素變化的影響

*表示該時間點(diǎn)有顯著性差異(P<0.05)。下圖同

圖 3 抗菌肽對紅姑魚肝臟中IGF-I mRNA豐度變化的影響

圖 4 抗菌肽對紅姑魚肌肉中IGF-I mRNA豐度變化的影響

由圖1～4可以看出，在紅姑魚停飼后72 h內(nèi)的各時間點(diǎn)，A300組的血清GH含量與A0組均無顯著差異(P>0.05)，但停飼后16 h內(nèi)，A300組血清GH含量均高于A0組，并在6 h時達(dá)峰值，隨后緩慢下降。A300組的血清IGF-I含量在停飼后16 h內(nèi)均高于A0組，并在2 h達(dá)峰值，且2 h和4 h時的血清IGF-I含量顯著高于A0組(P<0.05)。A300組的肝臟和肌肉IGF-I mRNA的表達(dá)量在停飼后4 h達(dá)峰值，且2 h和4 h時表達(dá)量顯著高于A0組(P<0.05)。

3 討 論

抗菌肽的相對分子質(zhì)量一般為 2 000～7 000 U，由20～60個氨基酸殘基組成[19-21]；這類活性多肽多數(shù)具有強(qiáng)堿性、熱穩(wěn)定性及廣譜抗菌等特點(diǎn)，對正常的真核細(xì)胞幾乎無作用，僅作用于原核細(xì)胞和發(fā)生病變的真核細(xì)胞，并且與傳統(tǒng)抗生素阻斷細(xì)菌大分子生物合成的作用機(jī)制完全不同，病原菌不易對其產(chǎn)生耐藥性，具有獨(dú)特的研究和應(yīng)用價值[6]。宋理平等[8]在凡納濱對蝦飼料中添加10 g/kg抗菌肽后，發(fā)現(xiàn)對蝦的增重率和成活率都有顯著提高。林鑫等[10]在飼料中添加0.15 g/kg的抗菌肽后，錦鯉的末體質(zhì)量和特定生長率顯著提高。王自蕊等[12]在飼料中添加2.5 g/kg的天蠶素抗菌肽，湘云鯽增重率、特定生長率及肥滿度都顯著高于對照組。姜珊等[22]研究發(fā)現(xiàn)，飼料中添加0.005～0.01 g/kg抗菌肽可以顯著提高羅非魚的增重率、紅細(xì)胞總數(shù)以及過氧化氫酶活性；當(dāng)添加量為0.05 g/kg時，特定生長率最高，肝臟的超氧化物歧化酶與血清中溶菌酶活性較對照組顯著降低。但夏耘等[11]在飼料中添加0.3 g/kg的抗菌肽，發(fā)現(xiàn)其對花鱸生長和飼料利用都無顯著影響。本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，飼料中添加0.3～0.5 g/kg抗菌肽后，紅姑魚增重率、飼料效率、蛋白貯積率和成活率等指標(biāo)均顯著提高。

柴仙琦等[9]在凡納濱對蝦飼料中添加0.3 g/kg的抗菌肽后，蝦體增重率、成活率、飼料利用率和肌肉粗脂肪含量均顯著提高。但本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，添加抗菌肽并未顯著影響紅姑魚的肥滿度、肝胰指數(shù)及魚體脂肪含量。這可能是抗菌肽對甲殼動物與脊椎動物的作用機(jī)理不同所致。

調(diào)節(jié)生長性能的內(nèi)分泌激素主要有生長激素(GH)、類胰島素樣生長因子I(IGF-I)和甲狀腺素(T3和T4)等[23]。魚類內(nèi)分泌系統(tǒng)對營養(yǎng)攝入的變化非常敏感，營養(yǎng)因素在調(diào)控魚類激素的合成與分泌中發(fā)揮著重要作用[24]。硬骨魚的能量代謝與生長是通過一個復(fù)雜的內(nèi)分泌系統(tǒng)來調(diào)節(jié)的，內(nèi)分泌系統(tǒng)中包括各種激素，其中血清GH與IGF-I發(fā)揮著重要作用。對哺乳動物的研究發(fā)現(xiàn)，使用垂體可以引起GH分泌量增加，水產(chǎn)動物上也觀察到類似情況[23,25]。GH與IGF-I具有代謝調(diào)節(jié)和生長促進(jìn)功能，GH可以刺激肝臟中IGF-I分泌，而IGF-I水平又轉(zhuǎn)而調(diào)節(jié)GH的合成與釋放[26]。本試驗(yàn)采集了第4，6和8周停飼后紅姑魚血清，測定了單一時間點(diǎn)GH和IGF-I的變化，但這可能不能全面反映抗菌肽對血清激素分泌的影響。因此，試驗(yàn)結(jié)束后采集了72 h內(nèi)多個時間點(diǎn)的血清樣本，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，血清GH水平與紅姑魚生長性能和飼料利用率等無顯著相關(guān)性。強(qiáng)俊等[27]在研究溫度與飼料蛋白對羅非魚血清GH的影響時也發(fā)現(xiàn)同一現(xiàn)象，而王桂芹等[28]發(fā)現(xiàn)翹嘴鲌(E.ilishaeformis)血清GH水平與生長性能呈負(fù)相關(guān)。由此推測，GH對翹嘴鲌生長調(diào)節(jié)作用尚不能確證。鄧?yán)萚29]也認(rèn)為，血清GH并非直接調(diào)控生長，其促生長作用還取決于循環(huán)GH的清除率、GH靶組織上GH受體數(shù)量和親和力的變化以及與IGF-I的相互作用等。

GH可以調(diào)控IGF-I的含量，而IGF-I則通過調(diào)控轉(zhuǎn)錄模板DNA含量、轉(zhuǎn)錄效率和翻譯水平等影響蛋白質(zhì)合成，從而實(shí)現(xiàn)對魚體蛋白質(zhì)的調(diào)控[30]。血清IGF-I水平通常與生長呈正相關(guān)。本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，抗菌肽對紅姑魚血清IGF-I水平具有顯著影響，血清IGF-I水平隨抗菌肽添加量的增加而提高。

甲狀腺激素是魚類生長、發(fā)育和繁殖的重要調(diào)控因子，其分泌受到內(nèi)分泌和營養(yǎng)、環(huán)境等因素的影響和調(diào)控。甲狀腺激素是以T3、T4形式釋放入血。甲狀腺主要分泌T4進(jìn)入血清到肝臟，通過肝臟5′D單脫碘酶脫碘轉(zhuǎn)化為T3。甲狀腺激素中T3較容易進(jìn)入細(xì)胞，并與核受體結(jié)合，且在體內(nèi)的更新較T4快。故T3更能代表甲狀腺的功能，是體內(nèi)發(fā)揮效能的主要甲狀腺激素。本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn),添加0.3 g/kg抗菌肽對紅姑魚血清T3、T4含量有顯著提高，這可能是其影響紅姑魚生長的機(jī)制之一。

Brown等[31]發(fā)現(xiàn)，隨著T3水平的提高，細(xì)胞內(nèi)mRNA和RNA聚合酶含量、蛋白質(zhì)的合成代謝提高，分解代謝降低，氨基酸的吸收增加，從而促進(jìn)魚體生長。T3可提高羅非魚肝臟IGF-I mRNA的表達(dá)，進(jìn)而促進(jìn)其生長[32]。本研究發(fā)現(xiàn)，抗菌肽對紅姑魚肝臟和肌肉中IGF-I mRNA的表達(dá)豐度有顯著提高。但目前關(guān)于抗菌肽對生長激素和甲狀腺激素分泌及其基因表達(dá)影響的研究尚未見報(bào)道，而激素類物質(zhì)的分泌與調(diào)控對生長的影響非常復(fù)雜，可能還有其他因素參與，需要進(jìn)一步研究確認(rèn)。本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，抗菌肽的添加使紅姑魚肝臟和肌肉中IGF-I mRNA表達(dá)豐度在停飼后快速提高。這提示在水產(chǎn)動物中IGF-I的表達(dá)、分泌機(jī)制可能獨(dú)立于GH的調(diào)控，在以往的研究中較少進(jìn)行連續(xù)取樣測定，可能錯過這樣的結(jié)果判斷[33-34]。

4 結(jié) 論

(1)飼料中添加抗菌肽(0.3～0.5 g/kg)可促進(jìn)紅姑魚的生長，提高飼料效率和魚體含肉率，以0.3 g/kg為宜。

(2)抗菌肽與內(nèi)源生長激素(GH)的分泌無正相關(guān)性。

(3)抗菌肽可迅速提高紅姑魚組織中IGF-I mRNA的表達(dá)豐度，促進(jìn)IGF-I的快速分泌，從而促進(jìn)對蛋白質(zhì)的合成代謝能力，進(jìn)而提高動物的生長性能。

[1] 陸彤霞.美國紅魚的生物學(xué)特性、人工育苗及病害防治技術(shù) [J].海洋漁業(yè)，2003,25(1):34-36.

Lu T X.Biological characteristics,artificial breeding and diseases control ofSciaenopsocellatus[J].Marine Fisheries，2003,25(1):34-36.

[2] 周立斌,王安利,馬細(xì)蘭,等.飼料中鐵對美國紅魚(Sciaenopsocellatus)生長和免疫的影響 [J].海洋與湖沼，2009,40(5):663-668.

Zhou L B,Wang A L,Ma X L,et al.Effects of dietary iron on growth and immune response of red drumSciaenopsocellatus[J].Oceanologia et Limnologia Sinica，2009,40(5):663-668.

[3] 周飄蘋,金 敏,吳文俊,等.不同養(yǎng)殖模式、投喂不同餌料及不同品系大黃魚營養(yǎng)成分比較 [J].動物營養(yǎng)學(xué)報(bào)，2014,26(4):969-980.

Zhou P P,Jin M,Wu W J,et al.Comparison of nutrient components of large yellow croaker (Pseudosciaenacrocearichardson) cultured in different modes,fed different feeds and from different strains [J].Chinese Journal of Animal Nutrition，2014,26(4):969-980.

[4] 陳國偉,許曹魯,葉海濱,等.溫度和pH對美國紅魚蛋白酶和淀粉酶活力的影響 [J].現(xiàn)代漁業(yè)信息，2011(2):13-16.

Chen G W,Xu C L,Ye H B,et al.Effects of temperature and pH value on activities of protease and amylase inSciaenopsocellatus[J].Modern Fisheries Information，2011(2):13-16.

[5] 馬愛敏,閆茂倉,常維山,等.5種中草藥對美國紅魚生長和免疫機(jī)能的影響 [J].海洋科學(xué)，2009(12):96-102.

Ma A M,Yan M C,Chang W S,et al.Effects of Chinese herbs on the growth and immune function inSciaenopsocellatus[J].Marine Science,2009(12):96-102.

[6] 庹曉曄,柴家科.抗菌肽的基因工程研究進(jìn)展 [J].生物技術(shù)通訊，2007,18(2):298-300.

Tuo X Y,Chai J K.Research progress in gene engineering of antimicrobial peptides [J].Letters in Biotechnology,2007,18(2):298-300.

[7] 柴仙琦,冷向軍.抗菌肽在凡納濱對蝦飼料中的應(yīng)用研究 [J].養(yǎng)殖與飼料，2012(9):99-100.

Chai X Q,Leng X J.Research and application of antibacterial peptide inLitopenaeusvannamei[J].Culture and Feed，2012(9):99-100.

[8] 宋理平,胡 斌,王愛英,等.抗菌肽對凡納濱對蝦生長和機(jī)體免疫的影響 [J].廣東海洋大學(xué)學(xué)報(bào)，2010,30(3):28-32.

Song L P,Hu B,Wang A Y,et al.Effects of antibacterial peptide on growth and immunity ofPenaeusvannamei[J].Journal of Guangdong Ocean University，2010,30(3):28-32.

[9] 柴仙琦,冷向軍,李小勤,等.抗菌肽對凡納濱對蝦生長和血清非特異性免疫指標(biāo)的影響 [J].淡水漁業(yè)，2012,42(4):59-62.

Chai X Q,Leng X J,Li X Q,et al.Effect of antibacterial peptide on growth and serum non-specific immunity ofLitopenaeusvannamei[J].Freshwater Fisheries，2012,42(4):59-62.

[10] 林 鑫,毛述宏,楊 陽,等.飼料中添加抗菌肽對錦鯉生長、非特異性免疫力和抗病力的影響 [J].動物營養(yǎng)學(xué)報(bào)，2013,25(8):1860-1865.

Lin X,Mao S H,Yang Y,et al.Effects of antimicrobial peptides supplementation on growth,non-specific immunity and disease resistance of koi(Cyprinuscarpiokoi) [J].Chinese Journal of Animal Nutrition，2013,25(8):1860-1865.

[11] 夏 耘,余德光,郁二蒙,等.飼料中添加抗菌肽和枯草芽孢桿菌對花鱸生長和非特異性免疫功能的影響 [J].淡水漁業(yè)，2012,42(1):52-57.

Xia Y,Yu D G,Yu E M,et al.Effects of dietary antimicrobial peptide andBacillussubtilison growth performance and non-specific immunity ofLateolabraxjaponicus[J].Freshwater Fisheries，2012,42(1):52-57.

[12] 王自蕊,譙仕彥,李 波,等.飼料中添加天蠶素抗菌肽對湘云鯽生長性能、非特異性免疫功能及抗病力的影響 [J].動物營養(yǎng)學(xué)報(bào),2014,26(7):1856-1863.

Wang Z R,Qiao S Y,Li B,et al.Effects on growth performance,no-specific immunity and disease resistance ofTriploidcruciancarp [J].Chinese Journal of Animal Nutrition，2014,26(7):1856-1863.

[13] Basiron Y，Industrial E B.Official methods of analysis of the association of official analytical chemists [M].Washington:AOAC,1995.

[14] Loter T C,MacKenzie D S,McLeese J,et al.Seasonal changes in channel catfish thyroid hormones reflect increased magnitude of daily thyroid hormone cycles [J].Aquaculture，2007,262(2):451-460.

[15] Cohn W B,Jones R A,Valverde R A,et al. Molecular cloning and regulation of mRNA expression of the thyrotropin β and glycoprotein hormone α subunits in red drum,Sciaenopsocellatus[J].Fish Physiology and Biochemistry，2010,36(4):1277-1290.

[16] Drennon K,Moriyama S,Kawauchi H,et al.Development of an enzyme-linked immunosorbent assay for the measurement of plasma growth hormone (GH) levels in channel catfish (Ictaluruspunctatus):assessment of environmental salinity and GH secretogogues on plasma GH levels [J].General and Comparative Endocrinology，2003,133(3):314-322.

[17] Small B C,Peterson B C.Establishment of a time-resolved fluoroimmunoassay for measuring plasma insulin-like growth factor I (IGF-I) in fish:effect of fasting on plasma concentrations and tissue mRNA expression of IGF-I and growth hormone (GH) in channel catfish (Ictaluruspunctatus) [J].Domestic Animal Endocrinology，2005,28(2):202-215.

[18] Peterson B,Bilodeau-Bourgeois A,Small B.Response of the so-matotropic axis to alterations in feed intake of channel catfish (Ictaluruspunctatus) [J].Comparative Biochemistry and Physiology Part A:Molecular & Integrative Physiology，2009,153(4):457-463.

[19] Moon H Y,Gatlin D M.Total sulfur amino acid requirement of juvenile red drum,Sciaenopsocellatus[J].Aquaculture，1991,95(1):97-106.

[20] Gazit E,Miller I R,Biggin P C,et al.Structure and orientation of the mammalian antibacterial peptide cecropin P1 within phospholipid membranes [J].Journal of Molecular Biology，1996,258(5):860-870.

[21] Ganz T,Lehrer R I.Antibiotic peptides from higher eukaryo-tes:biology and applications [J].Molecular Medicine Today， 1999,5(7):292-297.

[22] 姜 珊,王寶杰,劉 梅,等.飼料中添加體質(zhì)量組抗菌肽對吉富羅非魚生長性能及免疫力的影響 [J].中國水產(chǎn)科學(xué)，2011,18(6):1308-1314.

Jiang S,Wang B J,Liu M,et al.Effects of recombinant antimicrobial peptides on growth and immunity in tilapia(GIFT) [J].Journal of Fishery Sciences of China，2011,18(6):1308-1314.

[23] Zhang W M,Lin H R,Peter R.Episodic growth hormone secretion in the grass carp,Ctenopharyngodonidellus(C.&V.) [J].General and Comparative Endocrinology，1994,95(3):337-341.

[24] 聶國興,王俊麗,周洪琪.飼料中添加木聚糖酶對尼羅羅非魚生長及血清激素水平的影響 [J].中國水產(chǎn)科學(xué)，2007,14(2):249-256.

Nie G X,Wang J L,Zhou H Q.Effects of xylanase on growth and levels of serum hormones ofTilapianilotica[J].Journal of Fishery Sciences of China，2007,14(2):249-256.

[25] Benedet S,Andersson E,Mittelholzer C,et al.Pituitary and pl-asma growth hormone dynamics during sexual maturation of femaleAtlanticsalmon[J].General and Comparative Endocrinology,2010,167(1):77-85.

[26] Planas J V,Méndez E,Banos N,et al.Insulin and IGF-I receptors in trout adipose tissue are physiologically regulated by circulating hormone levels [J].Journal of Experimental Biology，2000,203(7):1153-1159.

[27] 強(qiáng) 俊,楊 弘,王 輝,等.溫度與飼料蛋白質(zhì)水平對吉富品系尼羅羅非魚 (Oreochromisnilotica) 幼魚生長和血清生長激素水平的影響 [J].動物營養(yǎng)學(xué)報(bào)，2012,24(8):1589-1601.

Qiang J,Yang H,Wang H,et al.Temperature and dietary protein level affect growth and serum growth hormone level in GIFT NILE tilapia juvenile(Oreochromisnilotica) [J].Chinese Journal of Animal Nutrition，2012,24(8):1589-1601.

[28] 王桂芹,周洪琪,陳建明,等.飼料蛋白對翹嘴鲌生長和內(nèi)分泌激素的影響 [J].水生生物學(xué)報(bào)，2008,32(4):544-550.

Wang G Q,Zhou H Q,Chen J M,et al.Effect of dietary protein on growth and hormone of culter alburnus juveniles [J].Acta Hydrobiologica Sinica，2008,32(4):544-550.

[29] 鄧 利,鄭漢其.黑鯛生長激素及其受體的季節(jié)變化 [J].水產(chǎn)學(xué)報(bào)，2001,25(3):203-208.

Deng L,Zheng H Q.Seasonal variations of serumgrowth hormone receptors growth hormone levels andin sparus macrocephalus [J].Journal of Fisheriks of China，2001,25(3):203-208.

[30] 馮仁勇,周小秋,林 燕.類胰島素樣生長因子I對魚類氮代謝的影響 [J].動物營養(yǎng)學(xué)報(bào)，2006,18(S1):372-377.

Feng R Y,Zhou X Q,Lin Y.Effects of insulin-like growth factor I on nitrogen metabolism of fish [J].Chinese Journal of Animal Nutrition，2006,18(S1):372-377.

[31] Brown J G,Bates P C,Holliday M A,et al.Thyroid hormones and muscle protein turnover:the effect of thyroid-hormone deficiency and replacement in thryoidectomized and hypophysectomized rats [J].Biochem J，1981,194:771-782.

[32] Schmid A C,Lutz I,Kloas W,et al.Thyroid hormone stimulates hepatic IGF-I mRNA expression in a bony fish,the tilapiaOreochromismossambicus,invitroandinvivo[J].General and Comparative Endocrinology，2003,130(2):129-134.

[33] Gómez-Requeni P,Mingarro M,Calduch-Giner J,et al.Protein growth performance,amino acid utilisation and somatotropic axis responsiveness to fish meal replacement by plant protein sources in gilthead sea bream (Sparusaurata) [J].Aquaculture，2004,232(1):493-510.

[34] Pierce A L,Beckman B R,Shearer K D,et al.Effects of ration on somatotropic hormones and growth in coho salmon [J].Comparative Biochemistry and Physiology Part B:Biochemistry and Molecular Biology，2001,128(2):255-264.

Effects of antimicrobial peptide on growth and serum hormone levels of red drum juvenile

ZHENG Zonglin1,2，ZHAO Yongzhi3，SERGIO Castillo2

(1FisheriesBreedingandHealthyCultivationResearchCentre,SouthwestUniversity,Chongqing402460,China; 2DepartmentofWildlifeandFisheriesSciences,TexasA&MUniversity,CollegeStation,Texas，77843-2258USA；3SuzhouHitechBio-techCo.Ltd.,Suzhou,Jiangsu215100,China)

【Objective】 This study investigated the effects of AMPs supplement to diet on growth performance and serum hormones of juvenile red drum,Sciaenopsocellatus.【Method】 Tested diets were mixed with different levels of antimicrobial peptide (AMPs,0,0.1,0.3 and 0.5 g/kg) as treatments of A0,A100,A300 and A500.S.ocellatuswith initial body weight of (1.57±0.17) g were fed for 8 weeks,and the growth,serum hormones (GH,T3,T4,and IGF-I) and serum hormone levels and IGF-I mRNA expression in muscle and liver at different days after stopping feeding were determined. 【Result】 A300 and A500 diets promoted the relative weight gain (RWG),feed efficiency ratio (FCR) and protein efficiency ratio (PER) significantly (P<0.05),and protein retention (PR) and survival rate of A100,A300 and A500 diets were significantly higher than A0 diet (P<0.05).Muscle retention (MR) and whole-body crude protein (CP) of A300 and A500 diets were increased significantly compared to A0 diet (P<0.05).AMPs had no significant effect on serum GH level (P>0.05).AMPs enhanced serum T3and T4and IGF-I concentration of A300 and A500 diets significantly compared to A0 (P<0.05).After postprandial,serum was sampled in 72 h continuously,IGF-I of 2 h samples reached the peak in A300 diet,and IGF-I of the samples in the 2 h and 4 h period were significantly higher than A0 diet (P<0.05).Expressions of IGF-I mRNA in liver and muscle of A300 reached the peak in 4 h,and significantly (P<0.05) higher than A0 diet.【Conclusion】 The inclusion of 0.3 g/kg AMPs in diet could enhance the growth performance,feed efficiency and muscle ratio.AMPs had no positive correlation with serum GH concentration but it increased serum IGF-I concentration and expression of IGF-I mRNA in muscle and liver.

red drum (Sciaenopsocellatus);antimicrobial peptide;growth performance;plasma hormone;IGF-I mRNA

時間:2016-10-09 10:08

10.13207/j.cnki.jnwafu.2016.11.004

網(wǎng)絡(luò)出版地址:http://www.cnki.net/kcms/detail/61.1390.S.20161009.1008.008.html

2015-06-18

中央高?；究蒲袠I(yè)務(wù)費(fèi)項(xiàng)目(XDJK2014C056)；西南大學(xué)博士基金項(xiàng)目(SWU114025)

鄭宗林(1978-)，男，重慶榮昌人，副教授，博士，碩士生導(dǎo)師，主要從事水產(chǎn)動物疾病控制與營養(yǎng)研究。 E-mail：zhengzonglin@126.com

S965.337.3

A

1671-9387(2016)11-0023-08