剖腹凈化建立清潔級獺兔核心群關鍵技術探討

翁順太 姚 堯 鄭忠東 鄭立鋒 吳潤生 陳先進 詹先強*

（1.福建省人獸共患病研究重點實驗室福建省疾病預防控制中心，福州350001；2.福州大北農(nóng)生物技術有限公司，福州350014）

剖腹凈化建立清潔級獺兔核心群關鍵技術探討

翁順太1姚 堯2鄭忠東1鄭立鋒1吳潤生2陳先進2詹先強2*

（1.福建省人獸共患病研究重點實驗室福建省疾病預防控制中心，福州350001；2.福州大北農(nóng)生物技術有限公司，福州350014）

為研究獺兔在生物醫(yī)藥領域中的作用，對非等級獺兔進行實驗動物化研究，成功建立了清潔級獺兔核心種群。采用剖腹凈化技術取得清潔級仔兔，以SPF級日本大耳白母兔作為代乳母兔哺育至離乳。對10只經(jīng)產(chǎn)非等級母獺兔進行剖腹取得48只仔獺兔；離乳時成活36只，成活率為75%（其中2只由于預產(chǎn)期判斷失誤，剖腹取出的13只仔兔無法自主哺乳全部死亡，故不予統(tǒng)計）。經(jīng)過質(zhì)量檢測，符合清潔級實驗兔國家標準。本方法用于建立清潔級獺兔核心群是可行的，但關系培育成功與否的幾個關鍵問題應值得注意。

剖腹凈化清潔級獺兔核心群建立關鍵技術

動物種質(zhì)資源綜合開發(fā)和實驗動物化一直是實驗動物學科發(fā)展的重點內(nèi)容之一。多年來，實驗動物科技工作者相繼開展了許多種類的野生動物或經(jīng)濟動物的實驗動物化研究工作，為肝炎、心血管病、血吸蟲病、異種器官移植等研究提供了廣泛而又豐富的實驗材料。

為探索獺兔在生物醫(yī)藥領域中的特殊用途，本實驗室成功地將其進行實驗動物化，積累了一些寶貴經(jīng)驗?，F(xiàn)將建立清潔級獺兔核心群過程中積累的幾個關鍵技術問題予以探討。

1 代乳母兔與獺兔的選擇及準備

1）代乳母兔的選擇關系到動物母性的好壞（即能否主動、安靜地予以哺乳）、泌乳能力和哺育仔兔數(shù)量。應選擇繁殖能力強、乳頭4對以上、外陰端正、第二或第三胎的經(jīng)產(chǎn)種母兔；母性好，無食仔、咬仔等惡癖；注意堅決不能采用第一胎的母兔。由于溝通不準確，本實驗室引進的是第一胎孕兔且有的只有3對乳頭，結果有2只在代乳過程中出現(xiàn)泌乳不足、帶仔能力差的現(xiàn)象，剖腹取出的48只仔兔中被咬死、踩死，因營養(yǎng)不足而死亡的累計達12只之多，離乳成活率僅為75%，這與代乳母兔的性能關系密切。

2）母獺兔的選擇關系到產(chǎn)仔數(shù)、仔兔個體發(fā)育強壯與否。最好應選擇經(jīng)產(chǎn)、繁殖能力強、乳頭4對以上且無流產(chǎn)、無產(chǎn)死胎經(jīng)歷的母獺兔。與之交配的公獺兔應健康、體質(zhì)健壯、各部位發(fā)育勻稱、肌肉豐滿、臀部發(fā)達、腰部肥壯、體重3.8 kg（7.5月齡）以上、性欲旺盛、生殖器官發(fā)育良好、睪丸大而對稱。還應注意母兔之間、公兔之間彼此均無血緣關系，利于育成后擴大繁殖時能最大限度避免近親交配。本試驗有統(tǒng)計意義的8只母獺兔中，產(chǎn)仔數(shù)在5只（含5只）以下的就有3只，可見獺兔的選擇不可輕視。

2 獺兔臨產(chǎn)期的判斷

臨產(chǎn)期判斷正確與否是關系仔兔成活率與個體強壯的關鍵因素。剖腹產(chǎn)手術應在自然分娩前數(shù)小時完成，這是提高仔獺兔成活率非常重要的時間點。太早剖腹，仔兔先天不足、體質(zhì)弱，成活率低；過遲剖腹，仔兔則進入產(chǎn)道自然分娩，受污染幾率增加。因此，做好臨產(chǎn)期的判斷尤為關鍵。應綜合觸診（摸胎）、推算、觀察等方法進行判斷。摸胎以腹部膨脹、外陰開口潮紅、觸及胎仔頭部與軀干大小一致為臨產(chǎn)依據(jù)。推算以交配時間30 d為宜，準確記錄交配時間很重要。配種的最佳時間是在發(fā)情盛期，過早或過晚配種，受孕效果均不理想。為提高母兔受孕率，最好能采用兩次配種法，即在第一次交配后8～12 h，用同一公兔進行第二次配種。本試驗所利用的10只非等級孕獺兔不是自己選配的，預產(chǎn)時間被誤導，導致其中2只預產(chǎn)期判斷失誤，剖腹取出的13只仔兔平均體重才35 g，不能自主吃乳，2 d后全部死亡。觀察則以母兔活動減少、突然食欲下降、呈現(xiàn)不安、拉毛做窩等行為為臨產(chǎn)前兆[1]。

3 剖腹產(chǎn)技術應熟練

1）從切除子宮到胎兒自主呼吸應在2 min內(nèi)完成，越快越好。要求操作者具備嫻熟的操作技能，這就需要術前應多練手，掌握基本要領，實戰(zhàn)時方能從容應對。

2）先用鹽酸氯胺酮肌肉注射進行麻醉，劑量為30 mg/kg，身體變軟即取仰臥位保定于解剖臺上。在

進行預試驗時，曾參考教科書介紹的22～44 mg/kg劑量范圍，嘗試采用25 mg/kg作為麻醉劑量，結果在手術時動物出現(xiàn)掙扎、慘叫，這可能與麻醉當天沒有禁食有關。在正式試驗前，根據(jù)預產(chǎn)期判斷及摸胎等，對預產(chǎn)母兔提前12 h禁食，麻醉劑量提高至30 mg/kg，3 min即達到麻醉效果。

3）取出胎兒后，由助手迅速用紗布輕柔地擦去口鼻黏液，促其自主呼吸，擦干并按摩全身直到紅潤，最后剪斷臍帶，放入32℃保溫箱中。

4 如何不被識別非親生

如何不讓代哺乳母兔識別出仔獺兔非親生是仔獺兔成活的關鍵。一旦識別出來非親生，會出現(xiàn)拒絕哺乳或咬仔現(xiàn)象。因此，在剖腹時，給仔獺兔處理完畢，還應在仔獺兔身上（包括仔兔的趾甲內(nèi)）均勻地涂抹上代哺乳母兔的尿液，可以有效干擾哺乳母兔的嗅覺而不能識別出非親生。本試驗在剛開始階段，由于經(jīng)驗不足，處理得不夠細導致仔兔被咬死、踩死、餓死的現(xiàn)象較多。識別不出是非親生，才能保證仔獺兔早吃、吃足初乳。初乳中含有豐富的母源抗體，是提高仔兔抗病力和成活率的關鍵營養(yǎng)因素。

5 控制好環(huán)境條件

控制好內(nèi)環(huán)境指標特別是做好保溫工作、減少噪聲污染、保持良好的通風換氣、維持空氣干燥，對保證仔兔的成活率至關重要。

1）由于初生仔兔體溫調(diào)節(jié)系統(tǒng)尚未發(fā)育，體溫調(diào)節(jié)能力不穩(wěn)定，至10日齡才具有體溫調(diào)節(jié)能力，故在15日齡前應特別注意對仔兔的保溫，確保窩內(nèi)溫度不低于32℃[2]。即使在剖腹階段，也應注意胎兒保暖以防受涼，可用柔軟溫暖舒適的厚紗布鋪墊。15日齡后每天降低1℃直至25℃。屏障環(huán)境對兔類實驗動物的溫度要求是18～22℃，一般實際運轉過程中設定值和控制值也在該范圍。因此，應使用保溫燈或白熾燈等保溫工具，才能滿足仔兔對環(huán)境溫度的要求。

2）動物特別是幼齡動物對噪聲非常敏感，動物本身音域較寬，長時間的噪聲污染會產(chǎn)生聽源性痙攣而引起變態(tài)反應。因此，應注意機械設備所產(chǎn)生的噪聲尤其是轟鳴聲對動物的影響。

3）為了保持屏障系統(tǒng)較高的潔凈度水平及微生物等級，往往每天都要利用消毒劑對實驗室進行消毒滅菌。如果持續(xù)使用較高濃度消毒劑，會刺激幼齡動物的呼吸道黏膜，重者死亡。因此，保持良好的通風換氣非常重要，房間換氣次數(shù)最好控制在20次/h以上。

4）空氣中相對濕度對動物機體熱調(diào)節(jié)關系密切。高濕度條件下，微生物、寄生蟲易于繁殖，引發(fā)某些傳染性疾病。特別是幼齡家兔對高濕度具有較強敏感性，極易引發(fā)仔兔疥癬、球蟲病等疾病。因此，維持穩(wěn)定的相對濕度水平（60%以下）是必要的。

6 自然哺乳與人工哺乳的比較選擇

哺乳順利與否直接影響仔兔的營養(yǎng)水平，影響仔兔的成活率以及個體的強壯。采用何種方式哺乳，仁者見仁、智者見智。如果條件允許（除非某物種是第一次進行實驗動物化研究），筆者傾向于采用自然哺乳方式。只要能接受仔兔，母兔的天性能讓仔兔得到充分的營養(yǎng)。反觀人工哺乳，很多因素都會影響哺乳效果，例如，人工乳的配方是否達到營養(yǎng)需求、流速控制是否適合仔兔的正常吞咽速度（特別是流速過快，乳汁會嗆入呼吸道引起死亡）、人工乳溫度控制（溫度過高造成口腔或咽喉黏膜灼傷影響哺乳而消瘦死亡；特別應注意哺乳后期乳汁溫度下降，溫度過低容易引起腹瀉而死亡）、哺乳量的把控（量太少，滿足不了營養(yǎng)需求；量過大則增加胃腸壓力，引發(fā)胃腸功能紊亂）等，同時人工管理難度較大。

7 注意營養(yǎng)補充

仔兔達20日齡后，應適當補充全價飼料，減輕對母乳的依賴，同時也是斷乳后對飼料的適應過程。由于仔兔消化能力有限，可將飼料在乳粉溶液中浸泡予以輕微軟化再投喂；25日齡至35日齡，可適當補充乳粉或經(jīng)高壓過的黃豆。35日齡離乳時仔兔增重效果明顯，平均體重達650 g/只。

應充分保證代乳母兔的營養(yǎng)水平，提高泌乳量。適當提高日糧中的粗蛋白含量，最好使用繁殖飼料。如果使用基礎生長飼料，日糧中可添加經(jīng)高壓過的黃豆，每天添加量為50粒/只。本試驗剛開始時有2只代乳母兔泌乳能力差，經(jīng)添加黃豆2 d后，泌乳能力慢慢增加，仔兔發(fā)育恢復正常。

8 減少對仔兔的侵擾

減少對仔兔的侵擾是保證仔兔健康成長的重要因素之一。因哺乳、換窩、稱重等需要反復接觸或抓取仔兔是不可避免的，但應盡量減少次數(shù)，尤其是哺乳方面。為減少因哺乳原因?qū)ψ型迷斐傻那謹_，建議籠器具生產(chǎn)廠家研發(fā)出新型產(chǎn)品，使繁殖籠與產(chǎn)箱對接相連，既充分發(fā)揮母兔的母性又能保證仔兔早吃、吃足初乳，保證營養(yǎng)、促進生長，也能解放人工。

[1]方喜業(yè).醫(yī)學實驗動物學[M].北京：人民衛(wèi)生出版社,1995：230.

[2]婁成民.實驗動物質(zhì)量管理標準與檢驗檢測技術實用手冊[M].貴陽：貴陽科技出版社,2003：26.

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1003-4331（2016）06-0044-02

福建省引導性項目(No.2015Y0048)資助。

翁順太，主任技師，E-mail：wengshuntai@163.com。

*通信作者：詹先強，獸醫(yī)師，E-mail：zxq9952049@163.com。