尸體與活體供腎移植術(shù)前微量淋巴細(xì)胞毒交叉配型結(jié)果及與腎移植效果的關(guān)系

鐘 濤,廖貴益,許 偉,程 越,胡海亮,張循善,卞茂紅

?

尸體與活體供腎移植術(shù)前微量淋巴細(xì)胞毒交叉配型結(jié)果及與腎移植效果的關(guān)系

鐘 濤1,廖貴益2,許 偉1,程 越1,胡海亮1,張循善1,卞茂紅1

回顧性分析同期完成的尸體與活體供腎移植術(shù)前微量淋巴細(xì)胞毒(CDC)交叉配型實(shí)驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果與術(shù)后臨床效果的內(nèi)在關(guān)系。尸體供腎移植組術(shù)前CDC檢測(cè)結(jié)果相對(duì)于活體供腎移植組顯著增高(P<0.05)，術(shù)后受者死亡/腎丟失、排斥反應(yīng)/延遲恢復(fù)發(fā)生率，尸體供腎移植組顯著高于活體供腎移植組(P<0.05)。移植后在出現(xiàn)受者死亡/腎丟失、排斥反應(yīng)/延遲恢復(fù)以及肺部感染這些不良事件時(shí)，尸體供腎移植組CDC檢測(cè)結(jié)果在9%以上或者活體供腎移植組在4%以上的占比均顯著高于未發(fā)生臨床不良事件，兩種不同來(lái)源的腎臟移植都應(yīng)盡可能的選擇術(shù)前CDC檢測(cè)結(jié)果偏低的受者進(jìn)行移植。

活體供腎;尸體供腎;不良事件;交叉配型;腎移植

在臨床器官移植領(lǐng)域尤其是在腎移植手術(shù)前，補(bǔ)體依賴的微量淋巴細(xì)胞毒 (complement dependent cytotoxicity，CDC) 交叉配型實(shí)驗(yàn)一直都是作為移植前預(yù)防排斥反應(yīng)發(fā)生的重要和必需的實(shí)驗(yàn)[1-2]。隨著新型免疫抑制劑的應(yīng)用以及器官移植技術(shù)的不斷完善，同種異體腎移植已成為治療終末期腎臟疾病患者的最佳替代治療方法[3-4]。目前臨床醫(yī)師均普遍重視在術(shù)前針對(duì)受者體內(nèi)預(yù)先存在的抗供者人類白細(xì)胞抗原(human leukocyte antigen，HLA)的HLA抗體做檢測(cè)以減少術(shù)后排斥反應(yīng)及并發(fā)癥的發(fā)生[5-6]，而移植前供受者間交叉配型實(shí)驗(yàn)可檢測(cè)受者血清中特異性針對(duì)供者HLA抗原的同種抗體[7]。筆者收集了137例初次腎移植患者的臨床資料，對(duì)兩種供體來(lái)源的移植術(shù)前以及術(shù)后與臨床療效相關(guān)的CDC實(shí)驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行對(duì)照研究，進(jìn)一步探討受者在腎移植前做CDC實(shí)驗(yàn)檢測(cè)的臨床意義，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 研究對(duì)象 收集安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院泌尿外科2008年1月～2016年2月首次行腎臟移植患者的臨床資料。尸體供腎移植受者共53例，均明確診斷為慢性腎功能不全尿毒癥期，其中男37例，女16例，18～58(39.23±10.40)歲，ABO血型相同48例，相容5例，術(shù)前群體反應(yīng)性抗體(panel reactive antibodies，PRA)檢測(cè)均為陰性；活體供腎移植受者共84例，同樣都明確診斷為慢性腎功能不全尿毒癥期，其中男60例，女24例，16～56(32.75±8.88)歲，ABO血型相同61例，相容23例，術(shù)前PRA檢測(cè)同樣均為陰性?；铙w供腎移植供者84例均為親屬，其中血緣親屬供腎79例(父母供給子女64例，子女供給父母1例，姑姑嬸嬸供給侄子2例，兄弟姐妹供腎12例)，非血緣親屬供腎5例(丈夫供給妻子1例，妻子供給丈夫4例)，均系自愿捐腎并嚴(yán)格遵守《人體器官移植條例》相關(guān)要求。

1.2 CDC交叉配型實(shí)驗(yàn)結(jié)果的測(cè)定 采用Ficoll-Hypaque密度梯度離心法，從活體供腎者外周血或尸體供腎者脾臟分離出淋巴細(xì)胞，用PBS調(diào)節(jié)細(xì)胞濃度至(2～2.5)×106/ml(每孔約2 000個(gè)細(xì)胞)備用。在Terasaki-blank板上將每排第1孔設(shè)為細(xì)胞對(duì)照，第2孔設(shè)為補(bǔ)體對(duì)照，第3孔為血清對(duì)照，第4孔為陽(yáng)性對(duì)照，第5孔為樣本孔，每孔加無(wú)菌礦物油10 μl和供者淋巴細(xì)胞1 μl，另外還需加入1 μl PBS至第1孔(細(xì)胞對(duì)照)，加3 μl兔補(bǔ)體至第2孔(補(bǔ)體對(duì)照)，加1 μl受者血清至第3孔(血清對(duì)照)，加1 μl陽(yáng)性血清和3 μl兔補(bǔ)體至第4孔(陽(yáng)性對(duì)照)，加1 μl受者血清和3 μl兔補(bǔ)體至第5孔(樣本孔)中，輕輕震蕩搖勻，恒溫(37 ℃)孵育60 min后每孔加入熒光終止劑5 μl，室溫放置15 min后于倒置相差熒光顯微鏡下計(jì)數(shù)200個(gè)淋巴細(xì)胞中死亡的淋巴細(xì)胞數(shù)，結(jié)果以百分?jǐn)?shù)(%)表示。

2 結(jié)果

2.1 受體基本臨床資料及術(shù)前CDC實(shí)驗(yàn)結(jié)果比較 尸體供腎移植組患者年齡以及術(shù)前CDC實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯著高于活體供腎移植組(P<0.05)，見(jiàn)表1。兩種供體來(lái)源的移植術(shù)前CDC實(shí)驗(yàn)顯微鏡下可見(jiàn)：死淋巴細(xì)胞體積稍大，在熒光染色劑的作用下呈紅色，活淋巴細(xì)胞體積偏小，在熒光染色劑的作用下呈綠色，見(jiàn)圖1。

圖1 免疫熒光染色法觀察CDC實(shí)驗(yàn)結(jié)果 ×200

A：活體供腎移植；B：尸體供腎移植；1：細(xì)胞對(duì)照；2：補(bǔ)體對(duì)照；3：血清對(duì)照；4：陽(yáng)性對(duì)照；5：樣本

表1 尸體與活體供腎移植一般臨床資料及術(shù)前CDC實(shí)驗(yàn)結(jié)果比較

2.2 兩種供體來(lái)源的移植術(shù)后一般臨床效果的比較 尸體供腎移植組與活體供腎移植組在術(shù)后未發(fā)生臨床不良事件率上無(wú)顯著性差異；尸體供腎移植組在術(shù)后1年內(nèi)受者死亡/腎丟失率、排斥反應(yīng)/延遲恢復(fù)發(fā)生率上顯著高于活體供腎移植組(P<0.05)，而在肺部感染發(fā)生率上，尸體供腎移植組要低于活體供腎移植組，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見(jiàn)表2。

表2 兩種供體來(lái)源的移植術(shù)后一般臨床效果比較[n(%)]

2.3 與臨床效果相關(guān)的術(shù)前CDC實(shí)驗(yàn)結(jié)果比較 移植后活體供腎移植組在發(fā)生受者死亡/腎丟失時(shí)其術(shù)前CDC檢查結(jié)果顯著高于未發(fā)生臨床不良事件的術(shù)前CDC檢測(cè)結(jié)果(P<0.05)，除此之外，兩組移植在發(fā)生臨床不良事件時(shí)其術(shù)前CDC檢查結(jié)果與未發(fā)生臨床不良事件的術(shù)前CDC檢測(cè)結(jié)果比較均無(wú)顯著性增加，見(jiàn)表3。但移植后在發(fā)生各種不良事件時(shí)尸體供腎移植組術(shù)前CDC實(shí)驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果在9%以上或者活體供腎移植組術(shù)前CDC實(shí)驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果在4%以上的占比與未發(fā)生臨床不良事件相比均顯著增高，見(jiàn)表4。

表3 與臨床效果相關(guān)的術(shù)前CDC檢測(cè)結(jié)果的比較±s，%)

活體供腎移植組中與未發(fā)生臨床不良事件比較：*P<0.05

表4 兩種供腎移植術(shù)前CDC檢測(cè)結(jié)果在各相關(guān)臨床效果中占比情況的比較[n(%)]

3 討論

近年來(lái)國(guó)內(nèi)外醫(yī)學(xué)工作者均將術(shù)前PRA檢測(cè)陰性者作為移植受者的首選[8-9]，因此本次調(diào)查研究旨在探討在PRA檢測(cè)為陰性的情況下，不同來(lái)源的腎臟移植,術(shù)前CDC交叉配型結(jié)果的差異及與術(shù)后不良事件內(nèi)在的關(guān)系，為臨床醫(yī)師在術(shù)前選擇更加合適的供體提供意見(jiàn)和幫助。結(jié)果顯示尸體供腎移植組CDC實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯著高于活體供腎移植組，這一方面可能因?yàn)楸狙芯恐谢铙w供腎移植組供受者間94%以上有3代以內(nèi)血緣關(guān)系，其體內(nèi)存在的相同或部分相同的遺傳染色體導(dǎo)致供受體間有更好的組織相容性；而另一方面與前文列出的排斥反應(yīng)/延遲恢復(fù)、1年內(nèi)受者死亡/腎丟失的發(fā)生率相結(jié)合充分說(shuō)明了CDC結(jié)果越高其術(shù)后發(fā)生急慢性排斥反應(yīng)的可能性也就越大。大量研究[4,10-11]表明腎移植術(shù)后的不良事件主要有患者死亡、移植物失功、移植物丟失、急慢性排斥反應(yīng)、腎功能延遲恢復(fù)以及并發(fā)的各種感染。而在術(shù)后感染中危害程度最大的、病死率最高的即為肺部感染[12]。因此，筆者本次研究將移植手術(shù)后的不良事件歸為3大類，通過(guò)對(duì)這些臨床資料的回顧性分析顯示雖然兩種來(lái)源的供腎移植在未發(fā)生臨床不良事件率上差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但在1年內(nèi)受者死亡/腎丟失、排斥反應(yīng)/延遲恢復(fù)的發(fā)生率上，尸體供腎移植組顯著高于活體供腎移植組，然而在肺部感染發(fā)生率上活體供腎移植組反而略高于尸體供腎移植組，這可能與安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院活體供腎移植短期內(nèi)死亡率低、圍手術(shù)期大量免疫抑制劑的應(yīng)用以及尸體供腎移植樣本數(shù)總體偏小有關(guān)。

CDC交叉配型實(shí)驗(yàn)是最早的也是最經(jīng)典的臨床器官移植領(lǐng)域?qū)嶒?yàn)技術(shù)，不同于PRA檢測(cè)，它是特異性的針對(duì)供者體內(nèi)抗體，實(shí)驗(yàn)簡(jiǎn)單易行。本研究顯示，不管是對(duì)于尸體供腎移植還是活體供腎移植，CDC交叉配型實(shí)驗(yàn)結(jié)合PRA檢測(cè)，對(duì)選擇合適的受者、預(yù)防排斥反應(yīng)及并發(fā)癥的發(fā)生以及改善移植物存活狀況等方面都有重要意義。

[1] Kute V B,Vanikar A V,Gumber M R,et al. Kidney transplantation with positive complement-dependent lymphocytotoxicity crossmatch with negative flow crossmatching and luminexx donor-specific antibodies[J]. Ren Fail，2013,35(7):1027-30.

[2] 肖露露，易 燕，葉 欣，等.補(bǔ)體依賴-流式細(xì)胞術(shù)-淋巴細(xì)胞毒交叉配型實(shí)驗(yàn)方法的研究[J]. 中華泌尿外科雜志，2006，4(27):79-82.

[3] Pan G H,Chen Z,Xu L, et al. Low-dose tacrolimus combined with donor-derived mesenchymal stem cells after renal transplantation: a prospective, non-randomized study[J]. Oncotarget，2016，7(11):12089-101.

[4] 梁 濤，蔡 明，李州利，等.活體供腎與尸體供腎：1個(gè)器官移植中心2年65:169例腎移植效果比較[J]. 中國(guó)組織工程研究與臨床康復(fù)，2010，14(31):5717-20

[5] Pirim I,Soyoz M,Ayna T K,et al. De novo produced anti-human leukocyte antigen antibodies relation to alloimmunity in patients with chronic renal failure[J]. Genet Test Mol Biomarkers，2015, 19(6):335-8.

[6] Konvalinka A, Tinckam K.Utility of HLA antibody testing in kidney transplantation[J]. J Am Soc Nephrol，2015, 26(7):1489-502.

[7] Schlaf G, Pollok-Kopp B, Altermann W W. Sensitive solid-phase detection of donor-specific antibodies as an aid highly relevant to improving allograftoutcomes[J]. Mol Diagn Ther，2014, 18(2):185-201.

[8] Wiwattanathum P, Ingsathit A, Thammanichanond D, et al. Significance of HLA antibody detected by PRA-Bead method in kidney transplant outcomes[J]. Transplant Proc, 2016, 48(3):761-5.

[9] Jun K W, Kim M H, Hwang J K, et al. Impact of pretransplant panel-reactive antibody level on renal graft survival in patients with a negative crossmatch and no donor-specific antibody[J]. Transplant Proc，2016, 48(3):770-2.

[10] Krogstrup N V, Bibby B M, Aulbjerg C, et al. A new method of modelling early plasma creatinine changes predicts 1-year graft function after kidney transplantation[J]. Scand J Clin Lab Invest，2016, 76(4):319-23.

[11] 邢 利，曲青山，蔣 欣，等. 腎移植術(shù)后早期感染類型分析[J]. 中華醫(yī)院感染學(xué)雜志，2013，23(12):2875-7.

[12] Li J J. Report: Clinical characteristics and treatment experience report of severe pulmonary infection after renal transplantation[J]. Pak J Pharm Sci，2015, 28(4):1559-62.

Before surgery CDC test results and the internal relationship of clinical for cadaveric donor and living related donor kidney transplantation

Zhong Tao1, Liao Guiyi2, Xu Wei1, et al

(1DeptofBloodTransfusion，2DeptofUrology，TheFirstAffiliatedHospitalofAnhuiMedicalUniversity，Hefei230022)

To analyze the effect of the complement-dependent cytotoxicity (CDC) crossmatch and the internal relationship with the clinical results.The results of the cadaveric donor before kidney transplantation surgery CDC test with respect to the living related donors transplantation were significantly higher (P<0.05). After transplantation, for the death of the recipient(graft loss), graft rejection(incidence of delay recovery), cadaveric donor kidney transplantation group were significantly higher than that of living related donor kidney transplantation group(P<0.05). The deceased donor kidney transplantation in the event of the death(graft loss),graft rejection(delay recovery) and lung infections these adverse events CDC test resulted in more than 9%,which was significantly higher than the clinical adverse events that had not occurred;living donor kidney transplant recipients in the event of the death(graft loss),graft rejection(delay recovery) and lung infections these adverse events CDC test resulted in more than 4%,which was also higher than the clinical adverse event which had not occurred.The lower results of the preoperative CDC test should be selected for the two different sources transplant recipient of the kidney transplant.Key words cadaveric donor; living related donor; adverse event；crossmatch; kidney transplantation

安徽省自然科學(xué)基金(編號(hào)：1508085SMH226)

安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院1輸血科、2泌尿外科，合肥 230022

鐘 濤，男，碩士，主管技師； 卞茂紅，男，副教授，主任技師，碩士生導(dǎo)師，責(zé)任作者，E-mail:mhbian@126.com

時(shí)間：2016-10-12 13:23:00

http://www.cnki.net/kcms/detail/34.1065.R.20161012.1323.036.html

R 699.2

A

1000-1492(2016)11-1704-04

10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2016.11.036

2016-08-05接收