Tim 3對(duì)poly(I ∶C)介導(dǎo)的小鼠Kupffer細(xì)胞分泌細(xì)胞因子的影響

牛 堅(jiān)，王 月，王人顥，劉 斌

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Tim 3對(duì)poly(I ∶C)介導(dǎo)的小鼠Kupffer細(xì)胞分泌細(xì)胞因子的影響

牛 堅(jiān)，王 月，王人顥，劉 斌

目的 探討T細(xì)胞免疫球蛋白及黏蛋白家族-3(Tim 3)對(duì)poly(I ∶C)活化的小鼠肝Kupffer細(xì)胞調(diào)節(jié)作用并探討其相關(guān)機(jī)制。方法 將真核表達(dá)質(zhì)粒pcDNA3.1-Tim 3轉(zhuǎn)染小鼠肝Kupffer細(xì)胞，以Realtime PCR和Western blot法驗(yàn)證Tim 3在小鼠肝Kupffer細(xì)胞的表達(dá)。通過ELISA法檢測(cè)質(zhì)粒pcDNA3.1-Tim 3，并使用Tim 3阻斷型抗體和核轉(zhuǎn)錄因子kappa B(NF-κB)抑制性配體對(duì)poly(I ∶C)活化的小鼠肝Kupffer細(xì)胞因子[腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)]產(chǎn)生影響，Western blot法檢測(cè)NF-κB p65、IκBα蛋白表達(dá)。結(jié)果 Tim 3抑制小鼠肝Kupffer細(xì)胞分泌炎性因子TNF-α、IL-6、IL-1β，Western blot結(jié)果顯示其降低小鼠肝Kupffer細(xì)胞NF-κB p65蛋白和提高IκBα蛋白表達(dá)。結(jié)論 Tim 3通過NF-κB通路參與了poly(I:C)誘導(dǎo)小鼠肝Kupffer細(xì)胞活化的調(diào)節(jié)。

Tim 3；Kupffer細(xì)胞；小鼠

聚肌胞苷酸(poly I ∶C)是一種雙鏈RNA病毒模擬物，能與 Toll樣受體3(Toll-like receptor,TLR3)結(jié)合，后者主要表達(dá)在巨噬細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞上。位于肝臟的巨噬細(xì)胞又稱Kupffer細(xì)胞，研究[1-2]表明，poly I ∶C能誘導(dǎo)肝Kupffer細(xì)胞的過度活化，產(chǎn)生很多種炎性因子。最近實(shí)驗(yàn)顯示T細(xì)胞免疫球蛋白黏蛋白分子-3( T cells immunoglobulin and mucin family-3,Tim 3)是炎癥反應(yīng)的一種重要調(diào)節(jié)分子，提供抑制性信號(hào)，對(duì)Kupffer細(xì)胞活化有重要的調(diào)控作用[3]。該研究首先通過將表達(dá)Tim 3的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染入小鼠Kupffer細(xì)胞，檢測(cè)其產(chǎn)生炎性因子的變化，進(jìn)一步研究產(chǎn)生這些改變的機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及實(shí)驗(yàn)材料 6～8周齡 SPF級(jí)健康Balb/C小鼠，22～24 g，購自中國科學(xué)院上海實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。真核表達(dá)載體pcDNA3.1-Tim 3由Sanchez-Fueyo A教授贈(zèng)送。兔抗鼠Tim 3抗體以及同型對(duì)照抗體，核轉(zhuǎn)錄因子kappa B (nuclear factor of kappa B,NF-κB)p65單抗、NF-κB抑制蛋白α(NF-κB inhibitor alpha,IκBα)單抗購自美國Santa Cruze公司； LipofectamineTM2000購自美國Invitrogen公司；poly(I ∶C)、NF-κB抑制劑PDTC購自美國Sigma公司；小鼠腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor,TNF-α)、白介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、白介素-6(interleukin-6,IL-6)ELISA檢測(cè)試劑盒購自美國eBiosence 公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 Kupffer細(xì)胞分離、培養(yǎng) 參照文獻(xiàn)[4]方法對(duì)小鼠肝臟Kupffer細(xì)胞進(jìn)行分離、純化。培養(yǎng)液RPMI 1640中含10%小牛血清，于37 ℃、5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

1.2.2 檢測(cè)poly(I ∶C)介導(dǎo)的小鼠肝臟Kupffer細(xì)胞Tim 3的表達(dá) 小鼠肝臟Kupffer細(xì)胞調(diào)整濃度至1×105/ml，接種于24孔培養(yǎng)板中，37 ℃、5% CO2培養(yǎng)過夜；加入終濃度為0、10、20、50 ng/ml poly(I ∶C)繼續(xù)培養(yǎng)24 h，收集細(xì)胞用于Realtime PCR法檢測(cè)Tim 3的表達(dá)。Tim 3上游引物：5′-TTGACCCTGGCACTTATC-3′，下游引物：5′-ATGGAGCATTTCAATGTAGCAT-3′；GAPDH上游引物：5′-ACTTTGGCATTGTGGAAGG-3′，下游引物：5′-GATGCAGGGATGATGTTCT-3′。具體操作步驟見參考文獻(xiàn)[5]。同時(shí)Western blot檢測(cè)Tim 3蛋白的表達(dá)。

1.2.3 小鼠Kupffer細(xì)胞轉(zhuǎn)染質(zhì)粒pcDNA3.1-Tim 3后Tim 3的表達(dá) 將小鼠Kupffer細(xì)胞懸液接種于24孔板上，接種密度為1×105個(gè)/孔，放入37 ℃、5% CO2培養(yǎng)。轉(zhuǎn)染前更換成不含血清的RPMI-1640，采用LipofectamineTM2000脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑，按使用說明書進(jìn)行轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)。轉(zhuǎn)染質(zhì)粒后的細(xì)胞孵育6 h換成正常培養(yǎng)液24 h，收集細(xì)胞。Realtime PCR法檢測(cè)Tim 3在mRNA水平的變化，具體步驟如參考文獻(xiàn)[5]。Western blot法檢測(cè)Tim 3在蛋白水平的變化，一抗10 ml(1 ∶1 000稀釋)室溫孵育2 h，二抗10 ml(1 ∶5 000稀釋)室溫孵育2 h后具體步驟如參考文獻(xiàn)[5]。

1.2.4 Tim 3過表達(dá)對(duì)poly(I ∶C)活化小鼠Kupffer細(xì)胞炎性因子分泌的影響 將1.2.3轉(zhuǎn)染質(zhì)粒pcDNA3.1-Tim 3的Kupffer細(xì)胞，調(diào)整濃度至5×104/ml，接種于96孔培養(yǎng)板中，每組3個(gè)復(fù)孔，37 ℃、5% CO2培養(yǎng)過夜；加入poly(I ∶C)至終濃度50 ng/ml，于24 h后收集培養(yǎng)上清液用于TNF-α、IL-6 、IL-1β檢測(cè)。具體步驟如參考文獻(xiàn)[5]。

1.2.5 Western blot法檢測(cè)Tim 3對(duì)小鼠的Kupffer細(xì)胞NF-κB P65蛋白表達(dá)的影響 收集1.2.3中的細(xì)胞裂解液，Western blot法檢測(cè)NF-κB P65蛋白水平的變化，操作過程如參考文獻(xiàn)[5]。一抗10 ml(1 ∶2 000)室溫孵育2 h，二抗10 ml(1 ∶4 000)室溫孵育2 h。

1.2.6 抑制NF-κB通路后對(duì)Tim 3抑制小鼠Kupffer細(xì)胞因子產(chǎn)生的影響 將小鼠Kupffer細(xì)胞加入吡咯烷二硫基甲酸鹽(PDTC)至終濃度30 μmol/L，預(yù)處理0.5 h，轉(zhuǎn)染質(zhì)粒pcDNA3.1-Tim 3，接種于96孔培養(yǎng)板中；最后加入poly(I ∶C)至終濃度50 ng/ml，于24 h收集培養(yǎng)上清液，ELISA法檢測(cè)細(xì)胞因子TNF-α、IL-1β、IL -6 含量。檢測(cè)方法如參考文獻(xiàn)[5]。

1.2.7 抑制NF-κB通路對(duì)封閉Tim 3后小鼠Kupffer細(xì)胞因子產(chǎn)生的影響 將轉(zhuǎn)染 pcDNA3.1-Tim 3的Kupffer細(xì)胞，調(diào)整濃度至5×104/ml，接種于96孔培養(yǎng)板中；37 ℃、5% CO2培養(yǎng)過夜；棄去原有培養(yǎng)基，加入兔抗鼠Tim-3單克隆抗體或同型對(duì)照羊IgG 5 ng/ml的培養(yǎng)基，同時(shí)加入PDTC至終濃度30 μmol/L，培養(yǎng)24 h收集上清液用于TNF-α、IL-1β、IL-6檢測(cè)。檢測(cè)方法如參考文獻(xiàn)[5]。

1.2.8 細(xì)胞培養(yǎng)及分組 細(xì)胞用含10%的小牛血清RPMI 1640常規(guī)培養(yǎng)，實(shí)驗(yàn)所用細(xì)胞均處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，分成3組，包括正常對(duì)照組(僅加等量轉(zhuǎn)染試劑)、pcDNA3.1-Tim 3組和pcDNA3.1組，每組細(xì)胞設(shè)3個(gè)復(fù)孔。

2 結(jié)果

2.1 光鏡下Kupffer細(xì)胞形態(tài)觀察 分離出的Kupffer細(xì)胞隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)，細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)會(huì)發(fā)生改變。剛分離的Kupffer細(xì)胞懸浮于培養(yǎng)液中，呈圓球形，具有很強(qiáng)的折光性，形態(tài)、大小較一致；培養(yǎng)0.5 h后細(xì)胞黏附培養(yǎng)板底部，部分細(xì)胞開始貼壁生長(zhǎng)，培養(yǎng)6 h后，大多數(shù)細(xì)胞已貼壁生長(zhǎng)，少數(shù)細(xì)胞開始伸展；24 h后，貼壁細(xì)胞已完全伸展，體積明顯增大，細(xì)胞形態(tài)呈典型星形、多邊形或梭形，見圖1。

圖1 原代培養(yǎng)小鼠Kupffer細(xì)胞 ×200

2.2 poly(I ∶C)介導(dǎo)的小鼠Tim 3的表達(dá) Realtime PCR法檢測(cè)結(jié)果顯示10 ng/ml(F=20.23、P=0.019)、20 ng/ml(F=29.16、P=0.011)和50 ng/ml(F=36.37、P=0.002)的 poly(I:C)介導(dǎo)的小鼠Kupffer細(xì)胞的Tim 3 mRNA含量較0 ng/ml poly(I ∶C)組顯著增高(P<0.05)，見圖2。Western blot法檢測(cè)結(jié)果顯示10 ng/ml(F=20.16、P=0.018)、20 ng/ml(F=28.26、P=0.014)和50 ng/ml(F=36.87、P=0.002)的 poly(I ∶C)介導(dǎo)的小鼠Kupffer細(xì)胞的Tim 3蛋白表達(dá)較0 ng/ml poly(I ∶C)組顯著增高(P<0.05)，見圖3。

圖2 Tim 3 mRNA的相對(duì)表達(dá)水平

圖3 Tim 3蛋白的相對(duì)表達(dá)水平

2.3 轉(zhuǎn)染質(zhì)粒pcDNA3.1-Tim 3小鼠Kupffer細(xì)胞Tim 3的表達(dá) Realtime PCR和Western blot分別檢測(cè)正常對(duì)照組、pcDNA3.1組和pcDNA3.1-Tim 3組的Tim 3 mRNA的相對(duì)表達(dá)量，與pcDNA3.1組、正常對(duì)照組比較，pcDNA3.1-Tim 3組的Tim 3 mRNA表達(dá)顯著增加，pcDNA3.1組mRNA表達(dá)量為其21%(F=46.17，P=0.012)，正常對(duì)照組mRNA表達(dá)量為其12%(F=66.35，P=0.002)，見圖4。pcDNA3.1-Tim 3組中Tim 3蛋白的表達(dá)明顯高于正常對(duì)照組，經(jīng)灰度掃描分析，pcDNA3.1組蛋白表達(dá)量為其31%(F=39.24，P=0.019)，正常對(duì)照組蛋白表達(dá)量為其32%(F=36.35，P=0.019)。見圖5。

2.4 Tim 3過表達(dá)對(duì)poly(I ∶C)活化小鼠Kupffer細(xì)胞的炎性因子表達(dá)影響 ELISA結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)染質(zhì)粒pcDNA3.1-Tim 3的小鼠Kupffer細(xì)胞經(jīng)poly(I ∶C)活化后炎性因子表達(dá)發(fā)生了變化，pcDNA3.1-Tim 3組 的TNF-α、IL-6、IL-1β分泌炎性因子較pcDNA3.1組(F=30.16、P=0.023)、正常對(duì)照組(F=33.36、P=0.021)明顯下降，這表明Tim 3能抑制Kupffer細(xì)胞的活化，見圖6。

圖4 Tim 3 mRNA的相對(duì)表達(dá)水平

圖5 Tim 3蛋白的相對(duì)表達(dá)水平(n=3)

A：pcDNA3.1-Tim 3組；B：pcDNA3.1組；C：正常對(duì)照組；與正常對(duì)照組比較：*P<0.05

圖6 Tim 3過表達(dá)對(duì)小鼠Kupffer細(xì)胞炎性因子表達(dá)的影響

2.5 Tim 3對(duì)小鼠Kupffer細(xì)胞的NF-κB P65、IκBα蛋白表達(dá)的影響 pcDNA3.1-Tim 3轉(zhuǎn)染小鼠Kupffer細(xì)胞后經(jīng)poly(I ∶C)刺激，Western blot檢測(cè)顯示，pcDNA3.1-Tim 3組細(xì)胞的p65蛋白的表達(dá)從poly(I ∶C)刺激6 h后均低于pcDNA3.1組、正常對(duì)照組，見圖7；而IκBα的表達(dá)量與之相反，隨著時(shí)間的延長(zhǎng)其表達(dá)量逐漸升高，從poly(I ∶C)刺激6 h后高于正常對(duì)照組細(xì)胞，見圖8?？梢奣im 3抑制了NF-κB通路的活化。

圖7 Tim 3對(duì)Kupffer細(xì)胞NF-κB P65蛋白表達(dá)的影響

與正常對(duì)照組比較：*P<0.05

圖8 Tim 3對(duì)Kupffer細(xì)胞IκBα蛋白表達(dá)的影響

2.6 抑制NF-κB通路后對(duì)Tim 3上調(diào)小鼠Kupffer細(xì)胞炎性因子產(chǎn)生的影響 NF-κB抑制性配體PDTC預(yù)處理轉(zhuǎn)染質(zhì)粒pcDNA3.1-Tim 3的小鼠Kupffer細(xì)胞30 min后，經(jīng)poly(I ∶C) 刺激后，ELISA結(jié)果顯示PDTC預(yù)處理組TNF-α、IL-6、IL-1β分泌較正常對(duì)照組無明顯變化，見圖9，PDTC未處理組TNF-α、IL-6、IL-1β分泌減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見圖6?？梢奣im 3通過NF-κB通路抑制炎性細(xì)胞因子分泌。

圖9 NF-κB通路對(duì)小鼠Kupffer細(xì)胞炎性因子表達(dá)的影響

2.7 阻斷NF-κB通路逆轉(zhuǎn)Tim 3阻斷型抗體對(duì)poly(I ∶C)介導(dǎo)的Kupffer細(xì)胞分泌細(xì)胞因子的促進(jìn)作用 為了研究阻斷Tim 3是否通過NF-κB通路影響TNF-α、IL-6、IL-1β的分泌， 利用PDTC預(yù)處理pcDNA3.1-Tim 3組30 min后，然后加入Tim 3阻斷型抗體處理，poly(I ∶C)刺激后，收集培養(yǎng)上清液，ELISA結(jié)果顯示，PDTC未處理組，Tim 3阻斷型抗體組與未加Tim 3阻斷型抗體組比較，TNF-α、IL-6、IL-1β的分泌增加(P<0.05)，見圖10A；而PDTC預(yù)處理組，Tim 3阻斷型抗體組與未加Tim 3阻斷型抗體組比較，TNF-α、IL-6、IL-1β分泌差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見圖10B。

3 討論

Kupffer細(xì)胞是指存在于肝臟血竇內(nèi)皮間的巨噬細(xì)胞，活性程度很高，在細(xì)菌脂多糖等激活下，可以釋放多種細(xì)胞因子，從而激活多種炎性細(xì)胞，共同在肝臟的炎癥反應(yīng)中發(fā)揮作用[6-7]。肝衰竭綜合征的臨床特點(diǎn)和結(jié)局取決于Kupffer細(xì)胞的比例、釋放炎性因子的種類[8]。因而，深入肝巨噬細(xì)胞的活化及調(diào)控機(jī)制對(duì)治療肝損失具有重要意義。

Toll樣受體(Toll like receptor,TLR)蛋白代表了一類保守的受體家族，分別識(shí)別不同的抗原。其中TLR3能專一性地識(shí)別poly(I ∶C)，激活NF-κB通路，促發(fā)炎癥因子及輔助刺激分子的釋放，調(diào)節(jié)機(jī)體單核/巨噬細(xì)胞。TLR下游信號(hào)通路的關(guān)鍵節(jié)點(diǎn)就是NF-κB蛋白，在免疫反應(yīng)中發(fā)揮重要作用，最突出的生物學(xué)功能是促進(jìn)細(xì)胞因子合成和釋放。poly(I ∶C)通過細(xì)胞膜表面的TLR3激活炎性細(xì)胞，核內(nèi)NF-κB通路被激活，合成大量炎性細(xì)胞因子并釋放到胞外，趨化粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞，同時(shí)使得毛細(xì)血管通透性增加，引起炎癥反應(yīng)[9-10]。

圖10 阻斷NF-κB通路逆轉(zhuǎn)Tim 3阻斷型抗體對(duì)Kupffer細(xì)胞分泌炎性因子的促進(jìn)作用

A：PDTC未預(yù)處理組；B：PDTC預(yù)處理組；與Tim 3阻斷型抗體預(yù)處理比較：*P<0.05

Tim 3屬于T細(xì)胞免疫球蛋白及黏蛋白(Tim)家族成員，是活化的Th1細(xì)胞表面的共刺激分子[11]。Tim 3 和配體Gal9結(jié)合構(gòu)成Tim 3-Gal9 信號(hào)通路，引起T 細(xì)胞的凋亡，并能激活天然免疫細(xì)胞，從而在先天性免疫反應(yīng)和獲得性免疫反應(yīng)中發(fā)揮重要作用。Tim 3分子對(duì)Th1細(xì)胞起負(fù)性調(diào)節(jié)作用，參與了特異性免疫應(yīng)答。近年來研究[12-14]顯示，Tim 3在巨噬細(xì)胞、DC、肥大細(xì)胞等天然免疫細(xì)胞表面有表達(dá)，在先天性免疫反應(yīng)和獲得性免疫反應(yīng)中發(fā)揮重要作用。

在Kupffer細(xì)胞中，Tim 3通路是否與poly(I ∶C)/ TLR3活化NF-κB蛋白的調(diào)節(jié)有關(guān)聯(lián)，本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示poly(I ∶C)能夠誘導(dǎo)小鼠肝Kupffer細(xì)胞中Tim 3 mRNA的表達(dá)，并且隨著poly(I ∶C)濃度的增加，Tim 3 mRNA明顯升高。

鑒于Tim 3基因在poly(I ∶C)活化的小鼠肝Kupffer細(xì)胞中的表達(dá)及與NF-κB通路間的有調(diào)控關(guān)系，本研究應(yīng)用真核表達(dá)載體pcDNA3.1-Tim 3轉(zhuǎn)染小鼠肝臟Kupffer細(xì)胞，Realtime PCR及Western blot法檢測(cè)結(jié)果表明構(gòu)建的pcDNA3.1-Tim 3質(zhì)粒有效表達(dá)Tim 3 mRNA和蛋白。用pcDNA3.1-Tim 3調(diào)高小鼠肝臟Kupffer細(xì)胞Tim 3的表達(dá)后，從細(xì)胞水平來觀察相關(guān)細(xì)胞因子的變化，實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示TNF-α、IL-6、IL-1β水平顯著下降，表明Tim 3抑制小鼠肝臟Kupffer細(xì)胞炎性因子的分泌。Western blot檢測(cè)顯示，pcDNA3.1-Tim 3組細(xì)胞的NF-κB蛋白的表達(dá)明顯低于對(duì)照組細(xì)胞，可見Tim 3抑制了NF-κB通路的活化。

為了進(jìn)一步探討過表達(dá)Tim 3通過NF-κB通路抑制TNF-α、IL-6、IL-1β的分泌，利用NF-κB抑制性配體預(yù)處理小鼠Kupffer細(xì)胞后轉(zhuǎn)染pcDNA3.1-Tim 3，經(jīng)poly(I ∶C)活化，顯示NF-κB抑制性配體未處理組與處理組細(xì)胞比較，TNF-α、IL-6、IL-1β的分泌明顯下調(diào)。

在上面研究的基礎(chǔ)上，為了明確阻斷Tim 3是否通過NF-κB通路影響TNF-α、IL-6、IL-1β的分泌，利用NF-κB抑制性配體預(yù)處理小鼠Kupffer細(xì)胞，然后加入Tim 3阻斷型抗體處理，經(jīng)poly(I ∶C)活化后，NF-κB抑制性配體未處理組，Tim 3阻斷型抗體(+)組與Tim 3阻斷型抗體(-)組比較，TNF-α、IL-6、IL-1β的分泌增加；而NF-κB抑制性配體處理組，Tim 3阻斷型抗體(+)組與Tim 3阻斷型抗體(-)組比較，TNF-α、IL-6、IL-1β分泌差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，進(jìn)一步說明了Tim 3通過NF-κB通路抑制小鼠Kupffer細(xì)胞的炎性因子的分泌。

在本研究中，成功實(shí)現(xiàn)了采用真核表達(dá)質(zhì)粒pcDNA3.1-Tim 3轉(zhuǎn)染小鼠Kupffer細(xì)胞，并觀察到Tim 3通過NF-κB通路對(duì)poly(I ∶C)活化的小鼠Kupffer細(xì)胞的炎性因子分泌的抑制作用，本實(shí)驗(yàn)結(jié)果為進(jìn)一步深入闡明Kupffer細(xì)胞活化的調(diào)控機(jī)制提供了幫助，研究該分子靶標(biāo)對(duì)臨床診斷肝損傷進(jìn)程和治療有重要意義，有望為肝損傷的診斷和治療提供新思路。

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Tim 3 affecting mice liver Kupffer cells secretion by poly(I ∶C) activation

Niu Jian, Wang Yue, Wang Renhao, et al

(DeptofGeneralSurgery,TheFirstAffiliatedHospitalofXuzhouMedicalCollege,Xuzhou221002)

ObjectiveToinvestigatetheadjustmentroleofTcellimmunoglobulinandmucinfamily-3(Tim3)inKupffercellsactivationandtherelatedmechanism.MethodsTransfectedthepcDNA3.1-Tim3plasmidintoKupffercells.Tim3expressioninKupffercellwasexaminedbyRealtimePCRandWesternblot.PlasmidpcDNA3.1-Tim3,Tim3blockingantibodiesandNF-κBinhibitoryligandsonmiceliverKupffercellactivationfactor(TNF-α,IL-1β,IL-6)weremonitoredbyELISAtest.NF-κBandIκBαproteinswereexaminedbyWesternblot.ResultsTim3couldinhibitKupffercellsexpressionofTNF-α,IL-6,IL-1β.TheresultsshowedthatitreducedtheexpressionofNF-κBp65proteinandincreasedIκBαproteininthemouseliverKupffercells.ConclusionTim3isinvolvedintheregulationofKupffercellsactivationthroughNF-kappaBandIκBαprotein.

Tcellimmuneglobulinandmucinfamily-3;Kupffercell;mice

天晴肝病研究基金(編號(hào)：CFHPC20132020)；江蘇省333高層次人才培養(yǎng)(編號(hào)：Ⅲ-2290)；徐州市推動(dòng)科技創(chuàng)新專項(xiàng)資金項(xiàng)目(編號(hào)：KC14SX011)

徐州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院普外科，徐州 221002

牛 堅(jiān)，男，副教授，副主任醫(yī)師，責(zé)任作者，E-mail:njnj_001@163.com

http://www.cnki.net/kcms/detail/34.1065.R.20161012.1323.007.html

R 392

A

1000-1492(2016)11-1584-06

10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2016.11.007

2016-06-15接收